Artykuł badawczy

Wpływ wilgotnej, odsłoniętej maści na oparzenia na neowaskularyzację ran i egzosomalny mir-31-5p osocza u myszy z cukrzycą

623 wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/68649

⸱

26 sierpnia 2025

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Endocrinology, The Affiliated Hospital of Youjiang Medical University for Nationalities, 2Department of Cardiology, General Hospital of Central Theater Command, 3Key Laboratory for the Prevention and Treatment of Diabetic Chronic Wounds in Baise City, 4Key Laboratory of Metabolic Diseases in Baise City

* These authors contributed equally

W tym artykule

Podsumowanie

W artykule opisano, w jaki sposób maść na oparzenia narażona na wilgoć wspomaga gojenie się ran cukrzycowych poprzez dynamiczną regulację neowaskularyzacji ran cukrzycowych i ekspresji egzosomalnego mir-31-5p w osoczu.

Streszczenie

Maść na oparzenia narażona na wilgoć (MEBO) to tradycyjna medycyna chińska stosowana w leczeniu przewlekłych ran cukrzycowych; Jednak mechanizm leżący u podstaw tego zjawiska jest niejasny. Najnowsze dowody sugerują rolę egzosomów i funkcjonalnych miRNA w neowaskularyzacji ran. Tutaj naszym celem było zbadanie wpływu MEBO na neowaskularyzację ran i ekspresję egzosomalnego mir-31-5p w osoczu (pExo-mir-31-5p) u myszy z cukrzycą. W sumie 120 myszy C57BL / 6 zostało losowo podzielonych na grupę kontrolną bez cukrzycy (n = 24) i grupę z cukrzycą indukowaną streptozotocyną (n = 96), która została następnie losowo przydzielona do grup kontrolnych z cukrzycą, MEBO, beifuxin i MHY1485 (n = 24 każda). Utworzono pięć grup z modelami resekcji skóry o pełnej grubości, które były leczone odpowiednio solą fizjologiczną, solą fizjologiczną, MEBO, beifuxiną i MHY1485. W dniach 1, 7, 13 i 18 szybkość zamykania rany, gęstość mikronaczyń i poziomy ekspresji pExo-mir-31-5p, wraz z poziomami mRNA VPS4a i Rab27a oraz białka w tkankach rany, analizowano odpowiednio za pomocą ImageJ, barwienia hematoksyliną-eozyną (HE), ilościowej reakcji łańcuchowej polimerazy w czasie rzeczywistym (qPCR) i western blot (WB). Ponadto analizowano korelacje między ekspresją VPS4a, białka Rab27a, pExo-mir-31-5p a gęstością mikronaczyń. Odkryliśmy, że MEBO sprzyjało gojeniu się ran u myszy z cukrzycą (p < 0,050). Nasilał neowaskularyzację ran we wczesnych i środkowych stadiach gojenia się ran, ale hamował ją w późniejszym etapie (p < 0,050). MEBO zwiększało ekspresję mRNA i białka Vps4a i Rab27a w tkankach rany, a także pExo-mir-31-5p we wczesnych i pośrednich etapach gojenia, jednocześnie zmniejszając je w późniejszym etapie (p < 0,050). Co więcej, VPS4a, białko Rab27a, ekspresja pExo-mir-31-5p i gęstość mikronaczyń były dodatnio skorelowane u myszy leczonych MEBO (p < 0,050). Podsumowując, MEBO dynamicznie reguluje neowaskularyzację ran i ekspresję pExo-mir-31-5p u myszy z cukrzycą, zapewniając nowe teoretyczne wsparcie dla jego zastosowania klinicznego.

Wprowadzenie

Częstość występowania cukrzycy u starszych pacjentów jest wysoka i rośnie z roku na rok. Choroba jest związana z przewlekłymi ranami cukrzycowymi (CDW), które mają szkodliwy wpływ na zdrowie, funkcjonowanie i ogólną jakość życia pacjenta1. Zazwyczaj zamykanie ran obejmuje cztery odrębne fazy: hemostazę, stan zapalny, proliferację i reepitelializację2. Spośród nich najważniejsza jest faza proliferacyjna. We wczesnej fazie proliferacji komórki śródbłonka naczyń włosowatych namnażają się i migrują do rany, tworząc nowe naczynia i tworząc skomplikowaną sieć3. Jednak w późniejszych etapach gojenia się ran większość światła naczyń włosowatych ulega niedrożności, a mniejsza część przechodzi do małych tętnic i żył. U pacjentów z CDW utrata tkanki, martwica i zgorzel oraz różne poziomy stanu zapalnego i hiperglikemii zaburzają dynamiczną równowagę między angiogenezą a antyangiogenezą, opóźniając gojenie się ran, zwłaszcza gdy angiogeneza jest upośledzona 4,5,6. Maść na oparzenia narażona na wilgoć (MEBO) jest tradycyjną medycyną chińską stosowaną w leczeniu CDW, ale jej mechanizm pozostaje niejasny. Ostatnio wiele badań wykazało, że miRNA zawierające egzosomy mogą promować angiogenezę, a tym samym promować gojenie się ran cukrzycowych 7,8. Jednak niewiele badań badało związek między MEBO a miRNA przenoszonymi przez egzosomy. W związku z tym istnieje potrzeba ujawnienia mechanizmu, za pomocą którego MEBO stymuluje angiogenezę w CDW z perspektywy egzosomów i funkcjonalnych miRNA.

Egzosomy to kuliste błoniaste pęcherzyki uwalniane przez żywe komórki, o wielkości 30-200 nm, gęstości 1,1-1,2 g / ml i zawierające białka markerowe, takie jak CD81 i podatność na guz 101 (TSG101)9. Produkcja i wydzielanie egzosomów są podzielone na endosomalny kompleks sortowania wymagany do szlaków zależnych i niezależnych od ESCRT transportu (ESCRT). Najbardziej krytycznymi regulatorami w tych szlakach są homolog a sortowania białek wakuolarnych 4 (VPS4a) i białko związane z Ras Rab-27a (Rab27a)10,11,12. Vps4a działa jako ATPaza, katalizując proces przebudowy błony zależny od ESCRT, który reguluje wielkość egzosomu i szybkość powstawania egzosomów13,14. Rab27a jest niezbędną małą GTPazą, która reguluje dokowanie ciał wielopęcherzykowych do błony plazmatycznej15. Wydzielanie egzosomów jest ujemnie regulowane przez ssaczy cel kompleksu rapamycyny 1 (mTORC1)16, który jest aktywowany przez MHY1485 konkurencyjne wiązanie z domeną strukturalną ATP rapamycyny17. Ogólnie rzecz biorąc, może MHY1485 pośrednio hamować syntezę i wydzielanie egzosomów. Egzosomy można wykryć w prawie wszystkich płynach ustrojowych. Egzosomy osocza są bardziej produktywne niż egzosomy pochodzące z innych płynów ustrojowych18. Ponadto egzosomy chronią przenoszone przez siebie kwasy nukleinowe przed degradacją19.

MiRNA to małe niekodujące cząsteczki RNA, które regulują aktywność komórkową20. Egzosomy odkryto obficie w licznych miRNA kluczowych dla wzmocnienia angiogenezy ran, w szczególności mir-126, mir-125a i mir-31-5p. Poprzednie badanie wykazało, że egzosomy pochodzące z mezenchymalnych komórek macierzystych szpiku kostnego mir-126 z nadekspresją promowały proliferację, migrację i tworzenie rurki ludzkich komórek śródbłonka żyły pępowinowej in vitro poprzez transfer mir-12621. Inne badanie wykazało, że egzosomy wydzielane przez mezenchymalne komórki macierzyste pochodzące z ludzkiej tkanki tłuszczowej przenosiły mir-125a do komórek śródbłonka i promowały angiogenezę poprzez tłumienie inhibitora angiogennego delta-like 4 w ranach9. Yan i in. stwierdzili, że mir-31-5p załadowany do egzosomów mleka poprawił funkcje komórek śródbłonka in vitro, promował angiogenezę i przyspieszał gojenie się ran cukrzycowych in vivo22. Wśród tych miRNA, mir-31-5p był jedynym miRNA, który był znacznie obniżony w ranach myszy z cukrzycą w porównaniu z normalnymi ranami myszy22.

MEBO to tłusta maść, która może być stosowana w leczeniu ran opornych na leczenie, takich jak CDW23,24. Jednak mechanizm MEBO sprzyjający gojeniu się ran nie został wyjaśniony. Poprzednie badania wykazały, że MEBO sprzyja neowaskularyzacji ran poprzez zwiększenie ekspresji czynnika wzrostu śródbłonka naczyniowego u szczurów z cukrzycą25. Jednak tylko kilka badań zajęło się tą kwestią z perspektywy miRNA przenoszonych przez egzosomy. W tym badaniu, aby zbadać wpływ MEBO na CDW, wyindukowaliśmy model rany o pełnej grubości u myszy z cukrzycą przy użyciu streptozotocyny (STZ) i diety wysokotłuszczowej. Wykazaliśmy, że MEBO znacznie przyspiesza gojenie się ran u myszy z cukrzycą. Ponadto badano wpływ MEBO na gęstość mikronaczyń, poziomy ekspresji pExo-mir-31-5p, wraz z mRNA VPS4a i Rab27a oraz białkiem w tkankach rany. Dlatego postawiliśmy hipotezę, że MEBO promuje gojenie się ran poprzez regulację pExo-mir-31-5p w celu regulacji angiogenezy ran u myszy z cukrzycą. Schematyczny zarys projektu badania przedstawiono na rysunku 1.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

Wszystkie protokoły eksperymentalne na zwierzętach zostały zatwierdzone przez Komitet ds. Opieki nad Zwierzętami i Ich Wykorzystania na Uniwersytecie Medycznym Youjiang dla Narodowości w Baise w Chinach (2018051501). Wolne od specyficznych patogenów (SPF) samce myszy C57BL/6 (w wieku 7 tygodni) były trzymane w Centrum Zwierząt Laboratoryjnych SPF w Youjiang Medical College for Nationalities i karmione zwykłą lub wysokotłuszczową dietą i czystą wodą. Przez cały czas trwania badania temperatura w pomieszczeniu do karmienia zwierząt była utrzymywana na poziomie od 23 °C do 25 °C, wilgotność wynosiła od 40% do 60%, a cykl światła i ciemności wynosił 12 godzin. Opieka nad zwierzętami była zapewniona zgodnie z wytycznymi amerykańskich Narodowych Instytutów Zdrowia i Chińskiego Narodowego Instytutu Zdrowia (Pekin, Chiny). Wszystkie interwencje chirurgiczne zostały przeprowadzone w znieczuleniu pentobarbitalem sodu (0,3%, 50 mg/kg) przy użyciu standardowego protokołu ustalonego w naszym laboratorium. Dołożono wszelkich starań, aby zmniejszyć liczbę wykorzystywanych zwierząt i zminimalizować dyskomfort zwierząt. Wszystkie sekcje tego raportu są zgodne z wytycznymi ARRIVE dotyczącymi zgłaszania badań na zwierzętach.

Model i leczenie ran u myszy
W sumie 120 myszy zostało losowo przydzielonych do grupy kontrolnej bez cukrzycy (NDB-CTR; n = 24) lub cukrzycowej (n = 96). Aby symulować ludzką cukrzycę typu 2, myszy w grupie z cukrzycą były karmione dietą wysokotłuszczową, rafinowaną cukrem przez 4 tygodnie, a następnie wstrzykiwano dootrzewnowo (ip) STZ (100 mg / kg), raz dziennie, przez 2 kolejne dni po poście przez 16 godzin. Poziom glukozy we krwi na czczo mierzono w 5. i 6. dobie po wstrzyknięciu STZ. Myszy z dwukrotnie wyższymi wartościami stężenia glukozy we krwi na czczo większymi niż 16,7 mmol / L i z objawami takimi jak polifagia, polidypsja, wielomocz i utrata masy ciała zostały uznane za udane modele cukrzycy26. Po 1 tygodniu ogolono włosy na grzbiecie każdej myszy i po dootrzewnowym podaniu pentobarbitalu sodu (0,3%, 50 mg/kg) na grzbiecie każdej myszy powstała okrągła rana skórna o pełnej grubości (średnica = 15 mm). Myszy w grupie z cukrzycą zostały losowo przydzielone do grup MEBO, BFX (beifuxin), DB-CTR (kontrola cukrzycowa) lub MHY1485 (MHY). Myszy w grupach MEBO i BFX leczono MEBO (0,2 g/cm2) i żelem BFX (0,2 g/cm2) nakładanymi na ranę odpowiednio raz dziennie. Żel BFX, którego ogólna nazwa to żel z bydlęcym podstawowym czynnikiem wzrostu fibroblastów, jest lekiem miejscowym stosowanym w leczeniu ran przewlekłych27. Myszy w grupach NDB-CTR, DB-CTR i MHY leczono solą fizjologiczną. Grupa MHY była również leczona MHY1485 (10 mg/kg, ip) przez 2 kolejne dni. Myszom z cukrzycą wstrzykiwano podskórnie insulinę w dawce 2-4 j.m./kg raz dziennie w celu kontrolowania poziomu glukozy we krwi.

Pobieranie próbek
W dniach 1, 7, 13 i 18 sześć myszy w każdej grupie zostało losowo wybranych do eutanazji przez zwichnięcie szyjki macicy, a próbki tkanek naskórka w kształcie pierścienia, w tym rany, pobrano w odległości 0,5 cm od krawędzi rany za pomocą sterylnych nożyczek do tkanek. Następnie pobrano tkanki rany do barwienia HE, analizy qPCR i testów WB. Próbki krwi pobrano od myszy z grup DB-CTR i MEBO metodą retroorbitalną w znieczuleniu pentobarbitalem sodu. Próbki krwi zmieszano z heparyną w probówkach antykoagulantu i odwirowano przy 3000 x g przez 15 minut w celu odzyskania supernatantu osocza. Wszystkie próbki przechowywano w temperaturze -80 °C. Aby obliczyć szybkość zamykania się rany, użyto aparatu cyfrowego do uchwycenia zdjęć gojenia się ran w ustalonym punkcie czasowym i w równej odległości ze skalą z podziałką po boku. Obszar rany został zmierzony za pomocą oprogramowania ImageJ. Szybkość zamykania ran obliczono w następujący sposób:

szybkość zamykania ran (%) = [W1-Wn] / W1 x 100%

gdzie W1 i Wn odnoszą się do obszarów ran odpowiednio w dniu 1 i n.

Test histopatologiczny
Barwienie HE wykonano w celu dynamicznej obserwacji patologicznego gojenia się ran. Po utrwaleniu 4% roztworem paraformaldehydu przez 16 godzin, tkanki rany odwodniono, zatopiono w parafinie, a następnie pocięto na odcinki o wielkości 3 μm. Barwienie HE wykonywano na szkiełkach tkankowych. Aby zbadać gęstość mikronaczyń w tkankach rany, preparaty tkankowe zobrazowano za pomocą mikroskopu optycznego. Aby określić ilościowo gęstość mikronaczyń w każdej próbce, wybraliśmy obszar o największej gęstości kapilarnej pod mikroskopem 10x, a następnie wybraliśmy i sfotografowaliśmy trzy nienakładające się obszary pod mikroskopem 20x. Gęstości mikronaczyń obliczono i uśredniono za pomocą ImageJ.

Izolacja i charakterystyka egzosomów osocza
Ultrawirowanie przeprowadzono w celu wyizolowania egzosomów osocza zgodnie z opublikowanym protokołem z niewielkimi modyfikacjami28. Krótko mówiąc, 2 ml osocza odwirowywano przy 2000 x g w temperaturze 4 °C przez 30 minut. Supernatant ponownie odwirowano w temperaturze 10 000 x g w temperaturze 4 °C przez 45 minut w celu usunięcia większych pęcherzyków. Supernatant przefiltrowano przez membranę filtracyjną 0,45 μm, a następnie zebrano filtrat. Przesącz był następnie odwirowywany przy 100 000 x g w temperaturze 4 °C przez 70 minut. Po usunięciu supernatantu, osad został ponownie zawieszony w 10 ml wstępnie schłodzonego 1x PBS i odwirowany w temperaturze 4 °C, 100 000 x g, przez 70 minut. Supernatant usunięto, a osad ponownie zawieszono w 150 μl wstępnie schłodzonego 1x PBS i przechowywano w temperaturze -80 °C. Aby potwierdzić egzosomy osocza zebrane powyżej, użyliśmy transmisyjnej mikroskopii elektronowej (TEM) do określenia morfologii egzosomów, systemu cytometrii nanoprzepływowej do analizy wielkości i stężenia egzosomów oraz WB do wykrycia poziomów ekspresji markerów egzosomów CD81 i TSG101.

Ekstrakcja RNA, odwrotna transkrypcja (RT) i qPCR
qPCR przeprowadzono w celu ilościowego określenia poziomów ekspresji mRNA Vps4a, Rab27a i pExo-mir-31-5p. Tkanki rany pobrano w celu ekstrakcji całkowitego RNA za pomocą odczynnika do ekstrakcji RNA. Całkowite stężenie RNA w zakresie 400-700 ng/μl uznano za dopuszczalne. Próbki RNA poddano odwrotnej transkrypcji na cDNA przy użyciu odwrotnej transkryptazy z dsDNazą zgodnie z instrukcjami producenta. qPCR przeprowadzono przy użyciu SYBR Green qPCR Mix (No ROX). Jeśli chodzi o mir-31-5p, RNA z egzosomów osocza wyekstrahowano za pomocą mini zestawu, odwrócono transkrybowane za pomocą zestawu do syntezy pierwszej nici cDNA i amplifikowano za pomocą SYBR Green qPCR Master Mix. Ekspresje mRNA i miRNA analizowano metodą 2-ΔΔCt w stosunku do odpowiednio β-aktyny i cel-mir-39. Zastosowane startery przedstawiono w tabeli 1.

Plama zachodnia
Test WB wykorzystano do wykrycia poziomów ekspresji białek Vps4a i Rab27a, a także poziomów markerów egzosomów CD81 i TSG101. Całkowite poziomy białka w tkankach rany i egzosomach osocza ekstrahowano za pomocą buforu do lizy RIPA, a stężenie białka określono za pomocą zestawu do oznaczania białek kwasu bicinchoninowego. W sumie 50 μg białka oddzielono dodecylosiarczanem sodu-poliakrylamidem. Po osuszeniu na błonach z polifluorku winylidenu, błony zablokowano albuminą surowicy bydlęcej, a następnie inkubowano w temperaturze 4 °C przez noc z przeciwciałami przeciwko Vps4a (1:3000), Rab27a (1:1000), dehydrogenazie gliceraldehydo-3-fosforanowej (GAPDH) (1:5000), CD81 (1:3000), TSG101 (1:3000), a następnie inkubowano z przeciwciałami drugorzędowymi, sprzężoną z peroksydazą IgG anty-królika (1:3000), w temperaturze 37 °C przez 1 godzinę. Membrany zostały uwidocznione przy użyciu ulepszonego zestawu do chemiluminescencji.

Analiza statystyczna
Wszystkie dane przedstawione w tym badaniu zostały przeanalizowane pod kątem istotności statystycznej przy użyciu oprogramowania SPSS. Wszystkie wyniki uzyskane w tych analizach zostały zobrazowane za pomocą oprogramowania GraphPad Prism. Różnice między obiema grupami badano za pomocą testu t dla próby niezależnej. W przypadku porównań wielu grup zastosowano jednokierunkową analizę wariancji dla danych o wariancji jednorodnej, podczas gdy test Welcha zastosowano do danych o wariancji heterogenicznej. Ponadto użyliśmy testu najmniejszej istotnej różnicy do porównania parami danych o równej wariancji oraz testu T2 Tamhane'a do danych o nierównej wariancji. Dane ilościowe przedstawiono jako średnią ± odchylenie standardowe. Korelacje analizowano za pomocą analizy korelacji Spearmana dla zmiennych o rozkładzie nienormalnym i opisano je jako współczynniki korelacji i 95% przedziały ufności. P < 0,050 uznano za statystycznie istotne. Wszystkie eksperymenty powtórzono co najmniej trzy razy.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

MEBO przyspiesza gojenie ran u myszy z cukrzycą
Aby zweryfikować skuteczność MEBO w leczeniu ran cukrzycowych, opracowano model rany cukrzycowej i wykonano zdjęcia w dniach 1, 7, 13 i 18. Rany w każdej grupie goiły się stopniowo w czasie (Rysunek 2A). Rany w grupie NDB-CTR zagoiły się całkowicie do 18. dnia. Rany w grupie MEBO goiły się najszybciej spośród ran cukrzycowych, tworząc w 7. dniu kilka różowych ziaren tkanki ziarninowej, a następnie, po odpadnięciu strupa w...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

CDW, powikłanie cukrzycy, może prowadzić do znacznej śmiertelności i niepełnosprawności i często wiąże się z zaburzeniami naczyniowymi29. MEBO jest skuteczny w leczeniu CDW; Jednak jego mechanizm leżący u podstaw jest niejasny30. Dlatego naszym celem było zbadanie go z perspektywy egzosomów i funkcjonalnych miRNA. W tym badaniu stwierdziliśmy, że szybkość zamykania ran i gęstość mikronaczyń w grupie MEBO były najwyższe we wszystkich punktach czasowych u myszy z cukrzycą. Wy...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy oświadczają, że nie mają sprzecznych interesów.

Podziękowania

Badanie to było wspierane przez Narodową Fundację Nauk Przyrodniczych Chin w ramach grantu [numer 81960875], Fundację Nauk Przyrodniczych Guangxi w ramach grantu [numer 2023GXNSFDA026008], projekt rozwoju i zastosowania technologii medycznych i zdrowotnych w Guangxi w ramach grantu [numer S2022134], Komisję Zdrowia Regionu Autonomicznego Guangxi Zhuang samofinansującego się projektu badawczego medycyny zachodniej w ramach grantu [numer 20210234] oraz Biuro Tradycyjnej Medycyny Chińskiej Guangxi finansowane samodzielnie projekt badawczy w ramach grantu [numer GZZC2020255].

Wkład autora:
Yuanyuan Xu: Pisanie - oryginalny projekt, oprogramowanie, metodologia, dochodzenie, analiza formalna, konceptualizacja. Jianchang Xu: Zasoby, metodologia, śledztwo. Anbang Zhou: Śledztwo, analiza formalna. Nimiao Cen: Wizualizacja, Lina Huang: Nadzór. Biaoliang Wu: Pisanie, recenzowanie i redagowanie, Zasoby, Administracja projektem, Metodologia, Pozyskiwanie funduszy, Selekcja danych, Konceptualizacja.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
1 i razy; PBS Solarbio (Pekin, Chiny)#P1020Roztwór buforowany
4% roztwór paraformaldehyduSolarbio (Pekin, Chiny)#P1110Napraw tkankę
anty-królicza peroksydaza IgG sprzężona Powinowactwo#S0001Przeciwciało drugorzędowe
Beifuxin żelEssexbio (Zhuhai, Chiny)#042404A06Maść do leczenia ran przewlekłych
Przeciwciało CD81Przeciwciało Signalway#41779Przeciwciało pierwszorzędowe
Zestaw do ulepszonej chemiluminescencji Epizyme (Chiny)#SQ101Zestaw chemiluminescencyjny do pasma białkowego
Przeciwciało przeciwko dehydrogenazie gliceraldehydo-3-fosforanowej (GAPDH)Powinowactwo#AF7021Przeciwciało pierwszorzędowe
Pryzmat GraphPadhttps://www.graphpad.com/prism/Wizualizacja
Obraz J https://imagej.net/ij/Zmierz powierzchnię rany 
Zestaw do oznaczania białek instant z kwasem bicynchoninowym (BCA) Epizyme (Chiny)#ZJ102Określ stężenie białka
LightCycler96 SystemRocheSprzęt do qPCR
MHY1485MedChemExpress (Stany Zjednoczone)#326914-06-1Aktywator ssaczego celu kompleksu rapamycyny 1 (mTORC1) 
Zestaw miRNeasy Mini Tiangen (Chiny)#217004Ekstrakcja RNA (miRNA)
Maść na oparzenia narażona na wilgoćMebo (Shantou, Chiny)#2403103BMaść do leczenia ran przewlekłych
MonAmp SYBR Green qPCR Mix (bez ROX) Monad (Chiny)#MQ10101SZestaw qPCR (mRNA)
MonScript RTIII All-in-One Mix z dsDNase Monad (Chiny)#MR05101SZestaw do odwrotnej transkrypcji (mRNA)
System nano cytometrii przepływowejN30E (Chiny)Sprzęt do analizy wielkości i stężenia egzosomów
mikroskop optycznyOlympus (Tokio, Japonia)Obserwuj patomorfologię tkanek
sól fizjologicznaKelun (Syczuan, Chiny)#L24041709Sól fizjologiczna
membrany z polifluorku winylidenuMillipore(Stany Zjednoczone)#IPVH00010Membrana Western blotting
PodkładyGeneray Biotech Co., Ltd. (Szanghaj, Chiny)
Przeciwciało Rab27aTechnologia sygnalizacji komórkowej#69295Przeciwciało pierwszorzędowe
Zestaw do syntezy pierwszej nici cDNA RevertAidThermo Fisher (Stany Zjednoczone)#K1622Zestaw do odwrotnej transkrypcji (miRNA)
Bufor do lizy RIPASolarbio (Pekin, Chiny)#R0010Całkowita ekstrakcja białka
Dodecylosiarczan sodu– poliakrylamid Epizyme (Chiny)#PG222Bufor do elektroforezy
Pentobarbital soduMerck (Szanghaj, Chiny)#P3761Znieczulenia
Specyficzny samiec myszy C57BL/6 wolny od patogenówGuangdong Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd (Guangdong, Chiny)Zwierzęta doświadczalne
SPSShttps://www.ibm.com/spssAnaliza statystyczna
StreptozotocynaSolarbio (Pekin, Chiny)#S8050Indukuj model myszy z cukrzycą 
SYBR Green qPCR Master Mix Roche (Szwajcaria)#4943914001-SRZestaw qPCR (miRNA)
transmisyjna mikroskopia elektronowaHitachi (Japonia)HT-7700Sprzęt do określania morfologii egzosomów
TRIZOL Invitrogen (Stany Zjednoczone)#15596026CNEkstrakcja RNA (mRNA)
Przeciwciało TSG101Księga Abcam# ab125011 powiedział:Przeciwciało pierwszorzędowe
Przeciwciało Vps4aKsięga Abcam# ab197896 powiedział:Przeciwciało pierwszorzędowe

Bibliografia

  1. Zhi, Q., et al. The effectiveness of cell-derived exosome therapy for diabetic wound: A systematic review and meta-analysis. Ageing Res Rev. 85, 101858(2023).
  2. David, S., Vikrant, R., Sarah, M., Kira, C., Devendra, K. A. Impact of resolvin mediators in the immunopathology of diabetes and wound healing. Expert Rev Clin Immunol. 17 (6), 681-690 (2021).
  3. Holly, N. W., Matthew, J. H. Wound healing: cellular mechanisms and pathological outcomes. Open Biol. 10 (9), 200223(2020).
  4. Vikrant, R., Rebecca, M., Devendra, K. A. Stem Cells and Angiogenesis: Implications and Limitations in Enhancing Chronic Diabetic Foot Ulcer Healing. Cells. 11 (15), 2287(2022).
  5. Nour, S., Imani, R., Chaudhry, G. R., Sharifi, A. M. Skin wound healing assisted by angiogenic targeted tissue engineering: A comprehensive review of bioengineered approaches. J Biomed Mater Res A. 109 (4), 453-478 (2020).
  6. Shirin, N., Rana, I., Chaudhry, G. R., Ali, M. S. Skin wound healing assisted by angiogenic targeted tissue engineering: A comprehensive review of bioengineered approaches. J Biomed Mater Res A. 109 (4), 453-478 (2020).
  7. Ruo, L., et al. Exosome-cargoed microRNAs: Potential therapeutic molecules for diabetic wound healing. Drug discovery today. 27 (10), 103323(2022).
  8. Li, Q., et al. MiR146a-loaded engineered exosomes released from silk fibroin patch promote diabetic wound healing by targeting IRAK1. Signal transduction and targeted therapy. 8 (1), 62(2023).
  9. Yang, A., et al. Exosomes from adipose-derived stem cells and application to skin wound healing. Cell Prolif. 54 (3), 119(2021).
  10. Fang, W., Yan, L. The emerging roles of exosome-derived noncoding RNAs in the tumor immune microenvironment and their future applications. Biomed Pharmacother. 156, 113863(2022).
  11. Phyllis, I. H., Anil, C. Multivesicular body morphogenesis. Annu Rev Cell Dev Biol. 28, 337-362 (2012).
  12. Matias, O., et al. Rab27a and Rab27b control different steps of the exosome secretion pathway. Nat Cell Biol. 12 (1), 1-13 (2009).
  13. Christophe, C., Sourav, M., Nolwenn, M., Wouter, H. R., Winfried, W. The role of VPS4 in ESCRT-III polymer remodeling. Biochem Soc Trans. 47 (1), 441-448 (2019).
  14. Hao, L., Rui, Z., Wen, W., Li, L. miR-4454 Promotes Hepatic Carcinoma Progression by Targeting Vps4A and Rab27A. Oxid Med Cell Longev. 2021, 9230435(2021).
  15. Mostafa, J., et al. Identification of the first structurally validated covalent ligands of the small GTPase RAB27A. RSC Med Chem. 13 (2), 150-155 (2022).
  16. Wen, Z., et al. Exosome Release Is Regulated by mTORC1. Adv Sci (Weinh). 6 (3), 1801313(2019).
  17. Ji, Z., et al. Administration of follicle-stimulating hormone induces autophagy via upregulation of HIF-1α in mouse granulosa cells. Cell Death Dis. 8 (8), e3001(2017).
  18. Tânia, S. M., José, C., Ilka, M. R., Odete, A. S. Henriques Ana Gabriela. Exosome isolation from distinct biofluids using precipitation and column-based approaches. PLoS One. 13 (6), e0198820(2018).
  19. Yuan, Z., Yun, L., Hai, L., Wai, T. Exosomes: biogenesis, biologic function and clinical potential. Cell Biosci. 9, 19(2019).
  20. Kehinde, R. MiR equal than others: MicroRNA enhancement for cutaneous wound healing. J Cell Physiol. 236 (12), 8050-8059 (2021).
  21. Lei, Z., et al. Exosomes from microRNA-126 overexpressing mesenchymal stem cells promote angiogenesis by targeting the PIK3R2-mediated PI3K/Akt signalling pathway. J Cell Mol Med. 25 (4), 2148-2162 (2020).
  22. Cheng, Y., et al. Milk exosomes-mediated miR-31-5p delivery accelerates diabetic wound healing through promoting angiogenesis. Drug Deliv. 29 (1), 214-228 (2022).
  23. Yuan, G., Yan, J., Jin, H., Zuo, H., Qian, T. Moist exposed burn ointment accelerates diabetes-related wound healing by promoting re-epithelialization. Front Med (Lausanne). 9, 1042015(2023).
  24. Ming, S., et al. Combined application of moist exposed burn ointment and maggot therapy in wound healing. J Wound Care. 31 (Sup10), S41-S52 (2022).
  25. Qian, T., et al. Moist exposed burn ointment promotes cutaneous excisional wound healing in rats involving VEGF and bFGF. Mol Med Rep. 9 (4), 1277-1282 (2014).
  26. Xiao, Q., et al. Role of Hydrogen Sulfide in the Development of Colonic Hypomotility in a Diabetic Mouse Model Induced by Streptozocin. J Pharmacol Exp Ther. 384 (2), 287-295 (2022).
  27. Jia, Z., et al. Hydrogel plus growth factors treatment after 2940nm erbium:YAG lattice laser improves periorbital wrinkles and wound healing: a case report. J Int Med Re.s. 49 (9), 3000605211042506(2021).
  28. Hina, K., et al. Comparative proteomics evaluation of plasma exosome isolation techniques and assessment of the stability of exosomes in normal human blood plasma. Proteomics. 13 (22), 3354-3364 (2013).
  29. Yi, H., et al. Exosomes derived from pioglitazone-pretreated MSCs accelerate diabetic wound healing through enhancing angiogenesis. J Nanobiotechnology. 19 (1), 150(2021).
  30. Ai, Z., et al. Effects of Moist Exposed Burn Therapy and Ointment (MEBT/MEBO) on the autophagy mTOR signalling pathway in diabetic ulcer wounds. Pharm Biol. 58 (1), 124-130 (2020).
  31. Nina, D., et al. Updates in Diabetic Wound Healing, Inflammation, and Scarring. Semin Plast Surg. 35 (3), 153-158 (2021).
  32. Dimitrios, B., Ioanna, E., Aristidis, V. Pathogenesis and treatment of impaired wound healing in diabetes mellitus: new insights. Adv Ther. 31 (8), 817-836 (2014).
  33. Heng, G., et al. Metal-polyphenol nanocomposite hybrid hydrogel: A multifunctional platform for treating diabetic foot ulcers through metabolic microenvironment reprogramming. Biomaterials. 322, 123414(2025).
  34. Elof, E., et al. Chronic wounds: Treatment consensus. Wound Repair Regen. 30 (2), 156-171 (2022).
  35. Elena, T., Andreas, B., Hannes, R., Andreas, R., Stefan, R. B. Current aspects in the pathophysiology and treatment of chronic wounds in diabetes mellitus. Biomed Res Int. 2013, 385641(2013).
  36. Jamie, L. B., Wyant, W. A., Beatriz, A. A., Robert, S. K., Ivan, J. Diabetic Wound-Healing Science. Medicina (Kaunas). 57 (10), 1072(2021).
  37. Xin, Z., Yan, G., Kun, Y., Peng, L., Jun, W. The signaling pathways of traditional Chinese medicine in promoting diabetic wound healing. J Ethnopharmacol. 282, 114662(2021).
  38. Vilelmine, J. C., Evangelia, G. T., Georgia, C. S., Fotini, N. A., John, D. I. Comparing oil based ointment versus standard practice for the treatment of moderate burns in Greece: a trial based cost effectiveness evaluation. BMC Complement Altern Med. 11, 122(2011).
  39. Hong, Z., Qing, S., Lei, Y., Jia, C. Clinical Study of MEBO Combined with Jinhuang Powder for Diabetic Foot with Infection. Evid Based Complement Alternat Med. 2021, 5531988(2021).
  40. Ya, T., Xiao, L., Lei, J. Simultaneous Determination of 12 Components in Moist Exposed Burn Ointment by HPLC. China Pharm. 31 (16), 73-77 (2022).
  41. Wei, L., Yu, M., Qi, Y., Yu, P., Qing, M. Moist exposed burn ointment for treating pressure ulcers: A multicenter randomized controlled trial. Medicine (Baltimore). 96 (29), e7582(2017).
  42. Qing, H., et al. Vps4A mediates the localization and exosome release of β-catenin to inhibit epithelial-mesenchymal transition in hepatocellular carcinoma. Cancer Lett. 457, 47-59 (2019).
  43. Zhi, W., et al. Extracellular vesicles in fatty liver promote a metastatic tumor microenvironment. Cell Metab. 35 (7), 1209-1226 (2023).
  44. Sathish, M., Asawari, B., Rashmi, J., Naveen, J., Madhan, J. Exosomal therapy-a new frontier in regenerative medicine. Stem Cell Investig. 8, 7(2021).
  45. Sonam, G., Dany, P., Loukia, T. o, Julien, B. The exosome journey: from biogenesis to uptake and intracellular signalling. Cell Commun Signal. 19 (1), 47(2021).
  46. Roi, I., Felipe, C. R., Wei, Y., Jerrold, M. O. Exosomes as mediators of intercellular crosstalk in metabolism. Cell Metab. 33 (9), 1744-1762 (2021).
  47. Xiao, Z., et al. The function and clinical application of extracellular vesicles in innate immune regulation. Cell Mol Immunol. 17 (4), 323-334 (2020).
  48. Li, C., Shu, S., Song, W. LncRNA SNHG16 Knockdown Promotes Diabetic Foot Ulcer Wound Healing via Sponging MiR-31-5p. Tohoku J Exp Med. 261 (4), 283-289 (2023).
  49. Ai, S., Ning, S., Xiao, L., Zhen, H. Circ-FBXW12 aggravates the development of diabetic nephropathy by binding to miR-31-5p to induce LIN28B. Diabetol Metab Syndr. 13 (1), 141(2021).
  50. Wei, X., Ya, L., Ying, Z., Zhi, Y. Identification of miRNA-mRNA Regulatory Networks Associated with Diabetic Retinopathy using Bioinformatics Analysis. Endocr Metab Immune Disord Drug Targets. 23 (13), 1628-1636 (2023).
  51. Fei, W., et al. MicroRNA-31 Can Positively Regulate the Proliferation, Differentiation and Migration of Keratinocytes. Biomed Hub. 5 (2), 93-104 (2021).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Funkcja egzosom wg sto mikronaczyniowagojenie ranilo ciowy PCRWestern blotekspresja Rab27a
Film wkrótce dostępny

Powiązane artykuły