Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Model glejaka krążącego do badań nad terapią limfocytami T z chimerycznym receptorem antygenowym

406 wyświetleń

DOI:

10.3791/68881

17 października 2025

* These authors contributed equally

W tym artykule

Podsumowanie

Niniejszy protokół ustanawia model krążącego glejaka przez wstrzyknięcie do komory bocznej w celu zbadania efektu terapeutycznego terapii limfocytami T z chimerycznym receptorem antygenowym in vivo.

Streszczenie

Krążące komórki nowotworowe w płynie mózgowo-rdzeniowym (CSF) są istotnym czynnikiem nawrotu guza i przerzutów wewnątrzczaszkowych w glejaku. Wiele badań ma na celu zidentyfikowanie skutecznych strategii celowania i eliminowania krążącego guza w płynie mózgowo-rdzeniowym. Terapia limfocytami T z chimerycznym receptorem antygenowym (CAR) jest często stosowana w przypadku różnych krążących nowotworów. Jednak badania są ograniczone ze względu na brak odpowiedniego modelu krążącego glejaka. W tym miejscu opracowano model krążącego glejaka, który został zastosowany w badaniach nad terapią limfocytami T CAR. Model ten został skonstruowany przy użyciu iniekcji do komory bocznej, która jest szeroko stosowana w miejscowym leczeniu choroby wewnątrzczaszkowej. Komórki glejaka wstrzyknięto do komory bocznej, tworząc wewnątrzczaszkowy guz pierwotny. Guzy, które zostały wyrzucone z komory bocznej, wykorzystano do wskazania krążącego guza w płynie mózgowo-rdzeniowym. Model jest łatwy do zbudowania i może być stosowany w różnych badaniach nad terapią krążącego glejaka za pomocą limfocytów T CAR. W rezultacie, model krążącego glejaka zapewnia unikalny model przerzutów glejaka do skutecznych badań nad terapią limfocytami T CAR krążącego guza.

Wprowadzenie

Glejak jest najczęstszym pierwotnym złośliwym nowotworem mózgu u dorosłych 1,2. Obecne metody leczenia, w tym chirurgia, radioterapia i chemioterapia, wykazują ograniczoną skuteczność, a mediana przeżycia wynosi zaledwie 14-15 miesięcy 3,4,5. Krążące komórki glejaka w płynie mózgowo-rdzeniowym odgrywają kluczową rolę w nawrocie guza i przerzutach wewnątrzczaszkowych 6,7. W związku z tym istnieje pilna potrzeba opracowania skuteczniejszych strategii leczenia w ....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

Eksperymenty na zwierzętach w tym badaniu zostały zatwierdzone i nadzorowane przez Instytucjonalną Komisję Rewizyjną i Komisję Etyki Zwierząt Uniwersytetu Medycznego w Nankinie (IACUC-1905048). Do niniejszego badania wykorzystano samice myszy C57BL/6J w wieku 6-8 tygodni. Odczynniki i używany sprzęt są wymienione w Tabeli Materiałów.

1. Przygotowanie zwierząt

  1. Trzymaj myszy w barierze, 12 godzin/12 godzin cyklu światła/ciemności, temperatura otoczenia 24 °C i wilgotność względna 50% klatki.
  2. Zważ myszy i znieczul je (zgodnie z instytucjonalnie zatwierdzonymi protokołami) za pomocą dootrzewnowego wstrzykn....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Schemat ideowy modelu krążącego glejaka do terapii CAR-T przedstawiono na rycinie 1. Komórki CAR-T wstrzyknięto do komory bocznej za pomocą mikrostrzykawki, aby zademonstrować ich działanie terapeutyczne. Metoda ta umożliwia bezpośrednie dostarczanie komórek CAR-T do mózgu, celując w krążące komórki glejaka. Zabieg iniekcji wykonano w 11 dniu, po implantacji komórek GL261 w bocznej komorze myszy. W różnych punktach czasowych (15, 20, 25 i 30) odpowiedź guza m.......

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Model krążącego glejaka ustalony w tym badaniu przy użyciu wstrzyknięcia komory bocznej zapewnia znaczny postęp, oferując kilka zalet w porównaniu z istniejącymi modelami. Technika iniekcji do komór bocznych jest wysoce powtarzalna, co umożliwia spójne modelowanie guza w stosunkowo krótkim czasie. To sprawia, że jest to cenne narzędzie dla badaczy chcących zbadać rozprzestrzenianie się komórek nowotworowych do płynu mózgowo-rdzeniowego i ocenić skuteczność terapii, takich jak komórki CAR-T. W przeciwieństwie do tradycyjn.......

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy deklarują brak konfliktu interesów.

Podziękowania

Badanie to zostało sfinansowane przez Narodową Fundację Nauk Przyrodniczych Chin (82230059), Chiński Program Rozwoju Kluczowych Badań Naukowych w prowincji Jiangsu (BE2022770).

....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Wchłanialny szew chirurgicznyShanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., LtdCzynnik R611
SAMOCHÓD-TKreatywne laboratoria biologiczne
Sól potasowa D-lucyferynyMCE (Certyfikat MCE)HY-12591B
GL261-Luc-GfpSzanghaj Zhong Qiao Xin Zhou Biotechnology Co., Ltd.Zobacz materiał ZQ0932 powiedział:
System obrazowania bioluminescencyjnego in vivoTanonTanon ABL X6
Laboratoryjna golarka dla zwierzątBeyotime BiotechnologiaDrukarka FS600
MyszyPlacówka Animal Core Uniwersytetu Medycznego w Nankinie
Pompa do mikroiniekcjiRWDCzynnik chłodniczy R462
MikrostrzykawkaHamilton87943
Mini wiertarka czaszkowaRWD78001
Pentobarbital sodowy ChemSrc powiedział:57-33-0
Aparatura stereotaktycznaRWD68043
KsylazynaChemSrc powiedział:7361-61-7

Bibliografia

  1. Lim, M., Xia, Y., Bettegowda, C., Weller, M. Current state of immunotherapy for glioblastoma. Nat Rev Clin Oncol. 15 (7), 422-442 (2018).
  2. Weller, M., et al. Glioma. Nat Rev Dis Primers. 10 (1), 33(2024).
  3. Van Den Bent, M. J., et al.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

Terapia CAR Tguz w p ynie m zgowo rdzeniowymprzerzut glejakainiekcja do komory bocznejguz wewn trzczaszkowynawr t nowotworukr ce kom rki nowotworoweprzerzut wewn trzczaszkowy