Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
* These authors contributed equally
Badanie to ustanawia konfokalne obrazowanie konfokalne in vivo jako metodę śledzenia w czasie rzeczywistym dynamiki morfologicznej wywołanej akupunkturą, takiej jak rozszerzenie naczyń krwionośnych i przebudowa kolagenu, u żywych szczurów. Wykorzystując znakowanie fluoresceiną sodu, podejście to pozwala uchwycić zarówno natychmiastowe, jak i opóźnione reakcje tkanek, oferując nowe narzędzie do ilościowej oceny terapii fizycznych, w tym akupunktury i moksowania.
Dynamiczne monitorowanie efektów akupunktury w czasie rzeczywistym ma kluczowe znaczenie dla wyjaśnienia jej mechanizmów biologicznych, jednak tradycyjne metody histologiczne nie są w stanie uchwycić przejściowych reakcji w żywym mikrośrodowisku. W tym przypadku opracowaliśmy ramy metodologiczne oparte na laserowym obrazowaniu konfokalnym in vivo , umożliwiające obserwację w czasie rzeczywistym zmian morfologicznych w lokalnych tkankach po interwencji akupunktury. Po dożylnym wstrzyknięciu fluoresceiny sodu u szczurów, podczas akupunktury śledzono dynamiczne zmiany w mikrokrążeniu i macierzy zewnątrzkomórkowej (np. ułożeniu włókien kolagenowych). Wyniki wykazały, że metoda ta wyraźnie rozróżnia natychmiastowe (np. rozszerzenie naczyń krwionośnych) i opóźnione (np. odpowiedź zapalna) reakcje tkankowe wywołane akupunkturą, z rozdzielczością przestrzenną 0,5 μm i rozdzielczością czasową 3,5 kl./s. Późniejsza analiza ilościowa umożliwiła obiektywny pomiar parametrów morfologicznych. Protokół ten, opisany w tym badaniu, stanowi narzędzie do wizualizacji dla badań in vivo mechanizmów akupunktury i służy jako techniczne odniesienie do oceny skutków innych bodźców fizycznych (np. Moxibustion).
Akupunktura, jako kamień węgielny medycyny tradycyjnej, wywiera efekty terapeutyczne poprzez złożone reakcje na poziomie tkanek 1,2,3,4. Jednak wgląd mechanistyczny pozostaje ograniczony przez konwencjonalną histologię, która rejestruje statyczne migawki, ale nie rozwiązuje w czasie rzeczywistym dynamiki adaptacji morfologicznych (np. wazomodulacji, przebudowy macierzy zewnątrzkomórkowej) w żywej tkance5. Podczas gdy mikroskopia przyżyciowa oferuje dynamiczny potencjał obrazowania, jej zastosowanie w badaniach nad aku....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wszystkie procedury zostały zatwierdzone przez Komisję Etyki Zwierząt Instytutu Akupunktury i Moxibustion, Chińskiej Akademii Chińskich Nauk Medycznych (nr D2023-01-29-01). Osiem samców szczurów Sprague Dawley (SD) (8 tygodni, 200-220 g) uzyskano od Biotechnology Co., Ltd. (nr licencji. SCXK (Jing) 2020-0001). Zwierzęta trzymano w wysterylizowanych pomieszczeniach izolacyjnych w kontrolowanych warunkach: 12-godzinny cykl jasny-ciemny, temperatura 21 ±± 2 °C, z dostępem ad libitum do standardowych granulek i wody. Wszystkie eksperymenty były zgodne z wytycznymi instytucjonalnymi oraz Przewodnikiem dotyczącym opieki nad zwierzętami laboratoryjnymi i ich wykorzystywania.....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół ten demonstruje użyteczność pCLE do dynamicznej oceny wpływu akupunktury na mikrokrążenie i architekturę macierzy zewnątrzkomórkowej w czasie rzeczywistym. Po dożylnym podaniu fluoresceiny sodu przez żyłę ogonową oceniano zmiany, obserwując zmiany prędkości erytrocytów w lokalnych naczyniach włosowatych i reorganizację ułożenia włókien kolagenowych.
Reprezentatywne wyniki po 5 minutach od akupunktury ujawniły przyspiesz.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Jak wykazano w wynikach, protokół obrazowania konfokalnego in vivo opracowany w tym badaniu umożliwia jednoczesną analizę ilościową dynamiki mikrokrążenia i macierzy zewnątrzkomórkowej podczas interwencji akupunkturowej przy użyciu standardowego dostępnego na rynku sprzętu i rutynowego znakowania fluorescencyjnego. Sukces tego protokołu opiera się na dwóch krytycznych etapach: precyzyjnym czasie wstrzyknięcia fluoresceiny sodu, zapewniającym trwały kontrast mikronaczyniowy14, oraz rygorys.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Badania te zostały sfinansowane przez Narodowy Kluczowy Program Badawczo-Rozwojowy Chin (2024YFA1209900, 2024YFA1209903, 2024YFA1209904); Fundusze Specjalne Chińskiej Narodowej Fundacji Nauk Przyrodniczych (82050006); Projekt badawczy TCM Administracji Medycznej TCM prowincji Hubei (ZY2025Z015); Fundusz Badawczy Uniwersytetu Jianghan (2024JCYJ13).
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| 1 igła do akupunktury cun | Hwato, Suzhou, Chińska Republika Ludowa | N/A | 13 mm/0,25 mm |
| 10% fluoresceiny sodowej | Guangxi Wuzhou Pharmaceutical Co Ltd, Chiny | H45021477 | |
| Maszyna do znieczulenia zwierząt | RWD, Shenzhen, Chińska Republika Ludowa | R620IE | |
| Monitor temperatury ciała | RWD, Shenzhen, Chińska Republika Ludowa | 69026 | |
| Elektryczny aparat do akupunktury | Hwato, Suzhou, Chińska Republika Ludowa | SDZ-III | |
| Krem do depilacji | Veet, Francja | ||
| ObrazJ | Narodowe Instytuty Zdrowia, Stany Zjednoczone | https://imagej.nih.gov/ij/ | |
| Endomikroskopia laserowa konfokalna z sondą in vivo | Optiscan, Australia | ViewnVivoB30 powiedział: | Średnica: 4 mm ręczna sztywna sonda, odporna na zginanie i zachowująca integralność strukturalną w czasie. Długość: ≥ 46 mm. Tryb skanowania: Możliwość skanowania z zoomem. |
| Izofluran | RWD, Shenzhen, Chińska Republika Ludowa | R510-22-16 | |
| Uretanowe | Sigma-Aldrich, Stany Zjednoczone | 94300 |
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.