Opisano szczegółowy i powtarzalny model całkowitego przeszczepu oka u świń (WET), od zabiegu chirurgicznego po rozpoczęcie perfuzji maszynowej, co pozwala na badanie zachowania dynamicznego WET w transplantacji.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Opisano szczegółowy i powtarzalny model całkowitego przeszczepu oka u świń (WET), od zabiegu chirurgicznego po rozpoczęcie perfuzji maszynowej, co pozwala na badanie zachowania dynamicznego WET w transplantacji.
Pierwszy ludzki przeszczep całkowitego oka (WET) wzbudził nową nadzieję u pacjentów, którzy stracili wzrok z powodu poważnego uszkodzenia okulistycznego, jednak przed możliwością przywrócenia wzroku za pomocą WET wciąż pozostają poważne wyzwania, które trzeba rozwiązać. Jednym z najważniejszych wyzwań jest ochrona ex vivo . Gałka oka, szczególnie jej elementy nerwowe, takie jak siatkówka i nerw wzrokowy, przechodzą szybką i nieodwracalną degenerację w ciągu kilku minut, chyba że zapewni się jej odpowiednią konserwację. Statyczne przechowywanie zimna (SCS) pozostaje złotym standardem w naczyniowej allotransplantacji kompozytowej (VCA), ale nie nadaje się do konserwacji ex vivo w WET ze względu na niezdolność do wystarczającego tłumienia lub wspierania metabolizmu, co prowadzi do utraty żywotności i funkcji przeszczepu. Subnormotermiczna perfuzja maszynowa (SNMP) wyłoniła się jako obiecująca alternatywa dla SCS, oferując nie tylko możliwość zachowania przeszczepów, ale także ich rekondicjonowania. Nasza grupa z powodzeniem przeniosła SNMP z przeszczepów narządów stałych na kilka modeli VCA, demonstrując jego wykonalność i zalety. W niniejszym artykule przedstawiamy zastosowanie SNMP do zachowania WET u świń, szczegółowo opisując model anatomiczny i protokół konserwacji. To podejście stanowi istotny krok naprzód w optymalizacji technik konserwacji i przeszczepów WET.
Naczyniowe allotransplantaty kompozytowe (VCA) stanowią istotny postęp w chirurgii rekonstrukcyjnej, oferując niezrównane wyniki estetyczne i funkcjonalne dla pacjentów z złożonymi zmianami 1,2. Jednak utrata wzroku związana z gałką oczną pozostaje głównym źródłem upośledzeń urazów twarzy. Niedawny pierwszy pełny przeszczep oka (WET) dał nową nadzieję pacjentom 3,4. Chociaż wzrok nie został odzyskany, funkcjonalne obrazowanie wykazało aktywację kory w odpowiedzi na stymulację światła, a elektroretinografia (ERG) wykazała stępioną, ale rozpoznawalną odp....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Instytucjonalna zgoda na to badanie uzyskano od lokalnego Komitetu ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt (protokół #2024N000205). Cała praca na zwierzętach była zgodna z wytycznymi Animal Research: Reporting of In Vivo Experiments31 i była zgodna z zaleceniami US Army Animal Care and Use Review Office (ACURO)32. Wszystkie WET pozyskano od świń poddawanych końcowym procedurom zakupu organów, zgodnie z zasadami "3-R"33. Zwierzęta ważące od 30 kg do 50 kg były uśpione przez wykrwawianie po otrzymaniu 100 IU/kg heparyny, a do eksperymentów wykorzystywano przeszczepy WET. Właściwe WET-y służyły ja....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wstępny test wykonalności przeprowadzono przez 6 godzin SNMP, a następnie 2 godziny normotermicznej perfuzji maszynowej (NMP) z użyciem pełnej krwi, aby ocenić prawidłową reperfuzję całego przeszczepu i zasymulować replantację. W fazie SNMP zaobserwowano stały odpływ, a symulacja reperfuzji całej krwi wykazała skuteczną zmianę koloru całego przeszczepu. Parametry perfuzji dodatkowo potwierdziły wykonalność tej techniki (Rysunek uzupełniający 3).
W kolejnej serii 7 replikacji p.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Ponad dwie dekady po pierwszych przypadkach klinicznych VCA nadal boryka się z poważnymi wyzwaniami immunologicznymi i ex vivo zachowania, co ogranicza jej szeroką dostępność37. Wyzwania te są jeszcze bardziej widoczne w przypadku WET, który oferuje ekscytujące perspektywy przywrócenia wzroku, ale stawia ze sobą unikalne przeszkody, takie jak skuteczne połączenie nerwu wzrokowego, zachowanie funkcjonalności zarówno przedniego, jak i tylnego segmentu oraz zachowanie integralności struktur .......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Niektórzy autorzy deklarują sprzeczne interesy. Dr Uygun, Lellouch i dr Cetrulo mają zgłoszenia patentowe związane z tym badaniem. Dr Korkut Uygun i dr Basak Uygun mają udziały finansowe i zasiadają w Radzie Doradczej Naukowej Sylvatica Biotech Inc., firmy zajmującej się opracowywaniem technologii ochrony organów w wysokiej temperaturze poniżej zera. Konkurencyjne interesy śledczych MGH są zarządzane przez MGB zgodnie z polityką dotyczącą konfliktu interesów. Wszyscy pozostali autorzy deklarują brak konfliktu interesów.
Prace te były częściowo finansowane przez National Institutes of Health w ramach grantu nr R01AR082825 (BEU), R01EB028782 (KU), DoD RTRP RT240044 (KU, AGL, CLC), Shriners Children's 84308 (YB) oraz ARPA-H sub-award FY25.1065.001 (CLC), a także National Science Foundation w ramach grantu nr EEC 1941543 (KU). HO i YB otrzymały dofinansowanie od Fondation des Gueules Cassées. Wsparcie ze strony Société Française de Chirurgie Plastique, Reconstructrice et Esthétique (SOFCPRE, Francja) dla HO i YB jest szeroko doceniane.
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Kleszcze Adson | Narzędzia Nauki Ścisłej | 11019-12 | Narzędzie chirurgiczne |
| Affinity Pixie Oxygenation System | Medtronic | BBP241 | Oxygenator |
| Angiocath (24 G) | Becton Dickinson | 381112 | Cewnik kanowacyjny |
| Albumina w surowicy Bovin | Sigma-Aldrich | A9647 | Składnik perfuzacji |
| Chlorek wapnia dwuwęglan | Sigma-Aldrich | 223506 | Składnik perfuzacji |
| Dwutlenek węgla | Airgas | UN3156 | Mieszanka dwutlenku węgla i tlenu; gas |
| Cewnik 24 G | Dutscher | 921048 | Kanulacja tętnic |
| D-(+)-Monohydrat glukozy | Sigma-Aldrich | 49159 | Składnik perfuzacji |
| Deksametazon | Sigma-Aldrich | D2915 | Składnik perfuzacji |
| Dextran | Termonaukowe | 406271000 | Składnik perfuzacji |
| Kleszcze rozszerzające | AROSurgical | 11.946.1102 | Narzędzie chirurgiczne |
| Excel & nbsp; | Microsoft | Arkusz kalkulacyjny | |
| Zastrzyk z sodu z heparyną | Eugia Pharma | 63739-953-25 | Składnik perfuzacji |
| Humulin Regular Insulin Human | Lilly | 0002-8215-01 | Składnik perfuzacji |
| Hydrokortyzonowy sukcynian sodu | Pfizer | 0009-0011-03 | Składnik perfuzacji |
| Ligaclip | Ethicon | MCS20 | Chirurgiczne klipsy naczyniowe |
| Liston bone cutter | Narzędzia Nauki Ścisłej | 16104-19 | Narzędzie chirurgiczne |
| Chlorek magnezu w heksa-hydracie | Sigma-Aldrich | M9272 | Składnik perfuzacji |
| MasterFlex L/S | Cole-Parmer | 77200-32 | Pompa rolkowa |
| Kleszcze mikrochirurgiczne | Narzędzia Nauki Ścisłej | 11253-20 | Narzędzie chirurgiczne |
| Elewacja okołokostowa | AROSurgical | 46.415.18 | Narzędzie chirurgiczne |
| Glikol polietylenowy 35000 | Sigma-Aldrich | 25322-68-3 | Składnik perfuzacji |
| Chlorek potasu | Sigma-Aldrich | 7447-40-7 | Składnik perfuzacji |
| Monitor ciśnienia, przenośny, PM-P-1 | Instrumentacja systemów żywych | PM-P-1 | Czujnik ciśnienia |
| Prism | GraphPad | w. 10.1.1 | Oprogramowanie do analizy statystycznej |
| Radnoti Komora zgodności pułapki bąbelkowej | Radnoti | 130149 | Pułapka bąbelkowa |
| RAPIDPoint 500 | Siemens | 500 | System gazów krwi |
| Piła reiprocyjna | Stryker | 5100-37 | Narzędzie chirurgiczne |
| Rongeur | Narzędzia Nauki Ścisłej | 16002-18 | Narzędzie chirurgiczne |
| Ostrze skalpela (n15) | Narzędzia Nauki Ścisłej | 10015-00 | Narzędzie chirurgiczne |
| Ostrze skalpela (n23) | Narzędzia Nauki Ścisłej | 10023-00 | Narzędzie chirurgiczne |
| Szew jedwabny 3-0 | Ethicon | P683H | Szew |
| Wodorowęglan sodu | Sigma-Aldrich | S5761 | Składnik perfuzacji |
| Chlorek sodu | Sigma-Aldrich | S9888 | Składnik perfuzacji |
| Wodorotlenek sodu | Sigma-Aldrich | 72068 | Składnik perfuzacji |
| Fosforan sodu monobasique dihydrate | Sigma-Aldrich | 71505 | Składnik perfuzacji |
| Nożyczki Stevensa | AROSurgical | 07.367.13 | Narzędzie chirurgiczne |
| Strzykawka 1 mL | BD | 309659 | Zakup próbek |
| Strzykawka 10 mL | Dutscher | 300912 | Flush graftu |
| Kamera termowizyjna | Flir One | https://www.flir.fr/products/flir-one-gen-3/?vertical=condition+monitoring&segment=solutions | Monitorowanie temperatury perfuzji |
| Rurki (n&de; 16) | Masterflex | 13-310-282 | Ustawienie perfuzji maszynowej |
| Chlorek wankomycyny | Farmaceutyki z łupkami | 70436-021-82 | Składnik perfuzacji |
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.