Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Ustanowienie modelu świń do badania dynamicznej konserwacji i przeszczepów całych przeszczepów oka

692 wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/69179

⸱

25 listopada 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 

W tym artykule

Podsumowanie

Opisano szczegółowy i powtarzalny model całkowitego przeszczepu oka u świń (WET), od zabiegu chirurgicznego po rozpoczęcie perfuzji maszynowej, co pozwala na badanie zachowania dynamicznego WET w transplantacji.

Streszczenie

Pierwszy ludzki przeszczep całkowitego oka (WET) wzbudził nową nadzieję u pacjentów, którzy stracili wzrok z powodu poważnego uszkodzenia okulistycznego, jednak przed możliwością przywrócenia wzroku za pomocą WET wciąż pozostają poważne wyzwania, które trzeba rozwiązać. Jednym z najważniejszych wyzwań jest ochrona ex vivo . Gałka oka, szczególnie jej elementy nerwowe, takie jak siatkówka i nerw wzrokowy, przechodzą szybką i nieodwracalną degenerację w ciągu kilku minut, chyba że zapewni się jej odpowiednią konserwację. Statyczne przechowywanie zimna (SCS) pozostaje złotym standardem w naczyniowej allotransplantacji kompozytowej (VCA), ale nie nadaje się do konserwacji ex vivo w WET ze względu na niezdolność do wystarczającego tłumienia lub wspierania metabolizmu, co prowadzi do utraty żywotności i funkcji przeszczepu. Subnormotermiczna perfuzja maszynowa (SNMP) wyłoniła się jako obiecująca alternatywa dla SCS, oferując nie tylko możliwość zachowania przeszczepów, ale także ich rekondicjonowania. Nasza grupa z powodzeniem przeniosła SNMP z przeszczepów narządów stałych na kilka modeli VCA, demonstrując jego wykonalność i zalety. W niniejszym artykule przedstawiamy zastosowanie SNMP do zachowania WET u świń, szczegółowo opisując model anatomiczny i protokół konserwacji. To podejście stanowi istotny krok naprzód w optymalizacji technik konserwacji i przeszczepów WET.

Wprowadzenie

Naczyniowe allotransplantaty kompozytowe (VCA) stanowią istotny postęp w chirurgii rekonstrukcyjnej, oferując niezrównane wyniki estetyczne i funkcjonalne dla pacjentów z złożonymi zmianami 1,2. Jednak utrata wzroku związana z gałką oczną pozostaje głównym źródłem upośledzeń urazów twarzy. Niedawny pierwszy pełny przeszczep oka (WET) dał nową nadzieję pacjentom 3,4. Chociaż wzrok nie został odzyskany, funkcjonalne obrazowanie wykazało aktywację kory w odpowiedzi na stymulację światła, a elektroretinografia (ERG) wykazała stępioną, ale rozpoznawalną odp....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

Instytucjonalna zgoda na to badanie uzyskano od lokalnego Komitetu ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt (protokół #2024N000205). Cała praca na zwierzętach była zgodna z wytycznymi Animal Research: Reporting of In Vivo Experiments31 i była zgodna z zaleceniami US Army Animal Care and Use Review Office (ACURO)32. Wszystkie WET pozyskano od świń poddawanych końcowym procedurom zakupu organów, zgodnie z zasadami "3-R"33. Zwierzęta ważące od 30 kg do 50 kg były uśpione przez wykrwawianie po otrzymaniu 100 IU/kg heparyny, a do eksperymentów wykorzystywano przeszczepy WET. Właściwe WET-y służyły ja....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Wstępny test wykonalności przeprowadzono przez 6 godzin SNMP, a następnie 2 godziny normotermicznej perfuzji maszynowej (NMP) z użyciem pełnej krwi, aby ocenić prawidłową reperfuzję całego przeszczepu i zasymulować replantację. W fazie SNMP zaobserwowano stały odpływ, a symulacja reperfuzji całej krwi wykazała skuteczną zmianę koloru całego przeszczepu. Parametry perfuzji dodatkowo potwierdziły wykonalność tej techniki (Rysunek uzupełniający 3).

W kolejnej serii 7 replikacji p.......

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Ponad dwie dekady po pierwszych przypadkach klinicznych VCA nadal boryka się z poważnymi wyzwaniami immunologicznymi i ex vivo zachowania, co ogranicza jej szeroką dostępność37. Wyzwania te są jeszcze bardziej widoczne w przypadku WET, który oferuje ekscytujące perspektywy przywrócenia wzroku, ale stawia ze sobą unikalne przeszkody, takie jak skuteczne połączenie nerwu wzrokowego, zachowanie funkcjonalności zarówno przedniego, jak i tylnego segmentu oraz zachowanie integralności struktur .......

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Niektórzy autorzy deklarują sprzeczne interesy. Dr Uygun, Lellouch i dr Cetrulo mają zgłoszenia patentowe związane z tym badaniem. Dr Korkut Uygun i dr Basak Uygun mają udziały finansowe i zasiadają w Radzie Doradczej Naukowej Sylvatica Biotech Inc., firmy zajmującej się opracowywaniem technologii ochrony organów w wysokiej temperaturze poniżej zera. Konkurencyjne interesy śledczych MGH są zarządzane przez MGB zgodnie z polityką dotyczącą konfliktu interesów. Wszyscy pozostali autorzy deklarują brak konfliktu interesów.

Podziękowania

Prace te były częściowo finansowane przez National Institutes of Health w ramach grantu nr R01AR082825 (BEU), R01EB028782 (KU), DoD RTRP RT240044 (KU, AGL, CLC), Shriners Children's 84308 (YB) oraz ARPA-H sub-award FY25.1065.001 (CLC), a także National Science Foundation w ramach grantu nr EEC 1941543 (KU). HO i YB otrzymały dofinansowanie od Fondation des Gueules Cassées. Wsparcie ze strony Société Française de Chirurgie Plastique, Reconstructrice et Esthétique (SOFCPRE, Francja) dla HO i YB jest szeroko doceniane.

....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Kleszcze AdsonNarzędzia Nauki Ścisłej11019-12Narzędzie chirurgiczne
Affinity Pixie Oxygenation SystemMedtronicBBP241Oxygenator
Angiocath (24 G)Becton Dickinson381112Cewnik kanowacyjny
Albumina w surowicy BovinSigma-AldrichA9647Składnik perfuzacji
Chlorek wapnia dwuwęglanSigma-Aldrich223506Składnik perfuzacji
Dwutlenek węglaAirgasUN3156Mieszanka dwutlenku węgla i tlenu; gas 
Cewnik 24 GDutscher921048Kanulacja tętnic
D-(+)-Monohydrat glukozySigma-Aldrich49159Składnik perfuzacji
DeksametazonSigma-AldrichD2915Składnik perfuzacji
DextranTermonaukowe406271000Składnik perfuzacji
Kleszcze rozszerzająceAROSurgical11.946.1102Narzędzie chirurgiczne
Excel & nbsp;MicrosoftArkusz kalkulacyjny
Zastrzyk z sodu z heparynąEugia Pharma63739-953-25Składnik perfuzacji
Humulin Regular Insulin HumanLilly0002-8215-01Składnik perfuzacji
Hydrokortyzonowy sukcynian soduPfizer0009-0011-03Składnik perfuzacji
LigaclipEthiconMCS20Chirurgiczne klipsy naczyniowe
Liston bone cutterNarzędzia Nauki Ścisłej16104-19Narzędzie chirurgiczne
Chlorek magnezu w heksa-hydracieSigma-AldrichM9272Składnik perfuzacji
MasterFlex L/SCole-Parmer77200-32Pompa rolkowa
Kleszcze mikrochirurgiczneNarzędzia Nauki Ścisłej11253-20Narzędzie chirurgiczne
Elewacja okołokostowaAROSurgical46.415.18Narzędzie chirurgiczne
Glikol polietylenowy 35000Sigma-Aldrich25322-68-3Składnik perfuzacji
Chlorek potasuSigma-Aldrich7447-40-7Składnik perfuzacji
Monitor ciśnienia, przenośny, PM-P-1Instrumentacja systemów żywychPM-P-1Czujnik ciśnienia
Prism GraphPadw. 10.1.1Oprogramowanie do analizy statystycznej
Radnoti  Komora zgodności pułapki bąbelkowejRadnoti130149Pułapka bąbelkowa
RAPIDPoint 500Siemens500System gazów krwi
Piła reiprocyjnaStryker5100-37Narzędzie chirurgiczne
RongeurNarzędzia Nauki Ścisłej16002-18Narzędzie chirurgiczne
Ostrze skalpela (n15)Narzędzia Nauki Ścisłej10015-00Narzędzie chirurgiczne
Ostrze skalpela (n23)Narzędzia Nauki Ścisłej10023-00Narzędzie chirurgiczne
Szew jedwabny 3-0EthiconP683HSzew
Wodorowęglan soduSigma-AldrichS5761Składnik perfuzacji
Chlorek soduSigma-AldrichS9888Składnik perfuzacji
Wodorotlenek soduSigma-Aldrich72068Składnik perfuzacji
Fosforan sodu monobasique dihydrate Sigma-Aldrich71505Składnik perfuzacji
Nożyczki StevensaAROSurgical07.367.13Narzędzie chirurgiczne
Strzykawka 1 mLBD309659Zakup próbek
Strzykawka 10 mLDutscher300912Flush graftu
Kamera termowizyjnaFlir Onehttps://www.flir.fr/products/flir-one-gen-3/?vertical=condition+monitoring&segment=solutionsMonitorowanie temperatury perfuzji
Rurki (n&de; 16)Masterflex13-310-282Ustawienie perfuzji maszynowej
Chlorek wankomycynyFarmaceutyki z łupkami70436-021-82Składnik perfuzacji

Bibliografia

  1. Lellouch, A. G., Lantieri, L. A second chance at life. Camb Q Healthc Ethics. 28 (3), 463-467 (2019).
  2. Tchiloemba, B., et al. Long-term outcomes after facial allotransplantation: Systematic review of the literature. Transplantation. 105 (8), 1869-1880 (2....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Przeglądaj więcej artykułów

Przechowywanie ex vivoperfuzja maszynowastatyczne przechowywanie w chłodzienerw wzrokowyprzechowywanie siatkówkinaczyniowe złożone alloprzeszczepyżywotność przeszczeputechniki transplantacji