Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł badawczy

Mechanizm wywaru jianpi Shengxue w łagodzeniu mielosupresji wywołanej cyklofosfamidem u myszy

552 wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/69542

⸱

2 stycznia 2026

 ,  ,  ,  ,  , 
1Hunan University of Chinese Medicine, 2Department of Traditional Chinese Medicine /Integrative Oncology, Hunan Cancer Hospital/The Affiliated Cancer Hospital of Xiangya School of Medicine, Central South University

W tym artykule

Podsumowanie

Protokół ten systematycznie wyjaśnia, jak dekokt Jianpi Shengxue łagodzi mielosupresję wywołaną cyklofosfamidem poprzez zintegrowaną farmakologię sieciową i eksperymenty na zwierzętach, ujawniając jego mechanizmy wielocelowe oraz potencjał jako terapii adiuwantowej.

Streszczenie

Artykuł ma na celu zbadanie, jak wywar Jianpi Shengxue (JPSXD) łagodzi mielosupresję wywołaną chemioterapią poprzez farmakologię sieciową oraz eksperymenty na zwierzętach. W tym celu przeanalizowano kluczowe komponenty i cele oraz skonstruowano sieć interakcji białko-białko (PPI) i sieci zioło-składnik-cel. Wzbogacenie gene Ontology (GO) oraz Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) zidentyfikowało główne szlaki. Model mielosupresji indukowany cyklofosfamidem (CTX) został opracowany u 60 myszy C57/BL6. JPSXD podawano w różnych dawkach przez 7 dni. Oceniono morfologię krwi obwodowej, cytokiny (trombopoetyna [TPO], erytropoetyna [EPO], czynnik stymulujący kolonie granulocytów i makrofagów [GM-CSF]), indeks grasicy, morfologię szpiku kostnego, komórki CD34+ oraz ekspresję AKT1, JAK2 i EGFR. Analiza sieci zidentyfikowała 172 związki i 454 cele, podkreślając szlaki PI3K-Akt i JAK-STAT (PI3K-AKT). In vivo CTX obniżył poziom leukocytów i białek sygnałowych, podczas gdy JPSXD przywrócił liczby, zwiększył stężenie AKT1, JAK2 i EGFR oraz poprawił indeks grasicy (p < 0,05). JPSXD średnich i wysokich dawek zwiększały poziom TPO, EPO, GM-CSF, CD34+ oraz poprawiał strukturę szpiku kostnego, przy czym wysoka dawka wykazała najsilniejszy efekt. Ostatecznie JPSXD łagodzi mielosupresję poprzez wielocelową i wieloszlakową regulację, co wspiera jego potencjał jako terapii pomocniczej w leczeniu leukopenii wywołanej chemioterapią.

Wprowadzenie

Chemioterapia jest fundamentem leczenia różnych nowotworów, głównie poprzez hamowanie proliferacji komórek nowotworowychi przeżycia 1,2, co wydłuża przeżycie pacjentów. Jednak z powodu braku selektywności w celowaniu w tkanki zdrowe, leki chemioterapeutyczne często powodują poważne uszkodzenia zdrowych komórek i tkanek, prowadząc do szeregu skutków niepożądanych3. Jednym z najczęstszych i najpoważniejszych skutków ubocznych chemioterapii jest mielosupresja, charakteryzująca się spadkiem produkcji komórek krwi, w tym białych krwinek (WBC), czerwonych krwinek (RBC) oraz płytek krwi (PLTs)2,4. Mielosupresja poważnie osłabia układ odpornościowy, zwiększając ryzyko infekcji, krwawienia, anemii i innych powikłań. Znacząco obniża także jakość życia pacjentów i może być nawet zagrażająca życiu5. Dlatego łagodzenie i zapobieganie mielosupresji wywołanej chemioterapią jest kluczowe dla poprawy tolerancji pacjentów na chemioterapię oraz ogólnego przeżycia.

Obecne kliniczne leczenie mielosupresji obejmuje głównie hematopoetyczne czynniki wzrostu, takie jak czynnik stymulujący kolonie granulocytów [G-CSF], erytropoetyna [EPO]) oraz terapię transfuzyjną 6,7. Jednak takie podejścia często wiążą się z wysokimi kosztami, potencjalnymi skutkami ubocznymi i ograniczoną skutecznością. W związku z tym poszukiwanie bezpieczniejszych i skuteczniejszych metod zapobiegania i łagodzenia mielosupresji pozostaje głównym obszarem badań. W ostatnich latach tradycyjna medycyna chińska (TCM) zyskała znaczną uwagę ze względu na swoją rolę w leczeniu nowotworów i zarządzaniu skutkami ubocznymi wywołanymi chemioterapią 8,9. Uważa się, że wiele formuł TCM ma właściwości tonizujące i regulujące układ odporności, takie jak wywar Shengxuebao10, tabletki Dihuang Shengbai11 oraz związki ginsenozydu12, które nie tylko chronią zdrowe komórki i zmniejszają toksyczne skutki uboczne, ale także zwiększają skuteczność przeciwnowotworową.

Wywar Jianpi Shengxue (JPSXD) to klasyczna formuła TCM, która jest przykładem zasad terapeutycznych tonizacji Qi i odżywiania krwi13. Ta formuła jest zaawansowaną modyfikacją wywaru Sijunzi w połączeniu z Er Zhi Wan, łączącą synergiczne działanie wielu ziół w celu zwalczania Qi i niedoboru krwi14. Formuła składa się z żeń-szenia (Ren Shen), astragalusa (Huang Qi), epimedium (Yin Yang Huo), atractylod (Bai Zhu), jamu (Shan Yao), szałwii (Dan Shen), przygotowanej rehmannii (Shu Di Huang), nasion doddera (Tu Si Zi), jagody wilczej (Gou Qi Zi), ligustrum (Nv Zhen Zi), angeliki (Dang Gui), smażonego jęczmienia (Chao Mai Ya), smażonego żołądka kurczaka (Chao Ji Nei Jin), suszona skórka mandarynkowa (Chen Pi), nasiona coix (Yi Yi Ren) i kilka innych ziół. Każde zioło odgrywa określoną rolę w formule, przestrzegając zasady TCM – zioła suwerenne, ministerskie, pomocnicze i przewodnie, co zapewnia zrównoważony i ukierunkowany efekt terapeutyczny.

Dekokstura Sijunzi, podstawowa formuła w TCM, słynie ze swojej zdolności do tonizacji Qi i wzmacniania śledziony. Jest szeroko stosowany w leczeniu schorzeń związanych z Qi i niedoborem krwi, takich jak zmęczenie, słaby apetyt oraz osłabiona odporność. Nowoczesne badania farmakologiczne wykazały, że wywar Sijunzi wzmacnia funkcję odporności, wspiera hematopoezę i poprawia zdolności organizmu do samonaprawy15,16. Na tym fundamencie JPSXD dodaje dodatkowe zioła, aby jeszcze bardziej zwiększyć skuteczność w odżywianiu krwi i zwalczać bardziej złożone niedobory. Na przykład gotowa rehmannia i angelica to kluczowe zioła odżywczające krew17, podczas gdy astragalus i żeń-szeń działają synergicznie, aby zwiększyć Qi i poprawić ogólną energię18.

Najnowsze badania uwypukliły potencjalne działanie przeciwnowotworowe JPSXD, sugerując, że jego wieloskładnikowe, wielocelowe podejście może hamować wzrost guza i zwiększać skuteczność konwencjonalnych terapii nowotworowych19,20. Zdolność formuły do modulowania odpowiedzi immunologicznej i poprawy funkcji hematopoetycznej czyni ją szczególnie cenną w wspieraniu pacjentów poddawanych chemioterapii lub radioterapii, którzy często doświadczają niedoboru Qi i krwi jako skutku ubocznego leczenia21. Ponadto wykazano, że obecność ziół takich jak salwia i epimedium poprawia mikrocyrkulację i wzmacnia mechanizmy naprawy komórek, przyczyniając się do ogólnych korzyści terapeutycznych formuły22.

Nowoczesne badania farmakologiczne wykazały, że każde pojedyncze zioło w JPSXD posiada właściwości farmakologiczne związane z funkcją hematopoetyczną, antymielosupresją, immunomodulacją i przeciwutlenianiem, a także poprawą mikrokrążenia, co stanowi pośrednie wsparcie badawcze dla stosowania JPSXD w łagodzeniu mielosupresji wywołanej chemioterapią. Tabela 1 podsumowuje główne efekty farmakologiczne każdego zióła wraz z odpowiadającymi odniesieniami, ze szczególnym uwzględnieniem badań nad hematopoezą, aktywnością antymielosupresyjną, immunomodulacją oraz właściwościami antyoksydacyjnymi lub wzmacniającymi mikrocyrkulację. Złożona synergia składników w JPSXD obejmuje zarówno współpracę, jak i antagonistyczne interakcje między ziołami, celując w wiele ścieżek w celu osiągnięcia holistycznego efektu terapeutycznego. Na przykład, podczas gdy żeń-szeń i astragalus współdziałają, by tonizować Qi, salwia i przygotowana rehmannia współpracują, by odżywiać krew i poprawiać krążenie. Jednocześnie zioła takie jak suszona skórka mandarynkowa i smażony jęczmień pomagają regulować trawienie i zapobiegają stagnacji, zapewniając, że efekty wzmacniające mieszanki są skutecznie wchłaniane i wykorzystywane przez organizm23. To wieloaspektowe podejście jest zgodne z filozofią TCM, polegającą na leczeniu przyczyn choroby przy jednoczesnym zwalczaniu jej objawów.

Podsumowując, JPSXD to dobrze zbilansowana i naukowo potwierdzona formuła TCM, która uosabia zasady Qi i detoksykacji krwi. Jego potencjalne zastosowania w wzmacnianiu odporności, promowaniu hematopoezy oraz wspieraniu terapii przeciwnowotworowej czynią ją cennym dodatkiem zarówno do tradycyjnych, jak i nowoczesnych praktyk medycznych. Jednak wysokiej jakości dowody kliniczne bezpośrednio oceniające skuteczność JPSXD w łagodzeniu mielosupresji wywołanej chemioterapią pozostają niewystarczające. Potrzebne są dalsze badania, aby wyjaśnić jej podstawowe mechanizmy i zoptymalizować strategie kliniczne aplikacji. Dlatego celem tego badania jest dostarczenie dowodu koncepcji potencjalnych efektów terapeutycznych JPSXD z perspektywy mechanistycznej przedklinicznej.

Farmakologia sieciowa, ze swoim systemowym i integracyjnym charakterem, jest szeroko stosowana do identyfikacji składników aktywnych chińskich leków i wyjaśniania ich mechanizmów działania24,25. W tym badaniu zastosowano farmakologię sieciową do analizy potencjalnych szlaków sygnalizacyjnych oraz kluczowych celów dotkniętych JPSXD w kontekście mielosupresji. Dodatkowo opracowano myszy model myelosupresji indukowany cyklofosfamidem (CTX), aby ocenić odpowiednie wskaźniki i ocenić wpływ JPSXD na mielosupresję. Przeprowadzono również wstępną walidację kluczowych celów i szlaków zidentyfikowanych za pomocą farmakologii sieciowej. Jest to pierwsze badanie systematycznie integrujące farmakologię sieciową z eksperymentami na zwierzętach, aby wyjaśnić molekularny mechanizm, dzięki któremu JPSXD łagodzi mielosupresję wywołaną chemioterapią poprzez wielocelową regulację szlaków sygnalizacyjnych, takich jak szlak PI3K-AKT, wypełniając tym samym lukę w mechanistycznym rozumieniu hematopoetycznych efektów ochronnych tego wzoru związku.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

Wszystkie eksperymenty na zwierzętach przeprowadzano ściśle zgodnie z Przepisami dotyczącymi Zarządzania Zwierzętami Laboratoryjnymi oraz wytycznymi etycznymi Centrum Eksperymentalnych Zwierząt Szpitala Onkologicznego w Hunan. Protokół badania został zatwierdzony przez Komisję Etyki Zwierząt Szpitala Onkologicznego w Hunan (nr zatwierdzenia: KNZY-202416). Przez cały czas badania badacze dokładali wszelkich starań, aby zminimalizować liczbę wykorzystywanych zwierząt i złagodzić ich cierpienie.

Przygotowanie zwierząt
Łącznie 60 10-tygodniowych samców myszy C57/BL6 pozyskano z Hunan Slack Jingda Laboratory Animal Co., Ltd. (Licencyjny nr SCXK [Hu] 2021-0002). Wszystkie myszy były przechowywane w Centrum Eksperymentalnych Zwierząt w Szpitalu Onkologicznym Hunan w kontrolowanych warunkach środowiskowych: temperatura: 23 ± 2 °C, wilgotność: 50% ± 10% oraz 12-godzinny cykl światła/ciemności (8:30-20:30). Myszy miały ad libitum dostęp do jedzenia i wody. Przed eksperymentami były przyzwyczajane do środowiska poprzez codzienne obchodzenie się z nimi przez 5 minut w ciągu 3 dni. Po aklimatyzacji wszystkie 60 myszy zostało podzielonych według masy ciała i losowo podzielonych na sześć grup (n = 10 na grupę) za pomocą komputerowej tabeli liczb losowych. Grupy obejmowały: kontrolę z pustymi dawkami, model, kontrolę soli fizjologicznej (NS), wysoką dawkę JPSXD (40 mg/kg), średnią dawkę JPSXD (30 mg/kg) oraz niską dawkę JPSXD (20 mg/kg). Proces randomizacji zapewnił, że nie ma istotnych różnic w średniej masie ciała między grupami (s. > 0,05). Sekwencja randomizacji została wygenerowana i wykonana przez badaczy niezaangażowanych w kolejne procedury eksperymentalne, aby zminimalizować błędy błędu.

Przygotowanie materiałów
Bezpieczeństwo i utylizacja odpadów: Badanie to obejmowało CTX, wysoce toksyczny środek chemioterapeutyczny. Wszystkie procedury były przeprowadzane ściśle zgodnie z Regulacjami dotyczącymi Zarządzania Bezpieczeństwem Niebezpiecznymi Chemikaliami oraz standardami laboratoryjnymi Poziomu Bezpieczeństwa Biologicznego 2. Szczególne środki ostrożności obejmowały stosowanie jednorazowej odzieży ochronnej, rękawic nitrylowych, respiratorów N95 oraz gogli ochronnych przez cały personel. Przygotowanie i podawanie CTX odbywały się wewnątrz szafki klasy II w zakresie biobezpieczeństwa. Przygotowanie roztworu do wtrysku CTX odbywało się w okapu spalinowym, wykorzystując dedykowane instrumenty zapobiegające powstawaniu aerozoli. Ostre przedmioty i przedmioty skażone CTX, takie jak strzykawki i rękawiczki, były wyrzucane w pojemnikach odpornych na przebicie na ostre przedmioty. Inne zanieczyszczone materiały (np. ściółka, tkanki zwierzęce) zostały inaktywowane przez zanurzenie w 10% podchlorynie sodu przez 24 godziny, a następnie spalone przez certyfikowanego dostawcy utylizacji odpadów medycznych. W przypadku wycieku CTX obszar ten natychmiast pokrywano chłonną watą i neutralizowano roztworem 1% tiosiarczanu sodu. Incydent został następnie zgłoszony nadzorcy ds. bezpieczeństwa.

Leki i odczynniki: Zastrzyk CTX pozyskano w Baxter Oncology GmbH, Niemcy (partia nr HJ20160467). JPSXD został przygotowany przez Katedrę Tradycyjnej Medycyny Chińskiej w Szpitalu Onkologii Hunan. Składał się z 15 tradycyjnych ziół – Panax ginseng, Astragalus membranaceus, Epimedium brevicornum, Atractylodes macrocephala, Dioscorea opposita, Salvia miltiorrhiza, Rehmannia glutinosa, Cuscuta chinensis, Lycium barbarum, Ligustrum lucidum, Angelica sinensis, smażonego słodu, podszewki z żołądka kurczaka, suszonej skórki mandarynki oraz nasion Coix – połączonych zgodnie z klasycznymi współczynnikami zgodności20. Wywar został skoncentrowany do końcowego stężenia 3 kg/L (czyli 3 g/mL). Przed gavage koncentrat rozcieńczano NS, aby uzyskać wymagane stężenia dla każdej grupy dawkowej: 4 mg/mL dla grupy wysokiej dawki (40 mg/kg), 3 mg/mL dla grupy średniej dawki (30 mg/kg) oraz 2 mg/mL dla grupy niskiej dawki (20 mg/kg)26. Objętość gavage została obliczona jako 0,1 mL na 10 g masy ciała, co dało końcową objętość podawania 0,2-0,25 mL na mysz (na podstawie zakresu masy 20-25 g)27.

Zestawy ELISA: Stosowano komercyjnie dostępne zestawy ELISA dla czynnika stymulującego kolonie granulocyty-makrofagi u myszy (GM-CSF), EPO oraz trombopoetyny (TPO). Przed testem próbki surowicy rozcieńczono w 1:5 w buforze PBS (pH 7,4). Standardy były odtworzane przy 100 μL na odwiert.

Przeciwciało wtórne: IgG dla kóz sprzężonych z HRP rozcieńczono w stężeniu 1:5000 (końcowe stężenie: 0,04 μg/mL) w buforze TBST zawierającym 5% beztłuszczowego mleka suchego i 0,05% Tween-20. Roztwór był świeżo przygotowany i inkubowany w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę.

Zastosowano główne przeciwciała przeciwko Western blot: GAPDH (króliczy poliklonalny), AKT (króliczy poliklonalny), JAK2 (króliczy monoklonalny) oraz EGFR (myszy monoklonalny). Wszystkie przeciwciała były rozcieńczone w buforze TBST zawierającym 5% BSA: GAPDH (1:1000), AKT (1:1000), JAK2 (1:800) oraz EGFR (1:800). Objętość inkubacji wynosiła 100 μL na błonę.

Utrwalacz tkankowy: Przygotowano roztwór 4% paradehydu (PFA) przez rozpuszczenie proszku PFA w PBS (pH 7,4). Tkanki były fiksowane przez 24 godziny.

Roztwór barwienia hematoksyliny i eozyny (H&E): Roztwór hematoksyliny (0,1% hematoksyliny Harrisa) oraz roztwór eozyny Y (0,5%) przygotowano zgodnie ze standardowymi protokołami patologii28. Czas barwienia wynosił 5 minut dla hematoksyliny i 3 minuty dla eozyny.

Bufor blokujący immunofluorescencję: Do blokowania użyto buforu PBS zawierającego 10% surowicy koziej i 1% BSA, z inkubacją trwającą 30 minut.

Bufor rozcieńczający przeciwciała dla immunofluorescencji: Przeciwciała podstawowe (CD34+, TPO, EPO, GM-CSF) do immunofluorescencji rozcieńczono w buforze PBS zawierającym 1% BSA, zgodnie z zalecanym przez producenta współczynnikiem rozcieńczania (1:200), co dało końcowe stężenie 2,5 μg/mL. Objętość inkubacji wynosiła 50 μL na przekrój tkanki.

Indukcja modelu zwierzęcego
60 myszy zostało losowo podzielonych na sześć grup (n = 10 na grupę): kontrolne bez danych, modelowe, wysokodawkowe, średnie, niskie dawki oraz NS kontrolne. Z wyjątkiem grupy kontrolnej z pustą otrzewną, wszystkie myszy otrzymywały intraotrzewne zastrzyki CTX (20 mg/kg) 1 razy dziennie przez 3 kolejne dni, aby ustalić model mielosupresji. Wszystkie myszy modelowe wykazywały WBC < 1,8 × 109/L, PLT < 85 × 10⁹/L oraz >55% redukcję komórek z jądrem szpiku kostnego po 24 godzinach po finałowym podaniu. Protokół ten jest zgodny z ugruntowanymi modelami mielosupresji indukowanej CTX29,30. Po podaniu iniekcji myszy były codziennie monitorowane pod kątem ogólnego stanu, w tym poziomu aktywności, wyglądu sierści oraz zmian masy ciała. Od początku modelowania aż do końca eksperymentu masa ciała była rejestrowana codziennie o tej samej porze, używając wagi elektronicznej. Tempo zmiany masy ciała obliczono następująco: (waga końcowa / masa początkowa) x 100%, aby ocenić ogólny stan fizjologiczny oraz potencjalny efekt ochronny JPSXD. Po podaniu myszy były trzymane w indywidualnie wentylowanych klatkach (IVC), z których każda wyraźnie oznaczona była jako zanieczyszczona CTX. Ściółka była wymieniana co 2 dni, a wszystkie użyte pościele usuwano zgodnie z opisanymi powyżej protokołami odpadów niebezpiecznych.

Podawanie dobrzuszkowe
Myszy w grupach wysokich, średnich i niskich dawk otrzymały JPSXD poprzez gavage odpowiednio w dawkach 40 mg/kg, 30 mg/kg i 20 mg/kg. Grupa kontrolna z solą fizjologiczną otrzymała równą ilość NS. Roztwory Gavage przygotowywano odpowiednio w stężeniach 4 mg/mL, 3 mg/mL i 2 mg/mL, podawane w objętości 0,1 mL na 10 g masy ciała. Wszystkie myszy były poddawane 2 razy dziennie przez 7 kolejnych dni. Grupa kontrolna z solą fizjologiczną otrzymała 0,2-0,25 mL NS na mysz. Nie zastosowano żadnej terapii dla grup pustych i modelowych. Brak kaszlu lub szarpania się podczas gavage wskazywał na prawidłową metodę podawania.

Pobieranie krwi i przygotowanie surowicy
Trzeciegodnia po podaniu CTX pobrano 0,2 mL krwi z żyły ogonowej, aby ocenić skuteczność ustanowienia modelu poprzez pomiar liczby komórek krwi obwodowych za pomocą w pełni zautomatyzowanego analizatora hematologicznego. Po 24 godzinach po końcowym dawce JPSXD pobrano krew z zatoki oczodołowej losowo wybranych myszy (n = 10 na grupę). Część krwi wykorzystano do pełnej analizy morfologii, a resztę przetworzono do przygotowania surowicy. Próbki były wirowane w dawce 3 000 x g przez 15 minut w temperaturze 4 °C. Supernatant (przezroczysta, jasnożółta górna warstwa) został zebrany jako surowica i zaniedbana do przechowywania w temperaturze -80 °C podczas kolejnych testów ELISA oraz testów funkcji wątroby/nerek. Warstwa surowicy była wyraźnie oddzielona od warstwy komórek krwi, bez oznak hemolizy czy mętności. Mierzone parametry hematologiczne obejmowały poziomy białych krwinek, krwinek, PLT oraz hemoglobiny (Hb).

Ocena funkcji wątroby i nerek
Do pomiaru markerów funkcji wątroby w surowicy – aminotransferazy alaninowej (ALT) i aminotransferazy asparagianowej (AST) – oraz markerów funkcji nerek – azotu mocznika (BUN) i kreatyniny (Cre) użyto w pełni zautomatyzowanego analizatora biochemicznego. Wszystkie procedury podążały za standardowym protokołem operacyjnym instrumentu. Konkretnie, 100 μL surowicy zostało zmieszane z odpowiednimi zestawami testowymi (ALT, AST, BUN i Cre) i inkubowane w temperaturze 37 °C przez 5 minut. Absorpcję zmierzono na poziomie 340 nm. Każda próbka była testowana w duplikacie, a średnia wartość była wykorzystywana do analizy.

Obliczenie indeksu organowego
Po 24 godzinach po ostatecznym podaniu JPSXD myszy zostały uśpione przez stopniowe wdychanie dwutlenkiem węgla (CO2) (przepływ: 20% objętości komory/min), a następnie metodą wtórną przez zwichnięcie szyjki macicy. Bezpośrednio po eutanazji wątroba, nerki, śledziona i grasica były aseptycznie pobierane przez nacięcie środkowe brzuszne. Narządy były delikatnie rozcinane od otaczających tkanek łącznych i tłuszczu, a następnie płukane lodowatą solą fizjologiczną (NS) w celu usunięcia pozostałej krwi. Organy były wysuszane na sucho za pomocą wcześniej zważonego papieru filtracyjnego pod standaryzowanym ciśnieniem (3 delikatne prasy) i od razu ważone na skalibrowanej ważce elektronicznej (dokładność: ±0,1 mg) w temperaturze pokojowej (22 ± 1°C).

Wszystkie zabiegi wykonywano na wcześniej schłodzonej tacce ze stali nierdzewnej, aby zminimalizować autolizę. Indeks narządów został obliczony jako masa narządów (mg) podzielona przez masę ciała (g), aby ocenić wpływ JPSXD na główne narządy. Fragmenty każdej tkanki zostały zarezerwowane do analizy Western blot, natomiast pozostałe próbki zostały utrwalone w 4% PFA do późniejszej oceny histologicznej.

ELISA
Stężenia surowicy w TPO, EPO i GM-CSF były mierzone za pomocą zestawów ELISA zgodnie z instrukcjami producenta. Wszystkie etapy wirowania, w tym mycie próbki i rekonstrukcja odczynników, wykonywano w temperaturze pokojowej w stężeniu 1 000 x g przez 5 minut. Kroki płukania przeprowadzono przy użyciu buforu PBST (PBS zawierającego 0,05% Tween-20), z dodatkiem 300 μL roztworu płukania na dołek i powtórzonym 3 razy. Po umyciu na dnie studni nie pozostał żaden płyn. Po wywołaniu koloru widoczny był wyraźny niebieski osad. Absorpcję zmierzono przy 450 nm za pomocą czytnika mikropłytek po zakończeniu reakcji.

Bejcowanie H&E
Po eutanazji pobrano grasicę i kość udową. Grasica została zważona w celu obliczenia indeksu grasicy (masa grasicy [mg]/masa ciała [g]). Po ważeniu część grasicy wykorzystano do analizy zachodniej plamy, natomiast reszta wraz z kością udową została utrwalona w 4% PFA. Próbki kości udowej przeszły stopniową dehydratację etanolem (70%, 80%, 95% i 100% każda przez 1 godzinę). Prawidłowe odwodnienie wskazywało na jednolity biały wygląd, bez zmiękczenia czy deformacji. Bloki tkanek osadzonych w parafinie zostały przecięte na grubość 4 μm za pomocą obrotowego mikrotomu wyposażonego w precyzyjne ostrza z węglika wolframu (typ H31). Sekcje były upływane na kąpieli wodnej 40 °C zawierającej 0,5% roztworu żelatyny, aby usunąć zmarszczki, a następnie montowano na preparatach mikroskopowych. Wszystkie przekroje wykazywały nienaruszoną morfologię, gładkie krawędzie i jednolitą przezroczystość pod mikroskopią świetlną, co potwierdza optymalną jakość przekroju. Wykonano barwienie H&E, a następnie montaż za pomocą wodnego mediummontażowego 28. Po barwieniu jądra wydawały się niebieskie, a cytoplazmowe różowe, z wyraźnie zdefiniowaną architekturą komórkową pod mikroskopem mikroskopowym za pomocą odwróconego mikroskopu. Analiza histomorfologiczna została przeprowadzona za pomocą oprogramowania. Dla każdego fragmentu barwionego H&E wybrano trzy losowe pola z powiększeniem 200x. Oprogramowanie automatycznie określało liczbę jądrowych komórek na jednostkę powierzchni po ręcznym wyznaczeniu interesującego obszaru, a wyniki wyrażano jako średnią ± odchylenie standardowe (x̄ ± s).

Western blot
Tkanki grasicy (50 ± 2 mg/próbka) zostały ujednoliczone w lodowatym buforze RIPA zawierającym koktajl inhibitorów proteazy 1x w precyzyjnym stosunku 100 mg tkanki na 1 mL buforu, przy użyciu zmotoryzowanego homogenizatora do pelletów wyposażonego w tłuczki wolne od RNazy. Homogenizację przeprowadzono na lodzie z 15 impulsami (1 sekunda impulsu/2 sekundy przerwy), po której następowała 30-minutowa inkubacja na lodzie z wirowaniem co 10 minut. Homogenat był wirowany w 12 000 x g przez 20 minut w temperaturze 4 °C, a powstały supernatant pobierano do ilościowej identyfikacji białka. Supernatant wydawał się przezroczysty i przejrzysty, wolny od osadów czy warstw lipidowych. Stężenie białka zmierzono za pomocą zestawu do analizy białek BCA, o standardowym zakresie krzywej od 0 do 2000 μg/mL. Western blot został wykonany w celu oceny poziomu ekspresji AKT1, JAK2 i EGFR w tkance grasice, przy użyciu GAPDH jako wewnętrznej kontroli. Po elektroforezie i transferze błonowym marker białkowy (10-200 kDa) wykazał przezroczyste pasma, a pasma docelowe były wyrównane z oczekiwanymi masami cząsteczkowymi (AKT1: 60 kDa, JAK2: 130 kDa, EGFR: 170 kDa i GAPDH: 37 kDa).

Analiza densytometryczna zachodnich pasm blot została przeprowadzona za pomocą oprogramowania. Przed analizą pasy były wizualnie sprawdzane, aby potwierdzić brak rozmazywania lub dyfuzji. Procedura analizy obejmowała: ręczny wybór docelowych obszarów pasm po imporcie obrazu, z automatycznym wykrywaniem krawędzi przez oprogramowanie, a następnie lokalne odejmowanie tła przy użyciu obszarów przylegających do pasm w celu korekty szarości. Następnie wykonano obliczenie stosunku wartości szarych między docelowym białkiem a wewnętrzną kontrolą względną w celu względnej ilościfikacji. Stosowana formuła normalizująca przedstawiała się:

Względna ekspresja białka docelowego = (wartość szara pasma docelowego −tło lokalne) / (szara wartość kontroli wewnętrznej −tło lokalne)

Immunohistochemia
Barwienie immunohistochemiczne wykonano na przekrojach kości udowej. Plasterki były permeabilizowane 0,1% Triton X-100 przez 10 minut, a następnie blokowane przez 30 minut. Przeciwciała pierwotne inkubowano przez noc w temperaturze 4 °C, a przeciwciała wtórne inkubowano przez 1 godzinę w temperaturze pokojowej. Po barwieniu pod mikroskopem świetlnym zaobserwowano wyraźne sygnały pozytywne o niskim poziomie tła i bez niespecyficznych barwień. Slajdy montowano za pomocą medium anty-fade zawierającego DAPI, które barwiło jądra na niebiesko. Następnie oceniono ekspresję CD34+, TPO, EPO oraz GM-CSF. Obrazy immunohistochemii zostały przeanalizowane za pomocą cyfrowego oprogramowania patologicznego (wersja 2.1.0). Przed analizą potwierdzono, że zdjęcia nie są prześwietlane ani pogorszeniem sygnału. Procedura analizy32obejmowała:

Wybór modelu: Użyto wstępnie wytrenowanego modelu segmentacji szpiku kostnego (opartego na U-Net) do automatycznej identyfikacji obszarów tkanek33.
Ustawienie progu: Progi sygnału dodatniego zostały zdefiniowane na podstawie grupy kontrolnej z ujemnym wpływem. Obszary o intensywności chromogenicznej przekraczającej średnią tła o trzy odchylenia standardowe zostały sklasyfikowane jako dodatnie.
Definicja ROI: Oprogramowanie automatycznie dzieliło każde pole na obszary siatki o wymiarach 500 × 500 μm i obliczało liczbę dodatnich komórek na jednostkę powierzchni (dodatnia liczba komórek/powierzchnia pola).
Eksport danych: Automatycznie generowano statystyczny raport o dodatniej gęstości komórek.

Analiza statystyczna
Analiza statystyczna była przeprowadzana za pomocą oprogramowania SPSS (wersja 22.0). Dane wyrażono jako x̄ ± s. Przed porównaniami międzygrupowymi normalność oceniano za pomocą testu Shapiro-Wilka, a jednorodność wariancji testem Levene'a. Jeśli potwierdzono zarówno rozkład normalny (p > 0,05), jak i jednorodność wariancji (p > 0,05), zastosowano jednokierunkową ANOVA do porównań grupowych. Wielokrotne porównania po próbie przeprowadzono metodą Najmniej Znaczącej Różnicy (LSD); aby kontrolować błąd typu I, wszystkie post-hoc wartości P zostały skorygowane za pomocą korekty Bonferroniego, przy czym skorygowane p < 0,05 uznano za statystycznie istotne.

Jeśli dane nie spełniały założeń normalności lub jednorodności wariancji (p ≤0,05 w którymkolwiek z testów), stosowano test Kruskala-Wallisa, a następnie test Dunna do analizy post hoc z korektą Bonferroniego. Wszystkie wykresy statystyczne i wizualizacje zostały wygenerowane za pomocą GraphPad Prism (wersja 9.0). Poziom istotności został ustalony na α = 0,05. Wszystkie zgłoszone wartości p były skorygowane. Wartości odstające zostały zidentyfikowane za pomocą testu Grubbsa (α = 0,05) i wykluczone tylko wtedy, gdy wyraźnie wynikały z błędu eksperymentalnego. Wszystkie pozostałe dane zostały uwzględnione w ostatecznej analizie. Wyniki przedstawiane są jako x̄ ± s.

Metodologia farmakologii sieciowej
Badanie to zastosowało podejście farmakologii sieciowej, aby zbadać potencjalne mechanizmy, dzięki którym JPSXD łagodzi mielosupresję wywołaną chemioterapią. Najpierw składniki chemiczne JPSXD oraz odpowiadające im cele zostały pobrane z Platformy Bazy Danych i Analiz Systemów Medycyny Chińskiej (TCMSP, https://old.tcmsp-e.com/tcmsp.php). Kryteria przesiewowe zostały ustalone następująco: biodostępność doustna (OB) ≥30% oraz podobieństwo do leku (DL) ≥0,18. Dla związków nieuwzględnionych w bazie TCMSP przewidywanie celów przeprowadzono za pomocą platformy SwissTargetPrediction (https://www.swisstargetprediction.ch/).

Aby upewnić się, że wybrane związki obejmują główne bioaktywne składniki JPSXD, odwołano się do Farmakopei Chińskiej Republiki Ludowejnr 34. Konkretnie, zidentyfikowaliśmy związki markerowe, takie jak ginsenozydy, astragalozydy IV, ikariina i kwasy salvianolowe, przeglądając sekcje Identyfikacji i Testu dla każdego zioła. Związki te, powszechnie używane jako markery kontroli jakości35, mają określone struktury chemiczne i wymagania ilościowe. Dla dokładności porównaliśmy Ogólne Ogłoszenia i Dodatki Farmakopei, aby potwierdzić konwencje nazewnictwa i metody analityczne (np. wysokowydajna chromatografia cieczowa, HPLC). Analiza potwierdziła, że kryteria przesiewowe (OB ≥30%, DL ≥0,18) skutecznie objęły podstawowe związki formuły36, w tym kluczowe składniki farmakopeialne, takie jak ginsenozydy Rg1 i Rb1 (z Panax ginseng), astragalozyd IV (z Astragalus membranaceus) oraz ikarina (z Epimedium brevicornum), co wskazuje, że wybrane związki są reprezentatywne i obejmują główne składniki aktywne odpowiedzialne za efekty JPSXD wzmacniające qi i krew.

Następnie z bazy GeneCards (https://www.genecards.org/) pobrano cele genów związane z mielospresją, a wyniki pobrano do arkusza kalkulacyjnego. Do dalszej analizy wybrano geny o wskaźniku relewancji ≥44. Przecięcie celów leków i genów związanych z chorobą zobrazowano za pomocą diagramu Venna, a nakładające się geny zostały zaimportowane do bazy danych STRING (https://string-db.org/). Organizm został ustawiony na człowieka, a źródła interakcji ograniczały się do eksperymentów i baz danych z minimalnym wymaganym wynikiem interakcji > 0,7. Powstała sieć interakcji białko-białko (PPI) została następnie przeanalizowana pod kątem cech topologicznych w celu identyfikacji kluczowych celów i zwizualizowana za pomocą Cytoscape 3.10.2.

Na podstawie zidentyfikowanych kluczowych celów przeprowadzono analizy wzbogacania Ontologii Genów (GO) oraz Encyklopedii Genów i Genomów z Kioto (KEGG) z wykorzystaniem bazy danych DAVID (https://david.ncifcrf.gov/). Parametry zostały ustalone następująco: Count ≥5, wynik EASE ≥0,05 oraz wartość p < 0,01. Wyniki wzbogacania były wizualizowane za pomocą platformy Microbiological Letter (http://www.bioinfo-cloud.org/). Analiza szlaków dodatkowo wyjaśniła kluczowe szlaki sygnalizacyjne i markery regulacyjne, ujawniając tym samym potencjalne mechanizmy, dzięki którym JPSXD łagodzi mielosupresję wywołaną chemioterapią.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Analiza farmakologii sieciowej
Identyfikacja aktywnych związków i celów
Najpierw zidentyfikowaliśmy główne związki markerowe każdego zioła w JPSXD na podstawie literatury, abyzapewnić kompleksowy wybór34. Konkretnie, konsultując się z wpisami farmakopealnymi dla odpowiednich ziół (np. Panax ginseng, Astragalus membranaceus, Angelica sinensis), sporządziliśmy listę oficjalnych składników markerowych dla wszystkich 15 skład...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

W obliczu rosnącej globalnej liczby przypadków nowotworów środowisko medyczne stoi przed dwoma wyzwaniami: nie tylko w leczeniu samego raka, ale także w zarządzaniu powiązanymi skutkami ubocznymi, wśród których mielospresja jest szczególnie częstą i ciężką reakcją niepożądaną43. Badanie to systematycznie badało rolę i potencjalne mechanizmy JPSXD w łagodzeniu mielosupresji wywołanej CTX u myszy, wykorzystując połączenie farmakologii sieciowej i eksperymentów na zwierzętach. Wyniki sugerują, że JPS...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy deklarują, że nie mają żadnych konfliktów interesów.

Podziękowania

Badania te zostały finansowo wsparte przez projekt Integrative Western and Traditional Chinese Medicine Focus-DCA Mode Intervention for Prevention Postoperative Infections in Elderly Patients with Gastrointestinal Malignityes, z numerem projektu A2023053, finansowanego przez Hunan Provincial Administration of Traditional Chinese Medicine.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
4% paraformaldehydu (PFA)Sigma-AldrichP6148
AKT (pan) Rabbit mAbTechnologia sygnalizacji komórkowej#4691
Automatyczna pralka do mikropłytBioTek (Agilent)ELx405
Analizator hematologii samochodowej BC-2800vetMindrayBC-2800vet
Mikrotom kriostatuThermo Fisher ScientificCryoStar NX50
Iniekcja z cyklofosfamiduBaxter Oncology GmbHN/A (Grupa: HJ20160467)
Mikroskop E100NikonE100
Przeciwciało EGFR (A-10)Santa Cruz BiotechnologySC-373746
Maszyna osadzającaLeicaEG1150
Zestaw ELISA EPO (Mysz)R& D SystemsMEP00B
Przeciwciało poliklonalne GAPDH dla królikówProteintech10494-1-AP
GM-CSF (mysz) zestaw ELISAR& D SystemsMMC00B
Koza antykrólikowa IgG sprzężona z HRPJackson ImmunoResearch111-035-003
H& Zestaw do barwienia ESigma-AldrichHT10
Wysokoobrotowa chłodzona wirówkaThermo Fisher ScientificSorvall ST 16R
Wysokowydajna maszynka do rozdrabniania tkanekServicebioKZ-II
Pióro immunohistochemiiLaboratoria VectorH-4000
JAK2 Rabbit mAbAbcamab108596
Wywar Jianpi Shengxue (JPSXD)Apteka Szpitala Onkologicznego w HunanFormułowanie na zamówienie
Czytnik mikropłytBioTek (Agilent)Synergia H1
Sól fizjologicznaBaxter2B1324X
Mikrotom obrotowyLeicaRM2016
Procesor tkanekLeicaASP300S
TPO (mysz) zestaw ELISAR& D SystemsMTP00B
Vortex MixerServicebioMX-F

Bibliografia

  1. Wang, D. H., et al. Validated herbal extracts for alleviating chemotherapy-induced myelosuppression: A systematic review and meta-analysis. Phytomedicine. 141, 156659(2025).
  2. Goldschmidt, J., et al. Burden of chemotherapy-induced myelosuppression among patients with ES-SCLC in US community oncology settings. Future Onco. 18 (35), 3881-3894 (2022).
  3. Jia, W., Li, X., Zhang, T., Wang, C., Zhen, M. Efficiently normalizing leukopoiesis by gadofullerene nanoparticles to ameliorate radiation-triggered myelosuppression. J Mater Chem. B. 11 (31), 7401-7409 (2023).
  4. Hart, L., et al. Burden of chemotherapy-induced myelosuppression among patients with extensive-stage small cell lung cancer: A retrospective study from community oncology practices. Cancer med. 12 (8), 10020-10030 (2023).
  5. Pan, L., Zhang, T., Cao, H., Sun, H., Liu, G. Ginsenoside Rg3 for Chemotherapy-Induced Myelosuppression: A Meta-Analysis and Systematic Review. Front Pharmacol. 11, 649(2020).
  6. Schneider, A., Kuhn, H. -G., Schäbitz, W. R. A role for G-CSF (granulocyte-colony stimulating factor) in the central nervous system. Cell Cycle. 4 (12), 1753-1757 (2005).
  7. Hart, C., Grassinger, J., Andreesen, R., Hennemann, B. EPO in combination with G-CSF improves mobilization effectiveness after chemotherapy with ifosfamide, epirubicin and etoposide and reduces costs during mobilization and transplantation of autologous hematopoietic progenitor cells. Bone Marrow Transpl. 43 (3), 197-206 (2008).
  8. Miao, K., Liu, W., Xu, J., Qian, Z., Zhang, Q. Harnessing the power of traditional Chinese medicine monomers and compound prescriptions to boost cancer immunotherapy. Front Immunol. 14, 1277243(2023).
  9. Li, S., et al. Tailoring traditional Chinese medicine in cancer therapy. Mol Cancer. 24 (1), 27(2025).
  10. Ma, L. X., Ai, P., Li, H., Vardy, J. The prophylactic use of Chinese herbal medicine for chemotherapy-induced leucopenia in oncology patients: a systematic review and meta-analysis of randomized clinical trials. Support Care Cancer. 23 (2), 561-579 (2015).
  11. Han, J., et al. Study of the Effects and Mechanisms of Ginsenoside Compound K on Myelosuppression. J Agr Food Chem. 67 (5), 1402-1408 (2019).
  12. Shang, L., et al. Mechanism of Sijunzi Decoction in the treatment of colorectal cancer based on network pharmacology and experimental validation. J Ethnopharmacol. 302, 115876(2023).
  13. Zhao, N., et al. Jianpi-Yangxue-Jiedu decoction improves the energy metabolism of psoriasis mice by regulating the electron transfer of oxidative phosphorylation. J Ethnopharmacol. 324, 117714(2024).
  14. Zhang, S., et al. Jianpi Huayu Jiedu Decoction prevents the progression of H. pylori and MNU-induced gastric precancerous lesions by inhibiting ferroptosis and remodeling linoleic acid metabolism. J Ethnopharmacol. 352, 120217(2025).
  15. Gao, B., Wang, R., Peng, Y., Li, X. Effects of a homogeneous polysaccharide from Sijunzi decoction on human intestinal microbes and short chain fatty acids in vitro. J Ethnopharmacol. 224, 465-473 (2018).
  16. Luo, X., et al. STAT3 as a critical target of Sijunzi Decoction in the treatment of gastric cancer: evidence from integrated network pharmacology and experimental validation. Front Mol Biosci. 12, 1683806(2025).
  17. Zhang, L., et al. Danggui buxue decoction attenuates doxorubicin-induced cardiotoxicity by inhibiting ZBP1-mediated PANoptosis in vivo and in vitro. Phytomedicine. 145, 157037(2025).
  18. Mei, Z. G., et al. Fermented Chinese formula Shuan-Tong-Ling attenuates ischemic stroke by inhibiting inflammation and apoptosis. Neural Regen Res. 12 (3), 425-432 (2017).
  19. Huang, Q., et al. Jian-Pi-Bu-Xue-Formula Alleviates Cyclophosphamide-Induced Myelosuppression via Up-Regulating NRF2/HO1/NQO1 Signaling. Front Pharmacol. 11, 1302(2020).
  20. Yang, J., et al. Effect of Jianpi Shengxue Tablet on Iron Metabolism and Nutritional Status in Patients with Renal Anemia: A Prospective, Randomized, Open, Parallel Controlled and Multicenter Clinical Study. Curr Med Sci. 44 (3), 603-610 (2024).
  21. Hou, B., et al. Oral Chinese Herbal Medicine as an Adjuvant Treatment for Chemotherapy, or Radiotherapy, Induced Myelosuppression: A Systematic Review and Meta-Analysis of Randomized Controlled Trials. Evid-Based Compl Alt. 2017, 3432750(2017).
  22. Han, J. Y., et al. Ameliorating effects of compounds derived from Salvia miltiorrhiza root extract on microcirculatory disturbance and target organ injury by ischemia and reperfusion. Pharmacol Therapeut. 117 (2), 280-295 (2007).
  23. Liu, Y., et al. Integration of Network Pharmacology and Experimental Validation to Explore Jixueteng - Yinyanghuo Herb Pair Alleviate Cisplatin-Induced Myelosuppression. Integr Cancer Ther. 23, 15347354241237969(2024).
  24. Liu, Y., et al. Anti-Alzheimers molecular mechanism of icariin: insights from gut microbiota, metabolomics, and network pharmacology. J Transl Med. 21 (1), 277(2023).
  25. Zhang, H., et al. Bioinformatics and Network Pharmacology Identify the Therapeutic Role and Potential Mechanism of Melatonin in AD and Rosacea. Front Immunol. 12, 756550(2021).
  26. Qu, W., et al. Effect of Jianpi Shengxue Granule on Fertility and Early Embryo Development Toxicity of Rats. Chin J Integr Med. 37 (3), 356-359 (2017).
  27. Ouyang, X., et al. Induction of anaplastic lymphoma kinase (ALK) as a novel mechanism of EGFR inhibitor resistance in head and neck squamous cell carcinoma patient-derived models. Cancer Biol Ther. 19 (10), 921-933 (2018).
  28. Cinque, L., et al. Novel association of MEN1 gene mutations with parathyroid carcinoma. Oncol Lett. 14 (1), 23-30 (2017).
  29. Huyan, X. H., Lin, Y. P., Gao, T., Chen, R. Y., Fan, Y. M. Immunosuppressive effect of cyclophosphamide on white blood cells and lymphocyte subpopulations from peripheral blood of Balb/c mice. Int Immunopharmacol. 11 (9), 1293-1297 (2011).
  30. He, Y., et al. Mesenchymal stem cells empower T cells in the lymph nodes via MCP-1/PD-L1 axis. Cell Death Dis. 13 (4), 365(2022).
  31. Recordati, C., et al. Repeated oral administration of low doses of silver in mice: tissue distribution and effects on central nervous system. Part Fibre Toxicol. 18 (1), 23(2021).
  32. Ram, S., et al. Pixelwise H-score: A novel digital image analysis-based metric to quantify membrane biomarker expression from immunohistochemistry images. Plos One. 16 (9), e0245638(2021).
  33. Woo, B., et al. Automated anomaly-aware 3D segmentation of bones and cartilages in knee MR images from the Osteoarthritis Initiative. Med Image Anal. 93, 103089(2024).
  34. Chinese Pharmacopoeia Commission. Pharmacopeia of the People's Republic of China. , People's Medical Publishing House. Beijing, China. (2005).
  35. Chen, Y., et al. Quality Control of Glehniae Radix, the Root of Glehnia Littoralis Fr. Schmidt ex Miq. Along its Value Chains. Front Pharmacol. 12, 729554(2021).
  36. Ru, J., et al. TCMSP: a database of systems pharmacology for drug discovery from herbal medicines. J Cheminformatics. 6, 13(2014).
  37. Matsuura, S., et al. Negative effects of GM-CSF signaling in a murine model of t(8;21)-induced leukemia. Blood. 119 (13), 3155-3163 (2012).
  38. Tsiftsoglou, A. S. Erythropoietin (EPO) as a Key Regulator of Erythropoiesis, Bone Remodeling and Endothelial Transdifferentiation of Multipotent Mesenchymal Stem Cells (MSCs): Implications in Regenerative Medicine. Cells. 10 (8), 2140(2021).
  39. Yu, L., Wei, J., Liu, P. Attacking the PI3K/Akt/mTOR signaling pathway for targeted therapeutic treatment in human cancer. Semin Cancer Biol. 85, 69-94 (2021).
  40. Alves, C. L., Ditzel, H. J. Drugging the PI3K/AKT/mTOR Pathway in ER+ Breast Cancer. Int J Mol Sci. 24 (5), 4522(2023).
  41. Guan, P., Cui, R., Wang, Q., Sun, Y. A 3D hydrogel loaded with exosomes derived from bone marrow stem cells promotes cartilage repair in rats by modulating immunological microenvironment. Nanfang Yike Daxue Xuebao. 42 (4), 528-537 (2022).
  42. Liu, Z., et al. Activating Angiogenesis and Immunoregulation to Propel Bone Regeneration via Deferoxamine-Laden Mg-Mediated Tantalum Oxide Nanoplatform. Acs Appl Mater Inter. 16 (19), 24384-24397 (2024).
  43. McCloskey, E. V., Guest, J. F., Kanis, J. A. The clinical and cost considerations of bisphosphonates in preventing bone complications in patients with metastatic breast cancer or multiple myeloma. Drugs. 61 (9), 1253-1274 (2001).
  44. Lin, L., et al. Characterization of Differences in Chemical Profiles and Antioxidant Activities of Schisandra chinensis and Schisandra sphenanthera Based on Multi-Technique Data Fusion. Molecules. 29 (20), 4865(2024).
  45. Dabeek, W. M., Marra, M. V. Dietary Quercetin and Kaempferol: Bioavailability and Potential Cardiovascular-Related Bioactivity in Humans. Nutrients. 11 (10), 2288(2019).
  46. Li, W., et al. Flavonoids from Glycyrrhiza pallidiflora hairy root cultures. Phytochemistry. 60 (4), 351-355 (2002).
  47. Nian, Q., Liu, R., Zeng, J. Unraveling the pathogenesis of myelosuppression and therapeutic potential of natural products. Phytomedicine. 132, 155810(2024).
  48. Kellogg, C., Equils, O. The role of the thymus in COVID-19 disease severity: implications for antibody treatment and immunization. Hum Vaccin Immunother. 17 (3), 638-643 (2020).
  49. Liu, X., et al. Critical role of niche S100A8 for acute myeloid leukemia progression and hematopoiesis regeneration. Blood Adv. 9 (24), 6575-6589 (2025).
  50. Jafari, M., Ghadami, E., Dadkhah, T., Akhavan-Niaki, H. PI3k/AKT signaling pathway: Erythropoiesis and beyond. J Cell Physiol. 234 (3), 2373-2385 (2018).
  51. Novoplansky, O., et al. Activation of the EGFR/PI3K/AKT pathway limits the efficacy of trametinib treatment in head and neck cancer. Mol Oncol. 17 (12), 2618-2636 (2023).
  52. Weidemann, A., Johnson, R. S. Nonrenal regulation of EPO synthesis. Kidney Int. 75 (7), 682-688 (2009).
  53. Pallard, C., et al. Thrombopoietin activates a STAT5-like factor in hematopoietic cells. Embo J. 14 (12), 2847-2856 (1995).
  54. Stasi, R., et al. Thrombopoietic agents. Blood Reviews. 24 (4-5), 179-190 (2010).
  55. He, K., et al. G-CSF/GM-CSF-induced hematopoietic dysregulation in the progression of solid tumors. FEBS Open Bio. 12 (7), 1268-1285 (2022).
  56. Patsoukis, N., et al. Immunometabolic Regulations Mediated by Coinhibitory Receptors and Their Impact on T Cell Immune Responses. Front Immunol. 8, 330(2017).
  57. Geraud, A., et al. Clinical Pharmacology and Interplay of Immune Checkpoint Agents: A Yin-Yang Balance. Annu Rev Pharmacol. 61, 85-112 (2020).
  58. Naveiras, O., et al. Bone-marrow adipocytes as negative regulators of the haematopoietic microenvironment. Nature. 460 (7252), 259-263 (2009).
  59. Ambrosi, T. H., et al. Adipocyte Accumulation in the Bone Marrow during Obesity and Aging Impairs Stem Cell-Based Hematopoietic and Bone Regeneration. Cell Stem Cell. 20 (6), 771-784 (2017).
  60. Zhang, L., et al. Qingjie Fuzheng Granule attenuates 5-fluorouracil-induced intestinal mucosal damage. Biomed Pharmacother. 118, 109223(2019).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

Mielosupresja indukowana cyklofosfamidąfarmakologia sieciowasieć oddziaływań białkowychwzbogacenie KEGGontologia genówszlak PI3K-Aktszlak JAK-STATkomórki CD34-dodatnieleukopenia indukowana chemioterapią

Ten artykuł został opublikowany

Film wkrótce dostępny

Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki korzystania z usługi

Zasady

Prawa autorskie © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.