Eksperymentalna ocena polimorfizmu genów ABCB1 C3435T (rs1045642) i jego związku z pooperacyjną analgezją w chirurgii wymiany stawu biodrowego

Podsumowanie

Badanie to badało, czy powszechny wariant genetyczny wpływa na kontrolę bólu po operacji po wymianie stawu biodrowego. Pacjenci z różnymi genotypami wykazywali wyraźne różnice w intensywności bólu, stosowaniu leków przeciwbólowych oraz biologicznych reakcjach związanych z bólem.

Streszczenie

Badanie to badało związek między polimorfizmem genów ABCB1 (MDR1) C3435T (rs1045642) a pooperacyjną analgezją u pacjentów poddawanych operacji wymiany stawu biodrowego. Łącznie 100 pacjentów, którzy przeszli operację wymiany stawu biodrowego w naszym szpitalu między styczniem 2023 a styczniem 2024, otrzymało pooperacyjną dożylną anestezję przeciwbólową z użyciem sufentanilu kontrolowaną przez pacjenta. Pobrano próbki surowicy przedoperacyjnej, a detekcję genomową przeprowadzono za pomocą testu genotypowego TaqMan SNP. Według genotypu C3435T pacjenci byli klasyfikowani na homozygoty typu dzikiego (grupa CC), heterozygoty mutowane (grupa CT) oraz homozygoty mutowane (grupa TT). Parametry kliniczne, w tym cechy wyjściowe, wyniki bólu z Skali Analogów Wzrokowych (VAS), spożycie sufentanylu, mediatory bólu w surowicy (prostaglandyna E2 (PGE2), substancja P (SP) oraz β-endorfiny (β-EP)), wyniki lęku i depresji Hamiltona, jakość snu oraz częstość występowania działań niepożądanych w ciągu 24 godzin po operacji, porównano między grupami. Charakterystyki wyjściowe były podobne w różnych grupach (s. > 0,05). Wyniki VAS, dawka sufentanylu oraz poziomy PGE2, SP i β-EP w surowicy po 24 godzinach były istotnie niższe w grupach CT i TT w porównaniu z grupą CC (p < 0,05). Grupa TT wykazywała również niższe wyniki Hamiltona w zakresie lęku i depresji w porównaniu z grupami CC i CT (p < 0,05), podczas gdy grupa CT wykazywała wyższe wyniki lęku i depresji niż grupa CC (p < 0,05). Jakość snu i wskaźniki zdarzeń niepożądanych nie różniły się istotnie w poszczególnych grupach (p > 0,05). Wyniki te sugerują potencjalny związek między polimorfizmem ABCB1 (MDR1) C3435T (rs1045642) a zmiennością w skuteczności pooperacyjnej leków przeciwbólowych. Pacjenci noszący genotyp TT mieli tendencję do lepszej analgezji, niższego zapotrzebowania na sufentanyl oraz lepszych wyników psychologicznych. Chociaż wyniki te są obiecujące, należy je interpretować ostrożnie ze względu na małą próbkę i projekt z jednym centrum. Konieczne są dalsze badania na dużą skalę, aby potwierdzić te obserwacje i ocenić ich kliniczną skuteczność.

Wprowadzenie

Wymiana stawu biodrowego oznacza zastąpienie uszkodzonego stawu biodrowego sztuczną protezą biodrową poprzez zabieg chirurgiczny. W przypadku wczesnej martwicy głowy udowej, choroby zwyrodnieniowej stawów stawów stawu biodrowego i innych chorób objawy można złagodzić, a schorzenie opóźnić dzięki zachowawczemu leczeniu zintegrowanym tradycyjnym medycyną chińską i zachodnią¹. Gdy ból i deformacje stawu biodrowego wpływają na chodzenie, nie można ich złagodzić zachowawczym leczeniem, takim jak leki, które poważnie wpływają na jakość życia. Operację wymiany biodra można wybrać, aby złagodzić ból stawów, odbudować funkcję biodra oraz poprawić jakość życia. Seria zmian patofizjologicznych spowodowanych bólem zwiększy ryzyko chorób sercowo-naczyniowych i mózgowych u osób starszych ^2,3. Ból pooperacyjny poważnie wpływa na regenerację funkcji stawu biodrowego, wydłuża czas leżenia w łóżku pacjentów oraz zwiększa ryzyko zakrzepicy kończyn dolnych⁴. Skuteczne przeciwból może nie tylko złagodzić reakcje stresowe po operacji, ale także skrócić czas hospitalizacji pacjentów. Regulacja epigenetyczna oznacza, że sekwencja DNA się nie zmienia, ale ekspresja genów jest wpływana przez czynniki środowiskowe, i tak dalej⁵. Najnowsze^{badania wykazały, że istnieje} korelacja między regulacją epigenetyczną a występowaniem i rozwojem przewlekłego bólu, a przewlekły lub ostry ból często jest wynikiem interakcji między czynnikami środowiskowymi a genami. Zrozumienie związku między epigenetycznymi komponentami regulacyjnymi a przewlekłym bólem oraz identyfikacja biomarkerów (takich jak te związane z regulacją epigenetyczną) ściśle powiązanych z występowaniem i rozwojem bólu, zwłaszcza przewlekłego, może pomóc w diagnozowaniu podatności na przewlekły ból, ocenie efektów leczenia farmakologicznym, a ostatecznie promować indywidualną i precyzyjną analgezję. Polimorfizm C3435T (rs1045642) w genie ABCB1 (gen oporności na wiele leków 1, MDR1) to dobrze scharakteryzowany wariant pojedynczego nukleotydu znajdujący się w eksonie 26. Ten polimorfizm koduje wariant P-glikoproteiny (P-gp), transbłonowego transportera wypływu, który reguluje komórkowe pobieranie i wypływ różnych leków, w tym opioidów, wpływając tym samym na ich farmakokinetykę i odpowiedź terapeutyczną⁸. Wśród genetycznych wariantów ABCB1, synonimowy polimorfizm C3435T (rs1045642) był szeroko badanych w odniesieniu do zmienności międzyindywidualnej odpowiedzi na leki. ABCB1 C3435T (rs1045642) to synonimiczne podstawienie znajdujące się w eksonie 26 genu MDR1⁹. Chociaż nie zmienia sekwencji aminokwasowej, narastające dowody sugerują, że wariant ten może wpływać na stabilność mRNA i kinetykę translacji, a tym samym na fałdowanie glikoprotein, poziom ekspresji lub efektywność transportu. Chociaż wyniki badań nie są całkowicie spójne, kilka raportów wskazuje, że allel T wiąże się ze zmniejszoną ekspresją P-gp lub zmienioną specyficznością substratu¹⁰. Ponieważ P-gp wyrażany w barierze krew-mózg ogranicza penetrację wielu leków, w tym niektórych opioidów, w układzie ośrodkowym nerwowym, polimorfizm ABCB1 C3435T może przyczyniać się do indywidualnych różnic w wrażliwości na sufentanyl oraz skutków niepożądanych związanych z opioidami¹¹.

Celem tego badania było zbadanie, czy polimorfizm ABCB1 C3435T wiąże się z międzyindywidualną zmiennością skuteczności pooperacyjnej terapii przeciwbólowej oraz wynikami bólowymi u pacjentów poddawanych operacji wymiany stawu biodrowego. Operacja wymiany stawu biodrowego jest często kojarzona z umiarkowanym do silnego bólu pooperacyjnego, a opioidy, takie jak sufentanyl, są rutynowo stosowane w leczeniu przeciwbólu pooperacyjnego. Jednak istnieją istotne różnice międzyindywidualne w odpowiedzi przeciwbólowej i skutkach niepożądanych związanych z opioidami, których nie da się w pełni wyjaśnić wyłącznie czynnikami klinicznymi. Ponieważ P-glikoprotein kodowany przez gen ABCB1 odgrywa kluczową rolę w regulacji transportu leków przez błony biologiczne, w tym barierę krew-mózg, zmienność genetyczna w ABCB1 może wpływać na dyspozycję opioidową oraz centralne działania analgetyczne. Dlatego badanie związku między polimorfizmem ABCB1 C3435T a pooperacyjną analgezją może pomóc wyjaśnić genetyczny wkład w zmienność kontroli bólu po operacji wymiany stawu biodrowego. Poprzez omówienie różnic w efektach analgetycznych pooperacyjnych u pacjentów o różnych genotypach, badanie to ma na celu ujawnienie indywidualnych różnic w bólu pooperacyjnym oraz dostarczenie teoretycznych podstaw dla klinicznej indywidualnej analgezji. Jednocześnie poszerza to zrozumienie mechanizmu, dzięki któremu polimorfizm genu C3435T wpływa na analgezję pooperacyjną, stanowiąc podstawę dla dalszych badań.

Protokół

Badanie to zostało przeprowadzone zgodnie z Deklaracją Helsińską i zatwierdzone przez Komitet Etyki Medycznej Szpitala Tradycyjnej Medycyny Chińskiej w Fuzhou (nr zatwierdzenia: LC-2023-048). Przed zapisaniem się wszyscy uczestnicy uzyskali pisemną świadomą zgodę.

Dane i metody
Na podstawie hipotezy badawczej opracowaliśmy protokół analizy prospektywnej kohorty. Łącznie 100 pacjentów poddawanych planowej operacji wymiany stawu biodrowego zostało prospektywnie zapisanych, ze średnim wiekiem 58,41 ± 6,97 roku. Rysunek 1 ilustruje techniczną mapę drogową tego protokołu, z szczegółowymi opisami projektu badania w poniższych sekcjach.

Projekt badania i uczestnicy
Było to prospektywne badanie kohortowe obejmujące kolejne dorosłe osoby zaplanowane na pierwotną artroplastykę stawu biodrowego pod znieczuleniem ogólnym między styczniem 2023 a styczniem 2024 roku. Kryteria włączenia to wiek 18-60 lat, klasa I-II według American Society of Anestesiologists (ASA) oraz operacje wykonane przez ten sam zespół ortopedyczny. Kryteria wykluczenia obejmowały istotną dysfunkcję krążeniowo-płucną, wątrobową lub nerkową (definiowaną jako kreatynina w surowicy >1,5 mg/dL lub ALT >3 razy górna granica normy); historię przewlekłego bólu (np. fibromialgię, ból neuropatyczny); nadużywanie środków uspokajających lub opioidów; znana alergia na środki przeciwbólowe; narażenie na inne opioidy podczas obecnej choroby; oraz długotrwałe przedoperacyjne stosowanie leków przeciwbólowych lub sterydów (>1 tydzień w ciągu 3 miesięcy przed operacją). Od uczestników pobrano 5 ml krwi żylnej z antykrzepową metodą EDTA przed operacją do genotypowania. DNA genomowe zostało wyodrębnione z krwi obwodowej za pomocą komercyjnego zestawu do ekstrakcji DNA zgodnie z instrukcjami producenta. Polimorfizm ABCB1 C3435T (rs1045642) został zgenotypizowany metodami opartymi na reakcji łańcuchowej polimerazy, a określenie genotypu przeprowadzono zgodnie z ustalonymi protokołami¹⁰. Po genotypowaniu polimorfizmu ABCB1 C3435T (rs1045642) uczestnicy zostali podzieleni na grupy CC, CT i TT. Nie uwzględniono zewnętrznej zdrowej grupy kontrolnej; Wszystkie porównania przeprowadzono między grupami genotypowymi (CC, CT, TT). Personel laboratoryjny analizujący biomarkery i genotypy był nieświadomy wyników klinicznych.

Znieczulenie i leczenie śródoperacyjne
Standardowe monitorowanie obejmowało elektrokardiografię, nieinwazyjne pomiary ciśnienia krwi (mierzone co 5 minut), pulsoksymetrię oraz dwutlenek węgla na końcu pływów (EtCO₂). Założono dożylną linię za pomocą cewnika 18G, a pacjenci byli preoxygenowani 100% O₂ przez 3 minuty. Znieczulenie indukowano midazolamem 0,05 mg/kg, cisatracurium 0,1 mg/kg, sufentanylem 0,4 μg/kg oraz propofolem stopniowo dawkowaną w dawce 1-2 mg/kg aż do utraty przytomności i odpowiedniego rozluźnienia szczęki. Intubacja tchawicy została przeprowadzona po potwierdzeniu wystarczającej blokady nerwowo-mięśniowej (liczba czterech pociągów = 0). Wentylacja mechaniczna została ustawiona w trybie kontrolowanym objętościowo, z prędkością oddechową 15 oddechów na minutę, objętością pływową 6-8 mL/kg przewidywaną masą ciała oraz PEEP na 5 cm H_2O, z dostosowaniami utrzymującymi EtCO₂ na poziomie 35-45 mmHg. Znieczulenie utrzymywano przy użyciu propofolu 0,08-0,12 mg/kg/min oraz sufentanylu 0,15-0,30 μg/kg/h. Znieczulenie dożylne zostało przerwane po zamknięciu rany. Hemodynamikę leczono za pomocą bolusów płynowych lub wazopresorów w razie potrzeby, aby utrzymać MAP w granicach 20% wartości wyjściowej.

Zabieg artroplastyki biodra¹²
Pacjenci byli ustawiani w pozycji bocznej dekubitu z operatującą stroną do góry. Zastosowano podejście tylno-boczne: wykonano nacięcie skóry o długości 15-20 cm, wyśrodkowane na krętarzu większym. Nacięto tkankę podskórną i powięzi lata, a pośladek maksymalny został tępo rozcięty. Odsłonięto tylną torebkę, a wzdłuż krawędzi padzieczki wykonano kapsulotomię w kształcie litery T. Biodro zostało zwichnięte przez rotację zewnętrzną i adukcję. Główka kości udowej została odcięta, a szyja kości udowej przycięta do 1,0-1,5 cm powyżej krętarza mniejszego. Do hemiartroplastyki kanał udowy przygotowywano kolejnymi broszkami (zwiększenie rozmiaru: 1 mm kroki), a do łodygi kości udowej wszczepiono około 15° antewersji. W przypadku całkowitej artroplastyki biodra rozpraszano acetabulum aż do zaobserwowania krwawienia punktowego, z kątem porwania kubka 45° i kątem przeciwodwrócenia 15°. Elementy były cementowane lub dopasowane na podstawie oceny jakości kości i stabilności implantu podczas operacji. Po redukcji stabilność biodra i zakres ruchu były oceniane wewnątrzoperacyjnie przez chirurga operacyjnego poprzez pasywne zgięcie, prostowanie, rotację wewnętrzną i zewnętrzną oraz abdukcję, ze szczególnym uwzględnieniem obecności ucisku lub zwichnięcia. W razie potrzeby zakładano zamknięty dren ssący, a ranę zamykano warstwami za pomocą spółkowych szwów dla głębokiej powięzi i tkanki podskórnej oraz niewchłannych szwów lub zszywek skórnych do zamknięcia skóry.

Pooperacyjne dożylne przeciwból kontrolowany przez pacjenta (PCIA)
Dla wszystkich uczestników zastosowano standaryzowany schemat PCIA z ustandaryzowanym sufentanylem. Roztwór analgetyczny składał się z sufentanylu o stężeniu 1,5 μg/mL, rozcieńczonego w 0,9% soli fizjologicznej i załadowanego do programowalnej pompy infuzyjnej. Ustawienia pompy to wlew tła 1 mL/h, dawka bolusowa 1 mL, a interwał blokady 10 minut, bez dawki obciążającej, chyba że klinicznie wskazane. Pacjenci otrzymali standaryzowane instrukcje dotyczące stosowania PCIA w rekonwalescencji. Skumulowane spożycie sufentanylu zostało zarejestrowane w dzienniku pompy 24 godziny po operacji. Wszystkie modele pomp, jednorazowe i eksploatacyjne są wymienione w Tabeli Materiałów.

Pobieranie próbek i przetwarzanie krwi
Próbki genotypizacji przedoperacyjnej składały się z 5 ml krwi żylnej z antykrzepową EDTA, zmieszanej przez delikatną inwersję. Do analiz mediatorów bólu pobrano 5 ml krwi żylnej w dniach 1, 2, 3 i 7 po operacji. Do przygotowania surowicy próbki pozostawiano do zakrzepnięcia przez 30 minut w temperaturze pokojowej; Dla osocza zastosowano antykoagulant określony w badaniu. Próbki były wirowane w temperaturze około 1000 x g przez 15 minut w temperaturze pokojowej, aby oddzielić surowicę lub osocze. Supernatant był alicytatowany do oznakowanych niskowiążących probówek i przechowywany w temperaturze −80 °C do czasu analizy. Aby zminimalizować cykle zamrożenia i rozmrażania, przygotowano co najmniej dwa aliquoty na punkt czasowy.

Ekstrakcja DNA genomowa i genotypowanie SNP
DNA genomowe zostało wyekstrahowane z pełnej krwi za pomocą zestawu do ekstrakcji DNA opartego na kolumnie krzemionkowej (dostępnego komercyjnie) zgodnie z protokołem producenta. Stężenie i czystość DNA mierzono spektrofotometrycznie, a próbki wykazujące stosunki A260/280 1,8-2,0 uznano za akceptowalne. DNA przechowywano w temperaturze −20 °C do czasu użycia.

Polimorfizm ABCB1 C3435T (rs1045642) został zgenotypizowany za pomocą wcześniej zaprojektowanego testu genotypowego TaqMan SNP na platformie PCR w czasie rzeczywistym. Test obejmował wstępnie zoptymalizowane sprężarki i sondy hydrolizowe. Warunki cyklu termicznego były zgodne z zaleceniami producenta (95 °C dla aktywacji enzymów, następnie 40 cykli 95 °C przez 15 s i 60 °C przez 60 s). Do kontroli jakości uwzględniono kontrole bez szablonu oraz próbki duplikatów (≥10% całości). Wołanie genotypów przeprowadzono za pomocą oprogramowania do analizy rozróżniania allelowego, przy czym wymagana była częstotliwość wywołań ≥95% i 100% zgodności duplikatów, aby to zaakceptować.

Testy mediatorów bólu
Surowicowe prostaglandyny E₂ (PGE₂), substancji P (SP) oraz β-endorfiny (β-EP) zostały zmierzone za pomocą zwalidowanych zestawów radioimmunoasease lub zestawów immunoaseju kanapkowego zgodnie z instrukcjami producenta. Krzywe kalibracyjne zostały wygenerowane przy użyciu co najmniej pięciu standardów obejmujących oczekiwany zakres stężenia; nieznane i sterowanie były uruchamiane w duplikacie. Zarejestrowano dolne granice wykrywalności, współczynniki zmienności wewnątrz testu oraz współczynniki zmienności między testami; powtórzono testy z CV wewnątrz testu >10% lub CV >15%. Wszystkie nazwy zestawów i numery katalogowe są wymienione w Tabeli Materiałów.

Miary wyników
Cechy wyjściowe obejmowały wiek, płeć, wskaźnik masy ciała, czas trwania operacji, podejście chirurgiczne (przednie/tylne), typ protezy (cementowa/niecementowa), przedoperacyjny ból VAS (0-10), wyniki lęku i depresji przedoperacyjnej oraz dawkę sufentanylu śródoperacyjnego. Główne wyniki po 24 godzinach to intensywność bólu w spoczynku mierzona Skalą Analogową Wzroku (VAS, 0-10) oraz skumulowane spożycie sufentanylu zarejestrowane z pompy PCIA. Wyniki wtórne po 24 godzinach obejmowały jakość snu (wynik 0-3; wyższe wyniki wskazują na gorszy sen), częstość pooperacyjnych nudności i wymiotów (PONV) oraz wyniki z Hamiltona z Skali Lęku i Hamiltona. Wyniki eksploracyjne obejmowały poziomy PGE₂, SP i β-EP w surowicy, w dniach 1, 2, 3 i 7 po operacji.

Analiza statystyczna
Zmienne ciągłe przedstawiane są jako średnia ± odchylenie standardowe (SD) lub mediana (zakres interkwartylowy) w zależności od rozkładu; zmienne kategoryczne jako liczby (procenty). Dane były testowane pod kątem normalności za pomocą testu Shapiro-Wilka oraz jednorodności wariancji za pomocą testu Levene'a. Dla zmiennych rozkładu normalnego o równych wariancjach zastosowano jednokierunkową analizę wariancji (ANOVA) z porównaniami post-hoc Bonferroniego (lub Tukeya); w przeciwnym razie stosowano test Kruskala-Wallisa z procedurą post-hoc Dunna. Zmienne kategoryczne analizowano przy użyciu χ² lub testu dokładnego Fishera, w zależności od stosowności. Obliczono częstości genotypu i alleli, a równowaga Hardy'ego-Weinberga została oceniona testem χ² . Szacowano ilorazy szans (OR) z 95% przedziałami ufności (CI) dla powiązań między genotypem (np. nośniki allelu T vs CC) a wynikami dychotomizowanymi, jeśli to dotyczy. Przed zastosowaniem testów parametrycznych testowano rozkłady danych pod kątem normalności (test Shapiro-Wilka) oraz jednorodności wariancji (test Levene'a). W przypadkach, gdy założenia zostały naruszone, stosowano alternatywy nieparametryczne (test Kruskala-Wallisa z testem Dunna po domyśleniu). Wykonaj weryfikację równowagi Hardy'ego-Weinberga za pomocą testu chi-kwadrat. Oblicz iloraz szans (OR) i 95% przedziału ufności (CI), aby przeanalizować związek między genotypem a oceną bólu pooperacyjnego, a także spożyciem sufentanylu. Dwustronny p < 0,05 uznano za istotne statystycznie. Analizy przeprowadzano za pomocą zwalidowanego oprogramowania statystycznego.

Wyniki

Cechy uczestników i rozmieszczenie genotypów
Łącznie włączono 100 pacjentów, którzy pomyślnie zgenotypowali dla polimorfizmu ABCB1 C3435T. Rozkład genotypów wynosił 40,0% (40/100) dla CC, 49,0% (49/100) dla CT oraz 11,0% (11/100) dla TT. Częstotliwość alleli wynosiła 64,5% dla C (129/200) i 35,5% dla T (71/200). Rozkład genotypów był zgodny z równowagą Hardy'ego-Weinberga (χ² =0,49, p=0,48; Tabela 1). Podstawowe cechy, takie jak wiek, BMI, czas operacji, płeć, pode...

Dyskusja

Wymiana stawu biodrowego to powszechna poważna operacja ortopedyczna, a ból pooperacyjny jest jednym z głównych problemów, z jakimi borykają się pacjenci. Wpływ pooperacyjnej analgezji zależy od wielu czynników, w tym indywidualnych czynników, takich jak wiek, płeć, waga i wrażliwość na ból, a także czynników zewnętrznych, takich jak tryb operacji i ćwiczenia rehabilitacyjne^{pooperacyjne 13,14}. Ponadto schemat analgezji lekowej jest również ważnym czynnikiem wpływ...

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Zastrzyk chlorku sodu 0,9%	Fresenius Kabi	19194	Rozcieńczalnik do sufentanylu (roztwór PCIA) i innych leków; stosowany do płukania ran podczas operacji [dokument: "Postoperative PCIA", "Hip Arthroplasty procedure"].
Oprogramowanie do analizy dyskryminacji allelowej (do PCR w czasie rzeczywistym)	Nie określono (tak samo jak platforma PCR czasu rzeczywistego)	Nieokreślona	Używany do wywoływania genotypów ABCB1 C3435T; wymaga call rate ≥ 95% i duplikatywna konkordancja 100% [dokument: "Genomic DNA extraction and SNP genotyping"].
Wirówka (do rozdzielania surowicy od osocza)	Beckman Coulter	Avanti J - E	Kursuje w ~1000 & godzin; g (≈ 3000 obr./min, promień wirnika 10 cm); wiruje próbki krwi przez 10-20 minut w temperaturze pokojowej w celu rozdzielenia surowicy i osocza [dokument: "Pobieranie próbek i przetwarzanie krwi"].
Iniekcja cisatracurium	Jiangsu Hengrui Pharmaceutical Co., Ltd	H20060869	Środek blokujący neuromięśnie do intubacji tchawicy, dawka 0,1 mg/kg [dokument: "Znieczulenie i leczenie śródoperacyjne"].
Analizator chemii klinicznej	Roche Diagnostics	Cobas c 501	Wykrywa biomarkery surowicy (PGE2, SP, &-beta;-EP) [dokument: "Testy mediatorów bólu"].
EDTA Antykoagulant	BD Vacutainer	366450	Wykorzystywany do przedoperacyjnego pobierania krwi żylnej (5 mL) do ekstrakcji i genotypowania DNA; próbki zmieszane przez łagodną inwersję w celu zapobiegania krzepnięciu [dokument: "Projekt badania i uczestnicy", "Pobieranie próbek i przetwarzanie krwi"].
Elektrokardiograf (EKG)	Philips	CardioPerfect MX800	Część standardowego monitorowania śródoperacyjnego [dokument: "Znieczulenie i leczenie śródoperacyjne"].
Przypis końcowy	Clarivate Analytics	X9	Pomaga w zarządzaniu referencjami i formatowaniu (zgodna z normami cytowań czasopism) [źródło: "JoVE_Materials.xls"].
Monitor dwutlenku węgla na końcu pływów (ETCO2	Masimo	Rad - 97	Część standardowego monitorowania wewnątrzoperacyjnego; wykorzystywana do utrzymania normokapnii [dokument: "Znieczulenie i leczenie śródoperacyjne"].
Lodówka niskotemperaturowa (-80 stopni; C/-20 stopni; C)	Haier	DW - 86L626 (-80 stopni; C); DW - 25L262 (-20 stopni; C)	-80 stopni; C dla przechowywania alicytowanego serum/osocza; -20 stopni; C do przechowywania wyodrębnionego DNA genomowego [dokument: "Pobieranie próbek i przetwarzanie krwi", "Ekstrakcja DNA genomowa i genotypowanie SNP"].
Zastrzyk z midazolamu	Jiangsu Enhua Pharmaceutical Co., Ltd	H10980025	Środek indukujący znieczulenie, dawka 0,05 mg/kg [dokument: "Znieczulenie i leczenie śródoperacyjne"].
Nieinwazyjny miernik ciśnienia krwi	Omron	HEM - 9072T	Część standardowego monitorowania śródoperacyjnego [dokument: "Znieczulenie i leczenie śródoperacyjne"].
Programowalna pompa dożylna do analgetyzmu (PCIA)	Phoenix Pharmaceuticals	EK-022-16	Stosowany do podawania sufentanylu po operacji; ustawienia: wlew tła 1 mL/h, dawka bolusowa 1 mL, interwał blokady 10 minut; rejestruje skumulowane spożycie sufentanylu [dokument: "Postoperative PCIA"].
Zastrzyk propofolu	AstraZeneca	H20120088	Indukcja znieczulenia (stopniowo do utraty przytomności) i utrzymanie (0,08-0,12 mg· kg-1· min-1) [dokument: "Znieczulenie i leczenie śródoperacyjne"].
Prostaglandyna E2 (PGE2) Zestaw do testów radioimmunologicznych	Cayman Chemical	514010	Zweryfikowany zestaw do wykrywania PGE2 w surowicy; przeprowadzane w duplikacie, z CV i le; 10% i inter-assay CV≤ 15% (powtarzane przy przekraczaniu limitów) [dokument: "Testy mediatora bólu"].
Pulsoksymetr			Część standardowego monitorowania śródoperacyjnego (pomiary SpO2) [dokument: "Znieczulenie i leczenie śródoperacyjne"].
Platforma PCR w czasie rzeczywistym	Phoenix Pharmaceuticals	EK-022-16	Używany do genotypowania ABCB1 C3435T; Warunki cyklu termicznego: aktywacja enzymów, 40 cykli denaturacji (95 stopni; C, ~15 s) oraz wyżarzania/przedłużania (60 stopni; C, ~60 s) [dokument: "Genomic DNA extraction and SNP genotyping"].
Zestaw do ekstrakcji DNA genomowej oparty na kolumnie krzemionkowej	Qiagen	51104	Wykorzystywany do ekstrakcji DNA genomowego z pełnej krwi; procedury obejmują lizę komórek, trawienie białek, adsorpcję DNA, sekwencyjne płukania oraz elucię w 100 i mu; Bufor elucijny L [dokument: "Genomic DNA extraction and SNP genotyping"].
Spektrofotometr	Thermo Fisher Scientific	NanoDrop One	Mierzy stężenie i czystość DNA; próbki z A260/280 ≈ 1.8-2.0 uznane za akceptowalne [dokument: "Genomic DNA extraction and SNP genotyping"].
SPSS	IBM Corporation	26	Wykorzystywane do analizy statystycznej: test normalności Shapiro-Wilka, Levene' test, ANOVA, test Kruskala-Wallisa i chi; ² test, itd. [dokument: "Analiza statystyczna"; źródło: "JoVE_Materials.xls"].
Zestaw do badania radioimmunologicznego Substance P (SP)	Merck Millipore	RAB0456	Zweryfikowany zestaw do wykrywania SP w surowicy; Te same standardy kontroli jakości co zestaw PGE2 [dokument: "Testy mediatorów bólu"].
Zastrzyk z sufentanylu	Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Group Co., Ltd.	NA	Stosowany do indukcji znieczulenia (0,4 μ g/kg), utrzymanie śródoperacyjne (0,15-0,30 μ g· kg-1· h-1) oraz pooperacyjne PCIA (1,5 μ g/mL rozcieńczony w 0,9% soli fizjologicznej) [dokument: "Znieczulenie i leczenie śródoperacyjne", "Pooperacyjna PCIA"].
TaqMan SNP Genotyping Assay (dla ABCB1 C3435T, rs1045642)	Qiagen	51104	Wstępnie zaprojektowany allelowy test hydrolizowy do genotypowania genotypizowanego w czasie rzeczywistym PCR polimorfizmu ABCB1 C3435T [dokument: "Genomic DNA extraction and SNP genotyping"].
Sprzęt do intubacji tchawicy (laryngoskop, rurka tchawiczna)	Draeger	Capnomac Ultima	Stosowane do intubacji tchawicy po potwierdzeniu blokady nerwowo-mięśniowej [dokument: "Znieczulenie i leczenie śródoperacyjne"].
Wentylator z kontrolą objętości	Drä ger	Primus	Wykorzystywany do wentylacji mechanicznej wewnątrz operacji; ustawienia: częstość oddechu ~15 oddechów/min, objętość pływowa 6-8 mL/kg przewidywana masa ciała [dokument: "Znieczulenie i leczenie śródoperacyjne"].
β-Zestaw do immunotestu na kanapki z endorfinami (β-EP)	Phoenix Pharmaceuticals	EK-022-16	Zweryfikowany zestaw do wykrywania surowicy i beta; krzywe kalibracyjne generowane za pomocą ≥ 5 standardów [dokument: "Testy mediatorów bólu"].