Testowanie tolerancji nikotyny u mszyc za pomocą eksperymentu ze sztuczną dietą

Summary

W tym filmie i teście pokazano, że testuje tolerancję nikotyny na dwa rodzaje mszyc: jedną, która atakuje rośliny tytoniu na polu, a drugą, która tego nie robi.

Abstract

Rośliny mogą zwiększać produkcję wielu różnych metabolitów wtórnych w odpowiedzi na żerowanie owadów. Jeden z tych metabolitów, nikotyna, jest dobrze znany z właściwości owadobójczych. Jedną z reakcji roślin tytoniu na roślinożerność lub gryzienie przez owady, jest zwiększenie produkcji tego neurotoksycznego alkaloidu. Tutaj pokażemy, jak przeprowadzić eksperyment, aby odpowiedzieć na pytanie, czy przystosowany do tytoniu szczep mszycy brzoskwiniowej zielonej, Myzus persicae, może tolerować wyższy poziom nikotyny niż szczep tego owada, który nie atakuje tytoniu na polu.

Protocol

W tym eksperymencie, 4 dorosłe mszyce są zamknięte w małym plastikowym kubku. Żywią się płynną dietą pipetowaną między 2 warstwami parafilmu rozciągniętego na wierzchu kubka. Po 3 dniach karmienia toksyczność diet zawierających różne stężenia nikotyny porównuje się z dietami kontrolnymi, licząc dorosłe i larwy mszyc w każdej filiżance.

1. Przygotuj roztwory zawierające sacharozę i 20 aminokwasów. Mszyce mogą przetrwać na tej diecie, rozmnażając się na normalnym poziomie, przez co najmniej 1 tydzień. Proszę zapoznać się z załączonym plikiem dotyczącym sztucznej diety.
2. Porcjować 1 ml tej diety do 6 różnych probówek eppendorfa zawierających nikotynę. Oznacz je pod kątem różnych stężeń użytej nikotyny, w zakresie od 0 do 500 μM.
3. Wybierz 4 mszyce, czerwone lub zielone, i włóż do tych eksperymentalnych kubków.
4. Przy wyborze mszyc ważne jest, aby były one w stałym wieku. Zazwyczaj szukaj mszyc o podobnej wielkości i kolorze (czerwone mszyce ciemnieją, gdy są starsze).
5. Przykryj kubek kawałkiem parafilmu. Zamknij dietę między 2 kawałkami parafilmu. Częściowo rozciągnij drugi poziom parafilmu wokół krawędzi kubka. Podwielokrotnić płynną dietę między warstwami i uszczelnić górną warstwę.
6. Przechowuj te kubki w pomieszczeniu z owadami pod światłami w fotoperiodze przez długi dzień przez 3 dni, po czym można zebrać dane do eksperymentu.

Proszę odwiedzić stronę