Method Article

Opracowanie i walidacja metody szybkiego LC-MS/MS do ilościowej analizy karfilzomibu w osoczu u pacjentów z szpiczakiem mnogim

DOI:

10.3791/70167

⸱

May 12th, 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1College of Traditional Chinese Medicine, Yunnan University of Chinese Medicine, 2Department of Pharmacy, Second Affiliated Hospital of Naval Medical University, 3Department of Rehabilitation, Second Affiliated Hospital of Naval Medical University, 4School of Pharmacy, Shanghai University of Medicine and Health Sciences

* These authors contributed equally

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Celem tego badania było opracowanie i potwierdzenie metody szybkiej, czułej chromatografii cieczowej z tandemową spektrometrią mas (LC-MS/MS) do ilościowego określania karfilzomibu w ludzkim osoczu. W pełni zwalidowana metoda wspiera terapeutyczne monitorowanie leków u pacjentów ze szpiczakiem mnogim, umożliwiając tym samym spersonalizowaną optymalizację dawki.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Karfilzomib, inhibitor proteasomu drugiej generacji, wymaga terapeutycznego monitorowania leków (TDM). Celem tego badania było opracowanie i zweryfikowanie czułej i solidnej metody chromatografii cieczowej z tandemowym spektrometrią mas (LC-MS/MS) do ilościowego określania karfilzomibu w ludzkim osoczu. Próbki osocza były przetwarzane przy użyciu wytrącenia białek z acetonitrylem (ACN). Separacja chromatograficzna została przeprowadzona na kolumnie C18 (2,1 mm × 100 mm, 3,5 μm) utrzymywanej w temperaturze 40 °C, z fazą ruchomą złożoną z ACN i octana amonu 10 mmol/l w wodzie (80:20, v/v) dostarczaną z przepływem 0,35 mL/min. Metoda wykazała doskonałą liniowość w zakresie stężeń 2,00-1000,00 ng/mL. Ponadto zaobserwowano wysoką precyzję i dokładność wewnątrzdzienną i międzydniową, z wskaźnikami wyzdrowienia karfilzomibu w zakresie od 84,1% do 93,0%. Ta zwalidowana metoda LC-MS/MS umożliwia dokładne, efektywne i czułe określenie stężeń karfilzomibu w osoczu u pacjentów z szpiczakiem mnogim, wspierając tym samym optymalizację terapii opartej na karfilzomibie.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Szpiczak rozsiany (MM) to nowotwor hematologiczny charakteryzujący się klonalną proliferacją komórek osocza w szpikukostnym 1. Stanowi drugi najczęstszy nowotwor hematologiczny na świecie (2), odpowiadając za około 10% wszystkich nowotworów hematologicznych3. Na przestrzeni lat postępy w terapii lekowej, w tym wprowadzenie inhibitorów proteasomów, leków immunomodulacyjnych oraz przeciwciał monoklonalnych, przyniosły lepsze efekty terapeutyczne. Jednak znaczący odsetek (20%-30%) pacjentów z MM nadal doświadcza wyzwań, takich jak krótkie przeżycie bez progresji (PFS)4,5, reakcje niepożądane (ADR), oporność na leki oraz nawrót6.

Bortezomib, pierwszy w swojej klasie inhibitor proteasomunumer 7, odmienił krajobraz terapeutyczny MM. Pomimo skuteczności, większość pacjentów ostatecznie rozwija nawrót lub chorobę oporną, często towarzyszącą opornościna bortezomib 8,9 oraz zmniejszonym tempem odpowiedzi na leczenie i przeżywalności10,11. Te wyzwania podkreślają pilną potrzebę innowacyjnych metod leczenia w celu poprawy wyników w MM. Karfilzomib, inhibitor proteasomu drugiej generacji zatwierdzony przez FDA, zapewnia bardziej stabilny profil farmakokinezyczny, umożliwiając trwałe tłumienie aktywności podobnej do chymotrypsyny i wywołując silne działanie przeciwszpiczaka. Zazwyczaj jest wskazany u pacjentów z MM, którzy przeszli co najmniej dwie wcześniejsze linie leczenia, w tym leczenie bortezomibem i lekiem immunomodulacyjnym 1,11. Badania wykazały, że karfilzomib osiąga silniejszą inhibicję proteasomów w komórkach szpiczaka niż bortezomib i posiada zdolność pokonywania oporności na bortezomib12,13.

Najczęściej stosowane metody ilościowego określania stężeń leków w matrycach biologicznych to wysokowydajna chromatografia cieczowa z detekcją ultrafioletową (HPLC-UV), enzymatyczny immunosorbentny test (ELISA) oraz chromatografia cieczowa z tandemową spektrometrią mas (LC-MS/MS)14. Chociaż HPLC-UV oferuje prostotę operacyjną i niskie koszty, jego użyteczność jest ograniczona przez stosunkowo niską czułość i selektywność. W konsekwencji dokładne ilościowe określenie docelowych analitów, szczególnie w niskich stężeniach lub w złożonych macierzach biologicznych, pozostaje wyzwaniem15. ELISA wykazuje wysoką czułość. Jednak jego zastosowanie napotyka na kilka ograniczeń, w tym długi proces wywoływania, zależność od wysokiej jakości przeciwciał oraz podatność na reakcję krzyżową z podobnymi związkami w próbce. Te czynniki łącznie kompromitują szczegółowość testu16. Dla porównania, LC-MS/MS oferuje wyjątkową selektywność, wyższą czułość i szybką przepustowość analityczną. Te zalety ustanawiają ją jako złoty standard w monitorowaniu leków terapeutycznych (TDM) oraz badaniach farmakokinetycznych17. Karfilzomib cechuje się rozległym wiązaniem białek w osoczu, słabą stabilnością in vivo oraz wąskim indeksem terapeutycznym. Technologia LC-MS/MS może przeprowadzać szybkie ilościowe analizy docelowego związku, skutecznie redukować efekt matrycy i stanowić naukowe podstawy do precyzyjnego podawania leków klinicznych.

Poziom narażenia karfilzomibu na leki jest ściśle powiązany z jego efektem terapeutycznym oraz ADR18,19. Karfilzomib ma właściwości zależne od dawki20, a jego poziom ekspozycji wzrasta dodatnio wraz z dawką w organizmie, co może bezpośrednio wpływać na jego działanie terapeutyczne. Badanie wykazało, że wskaźnik pełnej odpowiedzi (CR) karfilzomibu w leczeniu MM wynosił 28%, bardzo dobry wskaźnik częściowej odpowiedzi (VGPR) wynosił 73%, a ogólny wskaźnik odpowiedzi (ORR) 93%21. Ponadto, w porównaniu z grupą kontrolną, występowanie kardiotoksyczności u pacjentów leczonych karfilzomibem było istotnie zwiększone, podczas gdy nie odnotowano istotnej zmiany neuropatii obwodowej. Inne badanie również wspomniało o skuteczności i bezpieczeństwie karfilzomibu w leczeniu MM oraz potwierdziło, że karfilzomib może zwiększać ryzyko kardiotoksyczności, jednocześnie poprawiając efekt terapeutyczny22. Dlatego skuteczność i ADR karfilzomibu zależą od poziomu narażenia. Do tej pory zgłoszono niewiele zwalidowanych metod LC-MS/MS do ilościowego określania karfilzomibu w ludzkim osoczu, szczególnie tych spełniających rygorystyczne kryteria bioanalitycznej (np. wytyczne FDA). Istniejące badania koncentrują się głównie na modelach zwierzęcych lub innych macierzach biologicznych23,24, podkreślając lukę w klinicznie stosowanych testach TDM u pacjentów z MM.

Dlatego istnieje pilna potrzeba opracowania szybkiego, precyzyjnego i czułego testu monitorującego stężenie karfilzomibu u pacjentów z MM, aby zoptymalizować jego terapeutyczne zastosowanie i profil bezpieczeństwa. W tych pracach opracowaliśmy i zweryfikowaliśmy wiarygodną metodę LC-MS/MS, zdolną do ilościowego określenia karfilzomibu w ludzkim osoczu w ciągu 3 minut, wykazując doskonałą czułość i powtarzalność. Opracowana dla TDM karfilzomibu w MM, metoda ta wspiera optymalizację dawki oraz ocenę reakcji ekspozycji. Użytkownicy muszą być świadomi niestabilności leku w osoczu; Dokładne ilościowe określenie wymaga przetworzenia próbki w ciągu 4 godzin od pobrania krwi.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Protokół ten został zatwierdzony przez Komisję Etyczną Drugiego Szpitala Uniwersytetu Medycznego Marynarki Wojennej (Szpital Changzheng w Szanghaju). Wszyscy pacjenci biorący udział w badaniu podpisali świadomą zgodę.

1. Instrumentacja LC-MS/MS

  1. Do opracowywania metod i analizy próbek należy stosować ultrawydajny system chromatografii cieczowej (UHPLC) sprzężony z potrójnym spektrometrem mas kwadrupolowym wyposażonym w źródło jonizacji elektronatryskowej (ESI).
  2. Konfiguruj system UHPLC tak, aby zawierał online odgazownik, pompę binarną, autosampler oraz piec kolumnowy.
  3. Przeprowadzaj akwizycję i przetwarzanie danych przy użyciu oprogramowania do akwizycji danych producenta instrumentu.

2. Warunki chromatograficzne cieczy

  1. Uzyskanie separacji chromatologicznej za pomocą kolumny ZORBAX-SB C18 (2,1 mm × 100 mm, 3,5 μm).
  2. Utrzymuj temperaturę kolumny na poziomie 40 °C.
  3. Przeprowadz elucię izokratyczną w fazie mobilnej składającej się z 20% 10 mmol/l octana amonu w wodzie i 80% ACN.
  4. Ustaw przepływ na 0,35 mL/min.
  5. Zapewnij symetryczne kształty szczytów oraz odpowiednie czasy retencji zarówno dla analitu, jak i wewnętrznego standardu (IS) w tych warunkach.
    UWAGA: Karfilzomib-d8 został wybrany jako IS ze względu na podobieństwo strukturalne do karfilzomibu, co zapewnia porównywalną ekstrakcję, zachowanie chromatograficzne oraz efektywność jonizacji.
  6. Ustaw całkowity czas trwania na 3,0 min.

3. Warunki spektrometrii mas

  1. Obsługuj spektrometr mas w trybie ujemnym ESI.
  2. Ustaw napięcie kapilarne na -6000 V.
  3. Używaj azotu zarówno jako gazu nebulizującego, jak i suszącego.
  4. Użyj azotu o wysokiej czystości jako gazu kolizyjnego przy ciśnieniu 0,2 MPa.
  5. Utrzymuj ciśnienie w nebulizatorze na poziomie 20 psi.
  6. Podgrzej gaz suszący do 400 °C i dostarczaj go z przepływem 10 L/min.
  7. Ustaw temperaturę gazu w osłonie na 350 °C, z przepływem 12 L/min.
  8. Zbieraj dane w trybie monitorowania wielu reakcji (MRM).
  9. Pobierz widma jona produktowego karfilzomibu (rysunek 1A) i IS (rysunek 1B), aby zilustrować ich wzorce fragmentacji.
  10. Użyj trybu MS2 Scan, aby zidentyfikować jon rodzica.
  11. Użyj trybu MS2 SIM, aby zoptymalizować napięcie Fragmentora.
  12. Użyj trybu Product Ion, aby określić optymalną energię kolizji (CE).
  13. Szczegółowo przedstawiamy zoptymalizowane parametry spektrometrii mas dla karfilzomibu i IS (Tabela 1).

4. Próbki kalibracji i kontroli jakości

  1. Przygotuj roztwór zapasowy karfilzomibu (1,0 mg/mL), dokładnie odważając 2,0 mg karfilzomibu w kolbie objętościowej o pojemności 2 mL i rozpuszczając go w 2 mL metanolu (MeOH).
    UWAGA: MeOH jest łatwopalny i toksyczny. Podczas pracy należy ją odbywać w okapie spalinowym, aby zapobiec wdychaniu opar lub kontaktu ze skórą. Używaj odpowiednich środków ochrony osobistej, w tym rękawiczek oraz ochrony oczu/twarzy.
  2. Roztwór bulionowy przechowuj w temperaturze -80 °C.
  3. Generować roztwory robocze poprzez seryjne rozcieńczanie roztworu bazowego z 10% MeOH, aby uzyskać stężenia 100,0 μg/mL, 10,0 μg/mL i 1,0 μg/mL.
  4. Ustalenie standardów kalibracyjnych poprzez domieszanie plazmy pustej do roztworów roboczych.
  5. Rozcieńcz plazmę z kolcami plazmą pustą w stosunku 1:9 (v/v), aby uzyskać końcowe stężenia 2,0, 5,0, 50,0, 200,0, 500,0, 500,0, 750,0 i 1000,0 ng/mL.
  6. Niezależnie przygotowuj próbki kontroli jakości (QC) tą samą metodą przy stężeniach 5,0 ng/mL (niskie), 200,0 ng/mL (średnie) i 750,0 ng/mL (wysokie).

5. Przygotowanie próbki

  1. Próbki plazmy wstępnej (100 μL) poprzez dodanie 20 μL 4% roztworu kwasu fosforowego.
    UWAGA: Kwas fosforowy jest żrący. Noś rękawiczki, okulary ochronne i fartuch laboratoryjny, aby zapobiec kontaktu ze skórą i wzrokami. W przypadku kontaktu natychmiast spłukaj dużą ilością wody.
  2. Mieszanie próbki przez 2 minuty z maksymalną prędkością za pomocą standardowego laboratoryjnego mieszacza wirowego.
  3. Dodaj 200 μL ACN, zapewniając, że zawiera roztwór IS o stężeniu 200,0 ng/mL, do mieszaniny25.
    UWAGA: ACN jest łatwopalny, lotny i toksyczny. Wszystkie operacje muszą być wykonywane w okapie spalinowym i z dala od źródeł ciepła oraz płomieni. Używaj odpowiednich środków ochrony osobistej, w tym rękawiczek oraz ochrony oczu/twarzy.
  4. Ponownie przeprowadź mieszankę wirującym.
  5. Wiruj mieszankę w stężeniu 12 500 ×g przez 10 minut w temperaturze 4 °C25.
  6. Pobierz 100 μL supernatantu.
  7. Połącz supernatant 100 μL z 100 μL wody.
  8. Przelej powstały roztwór do fiolki HPLC wyposażonej w szklaną wkładkę.
  9. Wstrzyknąć 10 μL roztworu końcowego do systemu LC-MS/MS do analizy.

6. Ocena specyficzności

  1. Oceń specyficzność, porównując odpowiedzi karfilzomibu i IS w sześciu różnych partiach pustej plazmy, plazmy z IS-spik, próbki dolnej granicy ilościowej (LLOQ) oraz autentycznych próbek osocza.
  2. Interferencję należy uznać za akceptowalną, jeśli odpowiedź jest mniejsza niż 15% LLOQ dla analitu i poniżej 5% odpowiedzi IS.

7. Ocena liniowości

  1. Oceń liniowość, analizując trzy zestawy standardów kalibracyjnych w różne dni (co najmniej dwa dni).
  2. Użyj ważonego liniowego modelu regresji najmniejszych kwadratów do generowania krzywych kalibracyjnych opartych na co najmniej sześciu standardach kalibracyjnych.
  3. Zdefiniuj standard o najniższym stężeniu jako LLOQ.
  4. Wymagać, aby stężenia wstecznie obliczone dla każdego standardu mieściły się ± 15% wartości nominalnych, z tolerancją ± 20% dla LLOQ.

8. Precyzyjność i precyzyjne określenie

  1. Określ dokładność i dokładność wewnątrzdniową i wewnątrzdniową, analizując pięć replik próbek QC przy trzech poziomach stężenia oraz próbki LLOQ w co najmniej dwa różne dni.
  2. Precyzyjność wyraź jako względne odchylenie standardowe (RSD%), wymagając, aby była ≤ 15% dla próbek QC i ≤ 20% dla LLOQ.
  3. Dokładność wyrażamy jako błąd względny (RE%), wymagając, aby był w granicach ± 15% dla próbek QC i ± 20% dla LLOQ.

9. Odzyskiwanie i wyznaczanie efektu macierzowego

  1. Określ odzyskanie, porównując powierzchnię szczytową karfilzomibu wprowadzonego do osocza przed ekstrakcją z powierzchnią szczytową karfilzomibu wstrząśniętego do wyekstrahowanej matrycy przy tym samym stężeniu.
  2. Oceń efekt macierzowy, porównując powierzchnię szczytową karfilzomibu włożonego do wyekstrahowanej matrycy z powierzchnią pikową karfilzomibu w czystym roztworze o tym samym stężeniu.
  3. Wskaż spójny wpływ matrycy plazmy pustej na sygnał analitu, jeśli RSD% dla czynnika efektu macierzy jest mniejsze niż 15%.

10. Ocena przeniesienia

  1. Ocena przeniesienia przejścia należy do wstrzyknięcia pustej próbki bezpośrednio po najwyższym standardzie kalibracyjnym, aby wykryć ewentualny resztkowy sygnał analitu z poprzedniego zastrzyku.
  2. Uznaj przeniesienie za akceptowalne, jeśli odpowiedź karfilzomibu w pustej próbie jest mniejsza niż 20% LLOQ i mniejsza niż 5% odpowiedzi IS.

11. Ocena efektu rozcieńczenia

  1. Oceń efekt rozcieńczenia poprzez rozcieńczenie próbek plazmy z przekroczeniem górnej granicy ilościowości (ULOQ) za pomocą plazmy pustej, aby stężenie mieściło się w zakresie kalibracji.
  2. Porównaj zmierzone stężenie z nominalnym.

12. Ocena stabilności

  1. Oceń stabilność, analizując próbki QC na trzech poziomach stężenia w różnych warunkach przechowywania.
  2. Przechowuj próbki kontroli jakości w temperaturze pokojowej i analizuj po 6 godzinach.
  3. Przechowuj przetworzone próbki w autosamplerze i analizuj w godzinach 0, 2, 4 i 6 godzin.
  4. Badany QC pobiera próbki w trzech cyklach zamarzania i rozmrażania, naprzemiennie przechowywając w temperaturze −20 °C i w temperaturze pokojowej, następnie analizuj.
  5. Przechowuj próbki QC w temperaturze −80 °C przez dwa miesiące, a następnie analizuj.
  6. Porównaj zmierzone stężenia z wartościami nominalnymi i potwierdzić, że odchylenia mieszczą się w granicach ±15% (RE%).

13. Rejestracja pacjentów i pobieranie próbek

  1. Uzyskaj pisemną, świadomą zgodę wszystkich pacjentów.
  2. Zapisz pacjentów z MM i lecz ich karfilzomibem.
  3. Pobierz próbki krwi natychmiast po podaniu leku (infuzja dożylna trwająca 30 minut).
  4. Pobieranie próbek osocza poprzez wirowanie próbek krwi pobranych w probówkach EDTA-3K w dawce 4500 ×g przez 10 minut w temperaturze 4 °C.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Optymalizacja LC-MS/MS

Aby zoptymalizować wykrywanie karfilzomibu, porównano wartości odpowiedzi analitu zarówno w trybach jonizacji dodatniej, jak i ujemnej. Ujemny tryb jonizacji dał wyższą odpowiedź karfilzomibu niż dodatni tryb jonizacji i dlatego został wybrany do dalszej analizy. Porównaliśmy wydajność kolumn C8, C18 oraz T3-C18 , aby wybrać optymalną. Kolumna C18 zapewniała najlepszy kształt szczytu i reakcję karfilzomibu. Dzi...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

W przeciwieństwie do tradycyjnych metod HPLC-UV i ELISA, LC-MS/MS zapewnia wyjątkową selektywność, czułość i szybkość, skutecznie niwelując ograniczenia swoich poprzedników. Te zalety umacniają jego rolę jako złotego standardu w analizie leków w złożonych biomatrycach, szczególnie w badaniach TDM i farmakokinetycznych17. Opracowaliśmy i zwalidowaliśmy metodę LC-MS/MS do ilościowego określania karfilzomibu w ludzkim osoczu. Kluczową praktyczną zaletą tej metody jest proste przygotowanie próbek. Obe...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy deklarują, że nie mają znanych konkurujących interesów finansowych ani innych konfliktów interesów.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Prace te zostały wsparte przez Bethune Charitable Foundation: Shining China – Pharmaceutical Research Capacity Building Funding (Z04JKM2023E040), Projekty Współpracy Międzynarodowej i Wymian (nr 2014DFA33010) oraz Szanghajski Wiodący Program Talentów Wschodnich (SHSLJRC-TX)

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Acetonitryl (ACN)Kompania Merck (Darmstadt, Niemcy)34888Klasa LC-MS
Octan amonuKompania Merck (Darmstadt, Niemcy)9689Czystość analizy: ≥ 99.0%
Bilans analizySartorius (Niemcy))Dokładność: 0,01 mg
Kolumna analitycznaAgilent Technologies (USA)Agilent ZORBAX SB-C18, 2.1 & razy; 100 mm, 3,5 i mikro; m
CarfilzomibBiotechnologia Shanghai yuanye (Szanghaj, Chiny)868540-17-4Przeanalizuj próbę standardową, czystość > 99%
Carfilzomib-d8Biotechnologia Shanghai yuanye (Szanghaj, Chiny)Analizując próbę standardową, czystość > 98%
Oprogramowanie do akwizycji danychAgilent Technologies (USA)Oprogramowanie do przetwarzania danych Agilent Masshunter (wersja 6.0)
Oprogramowanie do analizy danychAgilent Technologies (USA)Oprogramowanie do analizy ilościowej Agilent MassHunter (wersja 10.1)
Woda destylowanaShenzhen Watsons Distilled Water Co., Ltd (Shenzhen, Chiny)Klasa LC-MS
Fiolki i fiolki HPLC InsertyShanghai Titan Technology Co., Ltd. ((Szanghaj, Chiny))-
System chromatografii cieczowejAgilent Technologies (USA)Seria Agilent 1200 obejmuje pompy binarne, odgazownik online, automatyczny próbnik oraz kolumnowy zestaw temperaturowy.
Metanol (MeOH)Kompania Merck (Darmstadt, Niemcy)1.06035Klasa LC-MS
MikropipetyEppendorf (Niemcy)Wiele zakresów pomiarowych (np. 10 & mikro; L, 100 & mikro; L, 200 & mikro; L, 1000 & mikro; L)
Biuro i Oprogramowanie statystyczne-Microsoft Office 365; GraphPad Prism 9.5
Kwas fosforowyKompania Merck (Darmstadt, Niemcy)49685Czystość analizy: 85 wag.%
Wirówka chłodzonaEppendorf (Niemcy)Dla próbek wirowanych w temperaturze 4 i stopnie; C
Potrójny spektrometr masowy kwadrupolowyAgilent Technologies (USA)G6475AASeria Agilent 1200, wyposażona w elektronatryskowe źródło jonizacji (ESI)
Mieszacz wirowyLabnet   (USA)S0200Regulowana prędkość

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Wu, J., Liu, J. Research progress in proteasome inhibitor resistance to multiple myeloma. Zhong Nan Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban. 46 (8), 900-908 (2021).
  2. Rajkumar, S. V., et al. International myeloma working group updated criteria for the diagnosis of multiple myeloma. Lancet Oncol. 15 (12), e538-e548 (2014).
  3. Mateos, M. V., San Miguel, J. F. Management of multiple myeloma in the newly diagnosed patient. Hematology Am Soc Hematol Educ Program. 2017 (1), 498-507 (2017).
  4. Joseph, N. S., Gentili, S., Kaufman, J. L., Lonial, S., Nooka, A. K. High-risk multiple myeloma: Definition and management. Clin Lymphoma Myeloma Leuk. 17s, S80-S87 (2017).
  5. San Miguel, J. F. Introduction to a series of reviews on multiple myeloma. Blood. 125 (20), 3039-3040 (2015).
  6. Rafae, A., Van Rhee, F., Al Hadidi, S. Perspectives on the treatment of multiple myeloma. Oncologist. 29 (3), 200-212 (2024).
  7. Yan, H., et al. Identification of key candidate genes and pathways in multiple myeloma by integrated bioinformatics analysis. J Cell Physiol. 234 (12), 23785-23797 (2019).
  8. Shi, L. L., Zhai, Y. P. Research Progress on Molecular Mechanisms of Resistance to Bortezomib in Multiple Myeloma-Review. Zhongguo Shi Yan Xue Ye Xue Za Zhi. 25 (5), 1576-1579 (2017).
  9. Wang, Y. R., Ma, Y. P. Research Progress on Mechanism of Bortezomib Resistance in Multiple Myeloma. Zhongguo Shi Yan Xue Ye Xue Za Zhi. 31 (5), 1584-1587 (2023).
  10. Callander, N. S., et al. Nccn guidelines® insights: Multiple myeloma, version 3.2022. J Natl Compr Canc Netw. 20 (1), 8-19 (2022).
  11. Kumar, S. K., et al. Risk of progression and survival in multiple myeloma relapsing after therapy with imids and bortezomib: A multicenter international myeloma working group study. Leukemia. 26 (1), 149-157 (2012).
  12. Kuhn, D. J., et al. Potent activity of carfilzomib, a novel, irreversible inhibitor of the ubiquitin-proteasome pathway, against preclinical models of multiple myeloma. Blood. 110 (9), 3281-3290 (2007).
  13. Moreau, P., et al. Subcutaneous versus intravenous administration of bortezomib in patients with relapsed multiple myeloma: A randomised, phase 3, non-inferiority study. Lancet Oncol. 12 (5), 431-440 (2011).
  14. Shah, V. P., et al. Bioanalytical method validation--a revisit with a decade of progress. Pharm Res. 17 (12), 1551-1557 (2000).
  15. Mandal, V., Ajabiya, J., Khan, N., Tekade, R. K., Sengupta, P. Advances and challenges in non-targeted analysis: An insight into sample preparation and detection by liquid chromatography-mass spectrometry. J Chromatogr A. 1737, 465459(2024).
  16. Kizuki, K., et al. Enzyme-linked immunosorbent assays for human tissue kallikrein and analysis of immunoreactive kallikrein in the plasma by them. Adv Exp Med Biol. 247b, 211-216 (1989).
  17. Delguidice, C. E., Ismaiel, O. A., Mylott, W. R., Halquist, M. S. Jr Comparison of methods for quantitative analysis of ranibizumab and bevacizumab in human plasma using various bioanalytical techniques, including microfluidic immunoassay, triple quadrupole, and high-resolution liquid chromatography-tandem mass spectrometry approaches. J Pharm Biomed Anal. 217, 114823(2022).
  18. Fotiou, D., et al. Carfilzomib-associated renal toxicity is common and unpredictable: A comprehensive analysis of 114 multiple myeloma patients. Blood Cancer J. 10 (11), 109(2020).
  19. Mingrone, G., et al. Effects of carfilzomib therapy on left ventricular function in multiple myeloma patients. Front Cardiovasc Med. 8, 645678(2021).
  20. Stewart, A. K., et al. Carfilzomib, lenalidomide, and dexamethasone for relapsed multiple myeloma. N Engl J Med. 372 (2), 142-152 (2015).
  21. Luo, T., Xia, H. L. [efficacy and safety of carfilzomib in the treatment of multiple myeloma：a systematic evaluation]. Zhongguo Shi Yan Xue Ye Xue Za Zhi. 27 (6), 1887-1893 (2019).
  22. Nakao, S., et al. Evaluation of cardiac adverse events associated with carfilzomib using a japanese real-world database. Oncology. 100 (1), 60-64 (2022).
  23. Min, J. S., et al. Quantitative determination of carfilzomib in mouse plasma by liquid chromatography-tandem mass spectrometry and its application to a pharmacokinetic study. J Pharm Biomed Anal. 146, 341-346 (2017).
  24. Yang, J., et al. Pharmacokinetics, pharmacodynamics, metabolism, distribution, and excretion of carfilzomib in rats. Drug Metab Dispos. 39 (10), 1873-1882 (2011).
  25. Zhu, X., et al. A simple and rapid lc-ms/ms method for the quantification of nirmatrelvir/ritonavir in plasma of patients with covid-19. Int J Anal Chem. 2024, 6139928(2024).
  26. Kang, J. S., Lee, M. H. Overview of therapeutic drug monitoring. Korean J Intern Med. 24 (1), 1-10 (2009).
  27. Seger, C., Salzmann, L. After another decade: Lc-ms/ms became routine in clinical diagnostics. Clin Biochem. 82, 2-11 (2020).
  28. Mushtaq, A., et al. Efficacy and toxicity profile of carfilzomib based regimens for treatment of multiple myeloma: A systematic review. Crit Rev Oncol Hematol. 125, 1-11 (2018).
  29. Smrdel, L., Locatelli, I., Zver, S., Gobec, M. A systematic review and meta-analysis of carfilzomib-associated thrombocytopenia as an adverse event in patients with multiple myeloma. Ther Adv Hematol. 15, 20406207241292517(2024).
  30. Reichel, A., Lienau, P. Pharmacokinetics in drug discovery: An exposure-centred approach to optimising and predicting drug efficacy and safety. Handb Exp Pharmacol. 232, 235-260 (2016).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Carfilzomib QuantificationLC MS MS MethodPlasma SamplesMultiple MyelomaTherapeutic Drug MonitoringProtein PrecipitationChromatographic SeparationC18 ColumnAmmonium AcetateMethod Validation

Related Articles