Artykuł metodologiczny

Opracowanie nanowezykuł otoczonych błoną komórek macierzystych mezenchymalnych w celu zwiększenia wydajności dostarczania genów

DOI:

10.3791/70316

⸱

17 lutego 2026

 ,  ,  ,  , 
1Department of Biology, Faculty of Arts and Sciences, Beijing Normal University at Zhuhai, 2Guangdong Institute of Intelligence Science and Technology, 3Guangdong Hengqin United Life Science Co., Ltd., 4Center for Biological Science and Technology, Key Laboratory of Cell Proliferation and Regulation Biology of Ministry of Education, Zhuhai-Macao Biotechnology Joint Laboratory, Beijing Normal University at Zhuhai

W tym artykule

Podsumowanie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ten protokół ma na celu przedstawienie metody produkcji i oczyszczania biomimetyków pochodzących od mezenchymalnych komórek macierzystych (MSC) dla terapii genowej. Nanowezykul jest ograniczony MSC-pochodnymi dwuwarstwowami lipidowymi i zawiera rekombinowane AAV przenoszące gen interesujący się w świetle. Ta nanowezykul oferuje ulepszony wektor dla in vivo dostarczania genów.

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Mezenchymalne komórki macierzyste (MSC) pochodzące od pęcherzyków zewnątrzkomórkowych (EV) obiecują wiele w zastosowaniach terapeutycznych i medycynie regeneracyjnej. EV to nanoskalowe pęcherzyki wydzielane przez wszystkie znane typy komórek, zawierające różnorodne ładunki, w tym białka zakotwiczone w błonie, rozpuszczalne czynniki, wiele gatunków RNA i metabolity, które regulują fizjologię i zachowanie komórek odbiorców. Podczas gdy EV pochodzące od MSC lub inżynieryjne mogą dostarczać terapeutyczne białka i RNA, dostarczanie DNA za pośrednictwem EV pozostaje wyzwaniem z powodu braku efektywnych mechanizmów sortowania sekwencji DNA do wewnątrz pęcherzyków. Poprzednie prace z naszej grupy i innych wykazały, że EV zawierające wirusy adeno-stowarzyszonych (AAV) umożliwiają ukierunkowane dostarczanie do jądra komórkowego i trwałe ekspresję genów in vitro i in vivo. Jednak ich produkcja i izolacja były ograniczone niską wydajnością i czasochłonnymi procedurami. Tutaj opisujemy opracowanie nanopęcherzyków otulonych membraną MSC, wygenerowanych przez metodę wyciskania o określonej wielkości, dla efektywnego dostarczania genów. Te pęcherzyki, o średnicy około 200 nm, naśladują właściwości naturalnych EV, jednocześnie enkapsulując rekombinancyjne wektory AAV zawierające terapeutyczne sekwencje genów. W porównaniu z konwencjonalnymi AAV, inżynieryjne pęcherzyki MSC poprawiły wydajność dostarczania genów i osiągnęły znacznie wyższe plony przy mniejszym czasie i kosztach w stosunku do naturalnie wydzielanych EV-AAV. Podsumowując, przedstawiamy nowatorską platformę nanopęcherzyków membranowych opartych na MSC, która łączy zalety struktur naśladujących EV z transferem genów za pośrednictwem AAV. To podejście poprawia wydajność dostarczania i skalowalność produkcji, oferując obiecującą strategię dla rozwoju terapii genowej w kierunku translacji klinicznej.

Wprowadzenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Terapia genowa stanowi przełomowe podejście w leczeniu chorób genetycznych i nabytych, poprzez wprowadzanie, zastępowanie lub wyciszanie określonych genów w celu przywrócenia normalnej funkcji komórkowej. W ciągu ostatnich dwóch dekad postępy w inżynierii wektorów i strategiach dostarczania znacznie rozszerzyły terapię genową. Wśród różnych opracowanych systemów wektorowych, adeno-assosjowany wirus (AAV) stał się jedną z najbardziej udanych i szeroko stosowanych platform ze względu na korzystny profil bezpieczeństwa, efektywne przeprowadzenie i długotrwałą ekspresję genów zarówno w komórkach dzielących się, jak i nie dzielących się1,2. Do tej pory wiele terapeutyk opartych na AAV otrzymało aprobatę regulacyjną do użytku klinicznego, w tym leczenie atrofii mięśniowej rdzenia kręgowego, dystrofii siatkówki i hemofilii, co oznacza ważne milenium w medycynie translacyjnej3. Szerokie tropizmy i niska immunogenność wektorów AAV umożliwiły również ich zastosowanie w różnorodnych tkankach, w tym w wątrobie, mięśniach, układzie nerwowym centralnym i oku4. W rezultacie AAV stał się wiodącą platformą dla in vivo dostarczania genów, wspierającą trwające badania przedkliniczne i kliniczne ukierunkowane na zaburzenia metaboliczne, neurologiczne i sercowo-naczyniowe.

Mimo niezwykłego sukcesu klinicznego, terapia genowa oparta na AAV napotyka na kilka wewnętrznych wyzwań, które nadal ograniczają jej szersze zastosowanie. Jednym z głównych ograniczeń jest ograniczona pojemność pakietowania genomu kapsydu AAV (~4,7 kb), która ogranicza jego zastosowanie do dostarczania dużych lub wielu terapeutycznych genów5,6. Ponadto biodystrybucja i tropizm komórkowy wektorów AAV są w dużej mierze determinowane przez ich serotypy, z których każdy wykazuje odmienne powinowactwo do określonych tkanek. Chociaż zastosowane zostały rozległe inżynierie kapsydu i strategie wyświetlania peptydów w celu poprawy docelowania do tkanek i efektywności transdukcji, osiągnięcie precyzyjnego i przewidywalnego tropizmu w różnych kontekstach biologicznych pozostaje znaczącą przeszkodą7. Innym krytycznym ograniczeniem jest występowanie przeciwciał neutralizujących (NAbs) przeciwko naturalnym serotypom AAV w populacji ludzkiej. Nawet niskie tytry NAbs mogą znacznie zmniejszyć efektywność transdukcji wektora, ograniczając kwalifikację pacjenta i komplikując wielokrotne dawkowanie8,9. Różne strategie, takie jak racjonalna przeprojektowanie kapsydu, reżimy immunosupresyjne i przemijająca wymiana osocza, zostały zbadane w celu złagodzenie neutralizacji opornej na przeciwciała10,11, jednak te podejścia oferują tylko częściową lub przejściową ulgę. Łącznie te ograniczenia zmniejszają ogólną skuteczność terapeutyczną i powtarzalność dostarczania genów z wykorzystaniem AAV w ustawieniach klinicznych.

W ostatnich latach otoczony dodatkowym wektorem AAV (EV-AAV) został zbadany jako alternatywny wektor z potencjalną możliwością pokonania kilku kluczowych ograniczeń konwencjonalnych AAV12,13,14,15. Podczas pakowania wektora część cząstek AAV może być wydzielany poprzez ścieżki transportu wezykulowego i zostać zamknięta w wezykułach pozakomórkowych. Proces ten jest uważany za zaangażowanie białka uzupełniającego wiązanie do membrany kodowanego przez AAV (MAAP), które ułatwia wyjście wirusa i promuje wiązanie do membrany16,17. Powstałe cząstki EV-AAV wykazują lepszą efektywność transdukcji i zwiększoną odporność na przeciwciała neutralizujące w porównaniu z konwencjonalnym AAV, głównie ze względu na błonę wezykuliarną, która promuje przyjmowanie przez komórki i zapewnia częściowe osłonięcie przed rozpoznawaniem przeciwciał18. Jednak pomimo tych zalet, produkcja EV-AAV nadal jest nieefektywna. Zazwyczaj tylko niewielka frakcja genomów wektora (około 0,5%–12%) jest wydzielana do pożywki kultury jako AAV stowarzyszone z EV, podczas gdy większość pozostaje wewnątrzkomórkowa lub istnieje jako wolne AAV12,13. W konsekwencji wymaga to dużej skali produkcji, aby uzyskać wystarczającą wydajność wektora. Co więcej, wytwarzanie EV-AAV było głównie demonstrowane przy użyciu komórek producentów HEK293T, których EV mogą wykazywać szybkie usuwanie w wątrobie, krótki okres półtrwania w krążeniu i potencjalne zagrożenia bezpieczeństwa biologicznego. Te ograniczenia podkreślają potrzebę bardziej efektywnej i personalizowanej strategii owijania błoną, motywując rozwój platformy AAV owijającej błonę komórkową (CME-AAV) przedstawionej w niniejszym badaniu.

Mezenchymalne komórki macierzyste (MSC) i ich EV były szeroko badane ze względu na ich regeneracyjny potencjał i właściwości uchylające się

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wszystkie procedury zwierzęce zostały zatwierdzone przez komitet ds. Opieki nad zwierzętami i ich wykorzystania na Uniwersytecie Normalnym w Pekinie w Zhuhai, Chiny. Wykorzystane reagenty i sprzęt są wymienione w Tabeli materiałów.

1. Przygotowanie i formacja CME-AAV za pośrednictwem ekstruzji o określonej wielkości porów

  1. Produkcja rekombinowanych wektorów AAV
    ​UWAGA: Protokół produkcji AAV wykonuje się zgodnie z wcześniej opublikowanymi i powszechnie stosowanymi procedurami. Szczegółowe kroki optymalizacji i wariacje opisano we wcześniejszych badaniach12,26.
    1. Hodowaj komórki HEK293T w pełnym pożywce wzrostowej i utrzymuj je na poziomie 70%-80% konfluencji w dniu transfekcji.
    2. Przygotuj trzy plazmidy kodujące (i) wektor transferu AAV zawierający gen interesujący, (ii) geny AAV rep/cap odpowiadające pożądanemu serotypowi oraz (iii) funkcje pomocnicze adenowirusa.
    3. Przeprowadź współtransfekcję komórek HEK293T trzema plazmidami, stosując ustanowioną metodę transfekcji (np. transfekcję fosforanem wapnia lub opartą na polimerach), zgodnie ze standardowymi praktykami laboratoryjnymi.
    4. Inkubować przetransfekowane komórki przez 48-72 godziny, aby umożliwić składanie się i akumulację AAV.
    5. Zbierz komórki i pożywkę hodowlańczą oraz uwolnij cząstki AAV poprzez wielokrotne cykle mrożenia i odmrażania lub równoważną metodę lizy komórkowej.
    6. Centryfuguj lizat z niską prędkością, aby usunąć szczątki komórkowe i zebrać nadstan zawierający cząstki AAV.
    7. Oczyść cząstki AAV za pomocą ultrawirowania gradientu gęstości lub innej ustanowionej metody oczyszczania.
    8. Wymień oczyszczone wektory AAV na sterylny bufor fosforanowy (PBS) i przechowuj alikwoty w temperaturze -80 °C do momentu użycia.
  2. Przygotowanie frakcji membrany MSC
    UWAGA: Ludzkie komórki mezenchymalne (MSC) zostały izolowane zgodnie z wytycznymi instytucjonalnymi. Komórki były hodowane i rozmnażane w ustalonych warunkach lub zmienionych protokołach laboratoryjnych. Tożsamość MSC można potwierdzić poprzez ocenę ekspresji markerów fenotypowych takich jak CD73, CD90 i CD105 za pomocą cytometrii przepływowej. Wielorakość MSC jest weryfikowana przez ich zdolność do różnicowania się w osteoblasty, chondrocyty i adipocyty in vitro. Komórki są gotowe do pobrania, gdy osiągną 70%-90% konfluencję. Poniższe procedury niekoniecznie muszą być wykonywane w warunkach sterylnych.
    1. Usuń pożywkę hodowlaną i oddziel MSC z naczynia hodowlanego za pomocą skrobaczka komórkowego.
    2. Zbierz oddzielone komórki do szyjkowego probówka zawierającej PBS i wyśrodkuj przez 5 min przy 300 x g w 4 °C, aby osadzone komórki.
    3. Przepłucz komórki dwa razy za pomocą PBS, wyśrodkując za każdym razem przez 5 min przy 300 x g w 4 °C.
    4. Zawieś końcowy osad komórek w PBS uzupełnionym koktajlem inhibitorów proteaz.
    5. Poddaj zawiesinę komórkową trzem cyklom mrożenia i odmrażania, aby rozerwać błonę plazmatyczną i wygenerować surowy lizat komórkowy.
    6. Pippetuj lizat dokładnie, aby go homogenizować, następnie wyśrodkuj przez 20 min przy 4 °C, aby usunąć szczątki komórkowe.
    7. Przenieś nadstan do nowej probówki i wyśrodkuj przez 1 h przy 4 °C, aby osadzone frakcje membrany.
    8. Odsuń nadstan i zawieś wynikający osad membranowy w PBS. Ta zawiesina reprezentuje surową frakcję membrany MSC i będzie używana do enkapsulacji AAV.
    9. Homogenizuj zawiesinę membranową, sekwencyjnie przepuszczając ją przez strzykawki wyposażone w igły 20 G do 27 G.
    10. Wyznacz koncentrację białka zawiesiny membranowej za pomocą testu BCA. Rozdziel i przechowuj zawiesinę w -80 °C lub przejdź bezpośrednio do następujących kroków. Ponownie homogenizuj zawiesinę membranową za pomocą strzykawki 27 G po każdym cyklu odmrażania.
  3. Formacja CME-AAV za pośrednictwem ekstruzji
    1. Wymieszaj przygotowaną zawiesinę membranową z AAV w określonym stosunku 150 µg białka membranowego na 1 x 1010 kopii genomu (g.c.) AAV. Inkubowaj mieszaninę w 37 °C przez 30 min z delikatnym wstrząsanem.
    2. Zaladuj mieszaninę membrany-AAV na mini-ekstruderze wyposażonym w 400 nm poliwęglowanową (PC) membranę. Przepuść próbkę przez ekstruder 20 razy, aby promować enkapsulację membrany-AAV.
    3. Zamień 400 nm membranę PC na 200 nm membranę i powtórz proces ekstruzji 20 razy, aby jeszcze bardziej zmniejszyć heterogeniczność wielkości pęcherzyków.
    4. Zbierz przetworzoną mieszaninę. Jeśli wymagana jest większa ilość, połącz wiele partii ekstruzji. Powstała zawiesina zawiera CME-AAV, wraz z nie

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

MSC użyte w tym badaniu zostały izolowane z ludzkiego tkanki pępowiny zgodnie z protokołami zgodnymi z odpowiednimi wytycznymi etycznymi. Ułamki błony MSC zostały przygotowane zgodnie z opisanym protokołem. AAV9.EGFP został wyprodukowany wewnętrznie za pomocą przejściowego systemu transfekcji z dwoma plazmidami w komórkach HEK293T, zgodnie z wcześniejszymi raportami12,26. Do produkcji CME-AAV preparaty błony i AAV9.EGFP były współinkubowane w proporcji 150 µg bia...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Krytyczne kroki protokołu CME-AAV

Ten protokół opisuje metodę wytwarzania MSC otoczonych membraną AAV, a kilka kroków jest kluczowych dla udanego tworzenia CME-AAV. Po pierwsze, staranne wstępne przetwarzanie błony komórkowej jest niezbędne. Celem tego kroku jest uzyskanie fragmentów błony, które są odpowiednie do ekstruzji, jednocześnie minimalizując zanieczyszczenia przez DNA jądrowe, białka cytozolowe i organelle podkomórkowe. Ponadto, wielkość fragmentów błony jest kluczow...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dr. Daopin Wu jest pracownikiem Guangdong Hengqin United Life Science Co., Ltd. Firma nie udostępniła finansowania dla tego badania i nie miała wpływu na projekt badania, zbieranie danych, analizę danych, przygotowanie rękopisu, ani decyzję opublikowania. Pozostali autorzy nie deklarują żadnych konkurencyjnych interesów finansowych.

Podziękowania

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Praca została wspierana przez Program Guangdong S&T (2023B0303010002) dla DM oraz Guangdong Basic and Applied Basic Research Foundation (2025A1515011134) i BNU Faculty of Arts and Sciences Cross-disciplinary Research Project (12900-311324240581) dla YL. Ta praca została dodatkowo wspierana przez sprzęt i wiedzę techniczną dostarczoną przez Centrum Instrumentacji i Usług dla Nauki i Technologii na Beijing Normal University.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Bioluminescence imaging systemPerkinElmerIVIS Spectrum optical imaging system (Lumina III) 
D-Luciferin potassium saltYeasen Biotechnology40902ES03
Fetal bovine serum Yeasen Biotechnology40130ES76
Fluorescence microscopeZeiss Axio Observer 7
Formvar/carbon-coated copper grid 200 meshMillipore-SigmaTEM-FCF400CU
Glutaraldehyde Millipore-Sigma354400
HBSS GibcoC14175500BT
Hieff Unicon qPCR TaqMan Probe Master MixYeasen Biotechnology11205ES08
High-glucose Dulbecco's modified Eagle's mediumHycloneSH30243
High-speed centrifugeBeckman CoulterAvanti J-E
Hoechst 33342 BeyotimeC1022
NTA instrumentMalvern PanalyticalNanoSight NS300 
Open-top thinwall ultra-clear tube for ultracentrifuge Beckman Coulter344059
OptiPrep iodixanol Millipore-SigmaD1556
Paraformaldehyde 4%BeyotimeP0099
PBSBiosharpBL302A
Penicillin-streptomycin Millipore-SigmaV900929
qPCR instrumentApplied Biosystems QS6 real-time PCR system 
Rotor for high-speed centrifugeBeckman CoulterJA-25.50 
SW 41 Ti Swing-bucket rotor for ultracentrifuge Beckman Coulter331362
Transmission electron microscope JEOLJEM-2100F 
UltracentrifugeBeckman CoulterOptima XE-100
Uranyl acetate Electron Microscopy SciencesNC1375332
Whatman Nuclepore polycarbonate membranes filters (200 nm)Cytiva10417004
Whatman Nuclepore polycarbonate membranes filters (400 nm)Cytiva10417104

Bibliografia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Wang, D., Tai, P. W. L., Gao, G. Adeno-associated virus vector as a platform for gene therapy delivery. Nat Rev Drug Discov. 18 (5), 358-378 (2019).
  2. Li, C., Samulski, R. J. Engineering adeno-associated virus vectors for gene therapy. Nat Rev Genet. 21 (4), 255-272 (2020).
  3. Mendell, J. R., et al. Current clinical applications of in vivo gene therapy with AAVs. Mol Ther. 29 (2), 464-488 (2021).
  4. Crunkhorn, S. Profiling aav tropism. Nat Rev Drug Discov. 22 (3), 183(2023).
  5. Kosaka, M., et al. Evaluation of the loading capacity and patterns of packaged DNA in AAV genomes of different sizes using long-read sequencing. Mol Ther Methods Clin Dev. 33 (2), 101474(2025).
  6. McCarty, D. M. Self-complementary AAV vectors; advances and applications. Mol Ther. 16 (10), 1648-1656 (2008).
  7. Lopez-Gordo, E., Chamberlain, K., Riyad, J. M., Kohlbrenner, E., Weber, T. Natural adeno-associated virus serotypes and engineered adeno-associated virus capsid variants: Tropism differences and mechanistic insights. Viruses. 16 (3), 442(2024).
  8. Louis Jeune, V., Joergensen, J. A., Hajjar, R. J., Weber, T. Pre-existing anti-adeno-associated virus antibodies as a challenge in AAV gene therapy. Hum Gene Ther Methods. 24 (2), 59-67 (2013).
  9. Wei, C. Prevalence of adeno-associated virus-9-neutralizing antibody in Chinese patients with Duchenne muscular dystrophy. Hum Gene Ther. 35 (1-2), 26-35 (2024).
  10. Directed evolution of AAV mutants for enhanced gene delivery. Schaffer, D. V., Maheshri, N. Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc, 2004, 3520-3523 (2004).
  11. Zhao, W., et al. Engineering sialylated N-glycans on adeno-associated virus capsids for targeted gene delivery and therapeutic applications. J Control Release. 380, 563-578 (2025).
  12. Liu, B., et al. Aav-containing exosomes as a novel vector for improved gene delivery to lung cancer cells. Front Cell Dev Biol. 9, 707607(2021).
  13. Li, X. Extracellular vesicle-encapsulated adeno-associated viruses for therapeutic gene delivery to the heart. Circulation. 148 (5), 405-425 (2023).
  14. Wang, W., et al. Intravitreal injection of an exosome-associated adeno-associated viral vector enhances retinoschisin 1 gene transduction in the mouse retina. Hum Gene Ther. 32 (13-14), 707-716 (2021).
  15. Breuer, C. B., et al. In vivo engineering of lymphocytes after systemic exosome-associated AAV delivery. Sci Rep. 10 (1), 4544(2020).
  16. Cheng, M., et al. Probing aspects of extracellular vesicle-associated AAV allows increased vector yield and insight into its transduction and immune-evasive properties. Mol Ther Methods Clin Dev. 33 (1), 101407(2025).
  17. Elmore, Z. C., et al. The membrane-associated accessory protein is an adeno-associated viral egress factor. Nat Commun. 12 (1), 6239(2021).
  18. Deshetty, U. M., Sil, S., Buch, S. Gene therapy for the heart: Encapsulated viruses to the rescue. Extracell Vesicles Circ Nucl Acids. 5 (1), 114-118 (2024).
  19. Fan, X., et al. Targeted repair of spinal cord injury based on miR-124-3p-loaded mesoporous silica camouflaged by stem cell membrane modified with rabies virus glycoprotein. Adv Sci (Weinh). 11 (21), e2309305(2024).
  20. Yao, C., et al. Self-assembly of stem cell membrane-camouflaged nanocomplex for microRNA-mediated repair of myocardial infarction injury. Biomaterials. , 257-120256 (2020).
  21. Tian, Y., et al. Biomimetic mesenchymal stem cell membrane-coated nanoparticle delivery of mkp5 inhibits hepatic fibrosis through the Ire/xbp1 pathway. J Nanobiotechnology. 22 (1), 741(2024).
  22. Kang, K., et al. Exosomes secreted from CXCR4 overexpressing mesenchymal stem cells promote cardioprotection via akt signaling pathway following myocardial infarction. Stem Cells Int. 2015, 659890(2015).
  23. Han, X., et al. Mesenchymal stem cells in treating human diseases: Molecular mechanisms and clinical studies. Signal Transduct Target Ther. 10 (1), 262(2025).
  24. Ong, S. G., Chitneni, M., Lee, K. S., Ming, L. C., Yuen, K. H. Evaluation of extrusion technique for nanosizing liposomes. Pharmaceutics. 8 (4), 36(2016).
  25. Tackenberg, M. W., Kleinebud, P. Encapsulation of liquids via extrusion--A review. Curr Pharm Des. 21 (40), 5815-5828 (2015).
  26. Bai, J. -J., et al. Dean-flow-coupled elasto-inertial focusing accelerates exosome purification to facilitate single vesicle profiling. Anal Chem. 95 (4), 2523-2531 (2023).
  27. He, S., et al. Biomimetic gene delivery system coupled with extracellular vesicle-encapsulated AAV for improving diabetic wound through promoting vascularization and remodeling of inflammatory microenvironment. J Nanobiotechnology. 23 (1), 242(2025).
  28. Smith, S. M., et al. Functional equivalence of stem cell and stem cell-derived extracellular vesicle transplantation to repair the irradiated brain. Stem Cells Transl Med. 9 (1), 93-105 (2020).
  29. Liang, Y., Lehrich, B. M., Zheng, S., Lu, M. Emerging methods in biomarker identification for extracellular vesicle-based liquid biopsy. J Extracell Vesicles. 10 (7), e12090(2021).
  30. Verma, S., et al. Seroprevalence of adeno-associated virus neutralizing antibodies in males with Duchenne muscular dystrophy. Hum Gene Ther. 34 (9-10), 430-438 (2023).
  31. Yan, B., Liang, Y. New therapeutics for extracellular vesicles: Delivering CRISPR for cancer treatment. Int J Mol Sci. 23 (24), 15758(2022).
  32. Hu, C. M. Erythrocyte membrane-camouflaged polymeric nanoparticles as a biomimetic delivery platform. Proc Natl Acad Sci U S A. 108 (27), 10980-10985 (2011).
  33. Aryal, S., et al. Erythrocyte membrane-cloaked polymeric nanoparticles for controlled drug loading and release. Nanomedicine (Lond). 8 (8), 1271-1280 (2013).
  34. Zhang, W., Huang, X. Stem cell membrane-camouflaged targeted delivery system in tumor. Mater Today Bio. 16, 100377(2022).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Mesenchymal Stem CellsExtracellular VesiclesGene DeliveryNanovesicle PlatformAAV VectorsMembrane Enveloped NanovesiclesRegenerative MedicineTherapeutic Gene TransferEV MimickingSize Defined Extrusion

Powiązane artykuły