Artykuł badawczy

Ustanowienie kultur pierwotnych wzbogaconych strefami z kory nadnerczy myszy

DOI:

10.3791/70403

⸱

8 maja 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Division of Endocrinology, Boston Children's Hospital, 2Department of Pediatrics, Harvard Medical School, 3Harvard Stem Cell Institute, 4Institute of Biomedical Science, University of São Paulo, 5Broad Institute of MIT and Harvard

W tym artykule

Podsumowanie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Opracowano trwały i możliwy do powtórzenia sposób utworzenia 2D pierwotnych kultur komórek wzbogaconych o strefę kłębuszkową i strefę prążkową kory nadnerczy u myszy. System ten zachowuje kluczowe cechy molekularne i funkcjonalne każdej strefy, umożliwiając skupioną analizę szlaków sygnałowych, produkcji hormonów oraz zachowania komórek kory nadnerczy ex vivo.

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Gruczoł nadnerczy myszy jest otoczona warstwą komórek mezenchymalnych (kapsułą) i zawiera leżącą w głębi korę zorganizowaną w wyraźne strefę skoncentryczne o specjalistycznych funkcjach endokrynny: strefę ziarnistą (zG), która wytwarza aldosteron i strefę pręcikowatą (zF), która wytwarza kortikosteron. Nawa nadnerczy, znajdująca się w centrum gruczołu, wytwarza katecholaminy. Badania mechanizmu działania komórek z każdej strefy kory nadnerczy były ograniczone przez brak in vitro modeli, które zachowują ich strefowo-specyficzne cechy molekularne, komórkowe i funkcjonalne. Aby przezwyciężyć tę ograniczenie, opracowano podejście do frakcjonowania z wykorzystaniem mikrosekcji dorosłych gruczołów nadnerczy myszy. Metoda ta oddziela komórki nadnerczy od samców myszy na zewnętrzną frakcję wzbogaconą o zG (OF), zawierającą komórki kapsułki i zG oraz wewnętrzną frakcję wzbogaconą o zF (IF), która zawiera komórki zF i nadnerczy. Te frakcje zostały wykorzystane do wygenerowania dwuwymiarowych (2D) pierwotnych kultur wzbogaconych o komórki zG lub zF. Analiza ekspresji genów potwierdziła, że kultury wzbogacone o zG wykazują wysokie poziomy markerów zG (Cyp11b2, Dab2 i Shh), wraz ze zwiększoną liczbą markerów szlaku Wnt/β-kateniny (Wnt4, Lef1). W przeciwieństwie do tego, kultury wzbogacone o zF wykazywały wyższą ekspresję markerów zF (Cyp11b1 i Akr1b7) i niższe poziomy markerów szlaku Wnt/β-kateniny, zgodnie ze strefowym podpisem transkrypcyjnym zF. Ekspresja markerów steroidogenicznych (Nr5a1, Star) potwierdziła nadnerczowe pochodzenie obu frakcji komórek. Hydroksylaza tyrozyny wskazuje na obecność komórek nadnerczy w kulturach wzbogaconych o zF. Funkcjonalnie, kultury wzbogacone o zG wytwarzały aldosteron w warunkach podstawowych i wykazywały zwiększoną produkcję w odpowiedzi na angiotensynę II, potas i hormon aktywujący komórki wytwarzające kortykotropinę (ACTH). Z kolei kultury wzbogacone o zF wytwarzały kortikosteron w warunkach podstawowych i wykazywały zwiększone wydzielanie w odpowiedzi na stymulację ACTH. Ogólnie, ten protokół reprezentuje niezawodny, powtarzalny i biologicznie istotny model in vitro do badania biologii kory nadnerczy. System ten umożliwia strefowo-specyficzne badanie szlaków sygnałowych, mechanizmów molekularnych i reakcji fizjologicznych.

Wprowadzenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Cienka torebka mezenchymalna otula gruczoł nadnerczy myszy, który składa się z dwóch głównych przedziałów: zewnętrznej kory i wewnętrznej rdzeni. Kora nadnerczy dorosłego samca myszy jest dalej podzielona na odrębne strefy, strefę cebulkowatą (zG) i strefę pręcikowatą (zF), każda z unikalnymi cechami morfologicznymi i funkcjonalnymi1,2,3,4. Główną funkcją kory nadnerczy jest produkcja hormonów steroidowych, w tym mineralokortykoidów (aldosteron) i glikokortykoidów (kortikosteron u myszy)5. ZG jest najbardziej zewnętrzną i najbardziej zwartą strefą i składa się z owalnych komórek ułożonych w struktury różyczkowate, które wyrażają syntazę aldosteronu (CYP11B2), umożliwiającą produkcję aldosteronu2,3,5,6,7. Wydzielanie aldosteronu jest głównie regulowane przez układ renina-angiotensyna-aldosteron (RAAS), potas i w mniejszym stopniu ACTH5,8. ZF składa się z większych komórek ułożonych w promieniste sznury/wiązki, stanowi większość (około 85%) kory i jest regulowana głównie przez ACTH2,3,5,9. Wiele ścieżek sygnałowych orkiestruje rozwój, utrzymanie i funkcjonowanie gruczołów nadnerczy, regulując dynamikę komórek progenitorowych, zonowanie i aktywność steroidogenną. Wśród nich, SF-1 (Steroidogenic Factor-1, Nr5a1) jest głównym regulatorem niezbędnym do specyfikacji, proliferacji i produkcji hormonów kory nadnerczy10. Sygnalizacja Sonic hedgehog (Shh), aktywna w zG, promuje ekspansję komórek progenitorowych i wspiera odnawianie kory w zG11,12,13.

Sygnalizowanie Wnt, szczególnie przez kanoniczny szlak β-kateniny, jest kluczowe dla zonowania nadnerczy i integralności kory. U myszy, normalna wielkość i zonowanie kory nadnerczy są regulowane przez gradient aktywności sygnałowej WNT, rozciągający się od torebki do zF. Ten gradient jest wspierany przez zlokalizowany wyraz ligandów WNT i potencjalników, głównie WNT4 w zG, oraz WNT2B i R-spondiny (RSPO1 i/lub RSPO3) w torebce7,14,15,16,17,18,19,20,21,22. Kora nadnerczy jest utrzymywana przez biegunowe przepływ komórek z proliferacyjnych komórek progenitorowych zlokalizowanych w subkapsularnej/zewnętrznej strefie zG, które dają początek zróżnicowanym komórkom zG, które migrują w kierunku zF. Gdy komórki przechodzą z zG do zF, przechodzą zmiany w ekspresji genów i funkcji, określane jako trans-dyferencjacja. Ten model został mocno wsparty przez badania śledzące linię rodową, za pomocą transgennej linii myszy ASCre/+, która specyficznie celowana jest na komórki produkujące aldosteron w zG23,24,25.

W celu badania biologii nadnerczy zastosowano kilka podejść in vitro opartych na dysocjacji całej gruczołu nadnerczy26,27,28. Na przykład, jedno badanie opisuje dysocjację kory nadnerczy w celu przeprowadzenia analiz elektrofizjologicznych i patch-clamp27, a inne badanie zastosowało dysocjowane komórki kory nadnerczy do zbadania mechanizmów sygnałowania związanych z fizjologią nadnerczy i regulacją ciśnienia krwi26. Chociaż te metodologie dostarczyły ważnych wnikliwości funkcjonalnych, opierają się one na komórkach z całych preparatów nadnerczy, a nie na separacji stref kory przed hodowlą komórek.

Biorąc pod uwagę złożoność i różnorodność histologiczną gruczołu nadnerczy, zrozumienie odrębnych ról jego komórkowych przedziałów jest niezbędne do wyjaśnienia mechanizmów leżących u podstaw funkcji nadnerczy. W niniejszym badaniu ustanowiono pierwotne hodowle komórek kory nadnerczy myszy, wzbogacone o komórki zG lub zF. Główną zaletą tej metody jest wytwarzanie wzbogaconych komórek zG hodowlą, umożliwiającą eksperymentalne modyfikowanie ścieżek sygnałowania i czynników środowiskowych, aby lepiej zbadać jego specyficzną rolę w biologii kory nadnerczy. Obejmuje to badanie utrzymania komórek progenitorowych, mechanizmów leżących u podstaw plastyczności strefowej i trans-dyferencjacji w kierunku zF oraz modelowanie składu macierzy zewnątrzkomórkowej. Równolegle ta metoda generuje wysoce wzbogacone hodowle komórek zF, zapewniając

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wszystkie eksperymenty przeprowadzono zgodnie z protokołami zatwierdzonymi przez Instytucjonalny Komitet ds. Opieki nad Zwierzętami i Ich Zastosowaniami w Dziedzinie Badań w Boston Children’s Hospital (IACUC) na podstawie zgody numer 00002611. Pełna lista wszystkich materiałów użytych w tym protokole, w tym reagentów, materiałów eksploatacyjnych i sprzętu, znajduje się w Tabeli Materiałów, wraz z odpowiednimi producentami i numerami katalogowymi, aby zapewnić możliwość powtórzenia eksperymentu.

Pierwotne kultury komórek strefy glomerularnej i fasciculata nadnerczy myszy
Metody użyte do ustanowienia pierwotnych kultur komórek nadnerczy myszy dorosłych samców typu dzikiego (Mus musculus, C57BL/6) w tym badaniu zostały zaadaptowane z procedury pierwotnie opracowanej dla szczurów Sprague-Dawley28. Aby potwierdzić segregację i tożsamość populacji komórek strefy glomerularnej i fasciculata, zastosowano model śledzenia linii za pomocą myszy Cyp11b2tm1.1(cre)Brlt/+ (znanych również jako-Cre)1,2,3,4 oraz Gt(ROSA)26Sortm4(ACTB-tdTomato-EGFP) Luo/J (znanych również jako ROSAmT/mG)29.

Przygotowanie przed zabiegiem
Materiały
Dwa zestawy kleszczy i nożyczek do powierzchniowych nacięć oraz inny zestaw do nacięcia jamy brzusznej (Dodatek Rysunek 1A). Podgrzanie pożywki kulturalnej i PBS (37 °C). Przygotowanie 2 naczyń (P60) z DMEM/F-12. Przygotowanie 3 naczyń (P60) z podgrzanym PBS do płukania gruczołów kolejno (kąpiele 1, 2 i 3) (Dodatkowe Rysunki 1B, 1–3) oraz 1 naczynia do przechowywania nadnercza w roztworze (Dodatkowe Rysunki 1B, 4). Przygotowanie 2 naczyń (P60) z papierem filtracyjnym na powierzchni (Dodatkowe Rysunki 1C, 1–2). Przygotowanie 2 naczyń P60 z 500 µL roztworu do trawienia i oznakowane jako glomerulosa (zG) lub fasciculata (zF) (Dodatkowe Rysunki 1D, zG, zF). Przygotowanie 2 probówek, oznakowanych jako zG i zF, i dodanie 4,5 mL roztworu do trawienia.

Roztwory
Aby przygotować roztwór do trawienia, kolagenazę typu I (stężenie końcowe 4 mg/mL) i DNAzę I (stężenie końcowe 0,04 mg/mL) rozpuszczono w 5 mL czystego DMEM/F-12 medium. Roztwór przefiltrowano do 50 mL probówki za pomocą strzykawki i filtra 0,22 µM. Roztwór do trawienia należy przygotowywać świeżo za każdym razem.

Zwierzęta
Aby uzyskać pierwotne kultury wzbogacone o komórki strefy glomerularnej i fasciculata nadnerczy myszy, użyto 10–15 młodych dorosłych samców myszy, w wieku około 6–7 tygodni. Samice mają nieco większe nadnercza niż samce, a do tego protokołu można użyć obu płci. Jednak w tym badaniu użyto tylko samców, aby uniknąć potencjalnej interferencji z strefą X obecną u młodych samic, zapewniając dokładne separację stref. Myszy uśmiercono poprzez wdychanie CO₂ zgodnie z instytucjonalnymi wytycznymi dotyczącymi opieki nad zwierzętami. Śmierć potwierdzono brakiem oddechu i brakiem reakcji odruchowej. Gruczoły nadnerczy wycięto natychmiast, w ciągu 3–5 minut po potwierdzeniu śmierci, aby zachować żywotność tkanki.

Pozycja i ekspozycja jamy brzusznej
Mysz została umieszczona w pozycji twarzą do dołu na sterylnej płaskiej powierzchni (Rysunek 1A). Sierść zwierzęcia dezynfekowało się 70% alkoholem. Do nacięć skórnych użyto kleszczy i nożyczek, a drugi zestaw do nacięcia jamy brzusznej. W początkowej fazie wykonano nacięcie w rejonie pachwinowym brzucha, którego przedłużeniem było nacięcie skierowane bocznie w kierunku klatki piersiowej po obu stronach, aby eksponować otrzewną (Rysunek 1B). Skórę ostrożnie odstawiono, a następnie ścięgna brzucha, aby eksponować jamę brzuszną (Rysunek 1C). Początkowe nacięcie powinno być powierzchowne, aby uniknąć uszkodzenia narządów wewnętrznych. Przejść do warstwy mięśniowej ostrożnym nacięciem, a następnie eksponować jamę brzuszną. Unikaj rozerwania naczyń krwionośnych, ponieważ krwotok może utrudnić zlokalizowanie gruczołów nadnerczy i opóźnić pobieranie. Zmień narzędzia chirurgiczne, aby zminimalizować zakażenie mikrobiologiczne.

Identyfikacja i pobieranie lewego gruczołu nadnerczy
Lewy gruczoł nadnerczy znajduje się w środkowej części i powyżej lewego nerki w otrzewnej, ma kształt owalny i różową bar

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ustanowienie i charakterystyka strefowo wzbogaconych kultur pierwotnych komórek nadnerczy
Pierwotne kultury komórek nadnerczy zostały pomyślnie ustalone z OF, wzbogacone o komórki zG, oraz z IF, wzbogacone o komórki zF. Przedstawiające obrazy kulturalnych komórek przedstawiono na Rysunku 2A (OF-zG) i Rysunku 2B (IF-zF). Aby ocenić wzbogacenie komórek zG i nie-zG w tych kulturach, wykorzystano model myszy AS<...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

W niniejszym badaniu przedstawiono udoskonalony protokół, który generuję kultury komórek nadnerczy myszy pierwotnych wzbogaconych o komórki zG (OF) i zF (IF), które wiernie odtwarzają tożsamość strefową i funkcję steroidogeniczną każdej strefy. Protokół ten powinien umożliwić szczegółowe zbadanie biologii komórkowej i molekularnej kory nadnerczy w kontekście strefy, wspierając badania nad białkami, szlakami sygnałowymi oraz mechanizmami zaangażowanymi w rozwój, różnicowanie, funkcję i odnowę kory nadnerczy, przy zmniejsz...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy deklarują, że nie mają żadnych konkurencyjnych interesów finansowych związanych z tym badaniem.

Podziękowania

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

To dzieło zostało wsparte przez FAPESP (Fundacja Badań São Paulo, Brazylia), numer projektu 2024/14165–6 (BEPE – JLK), FAPESP: 2020/02988–7 (C.F.P.L), oraz wsparcie 2R01DK123694 (dla DTB) i fundusze z Działu Endokrynologii w Szpitalu Dziecięcym w Bostonie (DTB).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Rozdzielacz stożkowy (50 mL )Corning (Corning, NY, USA)352070Sterile
Filtrostrzykawka 0,22 µmMilliporeSigma (Burlington, MA, USA)SLGV033RSFiltracja roztworu trawiącego
10 mL jednorazowa strzykawkaBD Plastipak (Franklin Lakes, NJ, USA)300912Sterile
5 mL pipeta serologicznaCorning (Corning, NY, USA)4487Sterile
10 mL pipeta serologicznaCorning (Corning, NY, USA)4488Sterile
Filtrowane końcówki pipet (P200)Axygen (Union City, CA, USA)TF-200-R-SSterile
Filtrowane końcówki pipet (P1000)Axygen (Union City, CA, USA)TF-1000-R-SSterile
Płytka kulturowa P60Corning (Corning, NY, USA)430166Przeznaczone do hodowania tkanek
48-dołkowa płytkaCorning (Corning, NY, USA)3527Przeznaczone do hodowania tkanek
Sterylny papier filtrowyN/AN/AUsuwanie tłuszczu i wsparcie w rozcinaniu
Środek DMEM/F-12Gibco, Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA, USA)11320033Formuła 1:1
Izolowane fetalne surowica bydła (FBS)Gibco, Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA, USA)10082147Inaktywowane termicznie
Dodatek ITSGibco, Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA, USA)41400045100X
Dodatek GlutaMAXGibco, Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA, USA)35050061100X
Penicylina-streptomycyna (100X)Gibco, Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA, USA)15140122Antybiotyk
PBS 1XGibco, Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA, USA)10010023pH 7.4
Kolagenaza typu IGibco, Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA, USA)17100-017Trawienie tkanki
DNase ISigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA)DN25-1Trawienie tkanki
Angiotensyny II (Ang II)Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA)A9525Stymulacja hormonalna
Adrenokortykotropinowy hormon (ACTH)Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA)A0298Stymulacja hormonalna
ForskolinSigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA)F6886Stymulacja cAMP
Chlorku potasu (KCl)Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA)P9541Stymulacja aldosteronem
Chlorku sodu (NaCl)Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA)S7653Kontrola pojazdu
Małe nożyczki chirurgiczneFine Science Tools (Foster City, CA, USA)14060-09Rozcinanie
Skalpel z jednorazowym ostrzemFine Science Tools (Foster City, CA, USA)10003-12Mikrorozcinanie
DrążkiFine Science Tools (Foster City, CA, USA)11252-00Rozcinanie
Zaokrąglone drążkiFine Science Tools (Foster City, CA, USA)11251-10Rozcinanie
Kopułkowy dyfuzor powietrzaThermo Fisher Scientific (Waltham, MA, USA)N/ASterylne przetwarzanie tkanki
InkubatorThermo Fisher Scientific (Waltham, MA, USA)N/AHodowla komórek
CentryfugaEppendorf (Hamburg, Germany)N/APelletowanie komórek
Komora do liczenia NeubaueraHausser Scientific (Horsham, PA, USA)1490Liczenie komórek
Środek RIPA do lizy i ekstrakcjiThermo Fisher Scientific (Waltham, MA, USA)89901Ekstrakcja białka
Kompleks inhibitorów proteaz HaltThermo Fisher Scientific (Waltham, MA, USA)87786Ekstrakcja białka
Fisherbrand Model 120 Sonic DismembratorThermo Fisher Scientific (Waltham, MA, USA)FB120Sonizacja
System RIATecan (Männedorf, Switzerland)MG13051Ilościowa analiza hormonów
Cobra II Auto-Gamma CounterBerthold Technologies (Bad Wildbad, Germany)N/APomiar radioaktywności
Zestaw ELISA kortykosteronu (96-dołkowy)Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA, USA)55-CORMS-E01Pomiar hormonów
Środek montujący ProLong Gold AntifadeThermo Fisher Scientific (Waltham, MA, USA)P36930Środek montażowy
Przeciwciało pierwotne mysie przeciwko Dab2BD Biosciences (San Jose, CA, USA)610464Przeciwciało pierwotne
Przeciwciało pierwotne kurczaka przeciwko GFPAves Labs (Tigard, OR, USA)GFP-1020Przeciwciało pierwotne
Przeciwciało pierwotne królicze przeciwko RFPRockland Immunochemicals (Limerick, PA, USA)600-401-379Przeciwciało pierwotne
Przeciwciało wtórne Alexa Fluor 594 kozła przeciwko myszyInvitrogen (Carlsbad, CA, USA)A-11005Przeciwciało wtórne
Przeciwciało wtórne Alexa Fluor 594 kozła przeciwko kurczakowiInvitrogen (Carlsbad, CA, USA)A-11042Przeciwciało wtórne
Przeciwciało wtórne Alexa Fluor 647 kozła przeciwko królikowiInvitrogen (Carlsbad, CA, USA)A-21244Przeciwciało

Bibliografia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Zelander, T. The ultrastructure of the adrenal cortex of the mouse. Z. Zellforsch. Mikrosk. Anat. 46 (6), 710-716 (1957).
  2. Nishimoto, K., et al. Adrenocortical zonation in humans under normal and pathological conditions. J. Clin. Endocrinol. Metab. 95 (5), 2296-2305 (2010).
  3. Freedman, B. D., et al. Adrenocortical zonation results from lineage conversion of differentiated zona glomerulosa cells. Dev. Cell. 26 (6), 666-673 (2013).
  4. Leng, S., Carlone, D. L., Guagliardo, N. A., Barrett, P. Q., Breault, D. T. Rosette morphology in zona glomerulosa formation and function. Mol. Cell. Endocrinol. 530, 111287(2021).
  5. Gwynne, J. T., Strauss, J. F. The role of lipoproteins in steroidogenesis and cholesterol metabolism in steroidogenic glands. Endocr. Rev. 3 (3), 299-329 (1982).
  6. Zhu, Y., Zhang, X., Hu, C. Structure of rosettes in the zona glomerulosa of human adrenal cortex. J. Anat. 243 (4), 684-689 (2023).
  7. Leng, S., et al. β-Catenin and FGFR2 regulate postnatal rosette-based adrenocortical morphogenesis. Nat. Commun. 11 (1), 1680(2020).
  8. Rainey, W. E. Adrenal zonation: clues from 11β-hydroxylase and aldosterone synthase. Mol. Cell. Endocrinol. 151 (1-2), 151-160 (1999).
  9. Rebuffé-Scrive, M., Krotkiewski, M., Elfversson, J., Björntorp, P. Muscle and adipose tissue morphology and metabolism in Cushing’s syndrome. J. Clin. Endocrinol. Metab. 67 (6), 1122-1128 (1988).
  10. Luo, X., Ikeda, Y., Parker, K. L. A cell-specific nuclear receptor is essential for adrenal and gonadal development and sexual differentiation. Cel. l. 77 (4), 481-490 (1994).
  11. Huang, C. C. J., Miyagawa, S., Matsumaru, D., Parker, K. L., Yao, H. H. C. Progenitor cell expansion and organ size of mouse adrenal is regulated by Sonic Hedgehog. Endocrinology. 151 (3), 1119-1128 (2010).
  12. King, P., Paul, A., Laufer, E. Shh signaling regulates adrenocortical development and identifies progenitors of steroidogenic lineages. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A, 106 (50), 21185-21190 (2009).
  13. Ching, S., Vilain, E. Targeted disruption of Sonic Hedgehog in the mouse adrenal leads to adrenocortical hypoplasia. Genesis. 47 (9), 628-637 (2009).
  14. Kim, A. C., et al. Targeted disruption of β-catenin in Sf1-expressing cells impairs development and maintenance of the adrenal cortex. Development. 135 (15), 2593-2602 (2008).
  15. Berthon, A., et al. Constitutive β-catenin activation induces adrenal hyperplasia and promotes adrenal cancer development. Hum. Mol. Genet. 19 (8), 1561-1576 (2010).
  16. Basham, K. J., et al. A ZNRF3-dependent Wnt/β-catenin signaling gradient is required for adrenal homeostasis. Genes Dev. 33 (3-4), 209-220 (2019).
  17. Finco, I., Lerario, A. M., Hammer, G. D. Sonic Hedgehog and WNT signaling promote adrenal gland regeneration in male mice. Endocrinology. 159 (2), 579-596 (2018).
  18. Heikkilä, M., et al. Wnt-4 deficiency alters mouse adrenal cortex function, reducing aldosterone production. Endocrinology. 143 (11), 4358-4365 (2002).
  19. Drelon, C., et al. PKA inhibits WNT signalling in adrenal cortex zonation and prevents malignant tumour development. Nat. Commun. 7 (1), 12751(2016).
  20. Heaton, J. H., et al. Progression to adrenocortical tumorigenesis in mice and humans through insulin-like growth factor 2 and β-catenin. Am. J. Pathol. 181 (3), 1017-1033 (2012).
  21. Borges, K. S., et al. Wnt/β-catenin activation cooperates with loss of p53 to cause adrenocortical carcinoma in mice. Oncogene. 39 (30), 5282-5291 (2020).
  22. Borges, K. S., et al. Non-canonical Wnt signaling triggered by WNT2B drives adrenal aldosterone production. bioRxiv. , (2024).
  23. Sasano, H. Cell proliferation and apoptosis in normal and pathologic human adrenal. Mod. Pathol. 8 (1), 11-17 (1995).
  24. Chang, S. P., Morrison, H. D., Nilsson, F., Kenyon, C. J., West, J. D., et al. Cell proliferation, movement, and differentiation during maintenance of the adult mouse adrenal cortex. PLoS One. 8 (12), e81865(2013).
  25. Mitani, F. Functional zonation of the rat adrenal cortex: the development and maintenance. Proc. Jpn. Acad. Ser. B, 90 (5), 163-183 (2014).
  26. Dinh, H. A., Volkert, M., Secener, A. K., Scholl, U. I., Stölting, G. T- and L-type calcium channels maintain calcium oscillations in the murine zona glomerulosa. Hypertension. 81 (4), 811-822 (2024).
  27. Penton, D., et al. Task3 potassium channel gene invalidation causes low renin and salt-sensitive arterial hypertension. Endocrinology. 153 (10), 4740-4748 (2012).
  28. Mattos, G. E., Lotfi, C. F. P. Differences between the growth regulatory pathways in primary rat adrenal cells and mouse tumor cell line. Mol. Cell. Endocrinol. 245 (1-2), 31-42 (2005).
  29. Muzumdar, M. D., Tasic, B., Miyamichi, K., Li, L., Luo, L. A global double-fluorescent Cre reporter mouse. Genesis. 45 (9), 593-605 (2007).
  30. Livak, K. J., Schmittgen, T. D. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2-ΔΔCT method. Methods. 25 (4), 402-408 (2001).
  31. Berber, M., et al. Rho/ROCK signaling and α-catenin mediate β-catenin-driven hyperplasia in the adrenal cortex via adherens junctions. J. Clin. Invest. , (2026).
  32. Smith, T. T. G., et al. Forced treadmill running reduces systemic inflammation yet worsens upper limb discomfort in a rat model of work-related musculoskeletal disorders. BMC Musculoskelet. Disord. 21 (1), 57(2020).
  33. Kremer, J. L., et al. Extracellular matrix protein signatures of the outer and inner zones of the rat adrenal cortex. J. Proteome Res. 23 (8), 3418-3432 (2024).
  34. Pignatti, E., Leng, S., Carlone, D. L., Breault, D. T. Regulation of zonation and homeostasis in the adrenal cortex. Mol. Cell. Endocrinol. 441, 146-155 (2017).
  35. Pignatti, E., et al. Beta-catenin causes adrenal hyperplasia by blocking zonal transdifferentiation. Cell Rep. 31 (3), 107524(2020).
  36. Romero, D. G., et al. Disabled-2 is expressed in the adrenal zona glomerulosa and is involved in aldosterone secretion. Endocrinology. 148 (6), 2644-2652 (2007).
  37. Sahut-Barnola, I., Lefrancois-Martinez, A. M., Jean, C., Veyssiere, G., Martinez, A. Adrenal tumorigenesis targeted by the corticotropin-regulated promoter of the aldo-keto reductase AKR1B7 gene in transgenic mice. Endocr. Res. 26 (4), 885-898 (2000).
  38. Vidal, V., et al. The adrenal capsule is a signaling center controlling cell renewal and zonation through Rspo3. Genes Dev. 30 (12), 1389-1394 (2016).
  39. Dörner, J., et al. GLI1+ progenitor cells in the adrenal capsule of the adult mouse give rise to heterotopic gonadal-like tissue. Mol. Cell. Endocrinol. 441, 164-175 (2017).
  40. Guo, Y., et al. 3D culture system for human adrenal glands that uses a sequential processing medium to facilitate cortical-medullary cell development. Clin. Lab. 70 (12), (2024).
  41. Friedrich, L., Schuster, M., Rubin de Celis, M. F., Berger, I., Bornstein, S. R., et al. Isolation and in vitro cultivation of adrenal cells from mice. STAR Protoc. 2 (4), 100999(2021).
  42. Mattos, G. E., Jacysyn, J. F., Amarante-Mendes, G. P., Lotfi, C. F. P. Comparative effect of FGF2, synthetic peptides 1–28 N-POMC and ACTH on proliferation in rat adrenal cell primary cultures. Cell Tissue Res. 345 (3), 343-356 (2011).
  43. Gazdar, A. F., et al. Establishment and characterization of a human adrenocortical carcinoma cell line that expresses multiple pathways of steroid biosynthesis. Cancer Res. 50 (17), 5488-5496 (1990).
  44. Wang, T., Rainey, W. E. Human adrenocortical carcinoma cell lines. Mol. Cell. Endocrinol. 351 (1), 58-65 (2012).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Wzbogacanie strefowenadnercze myszymikrodysekcjaekspresja gen wzona glomerulosazona fasciculatamarkery steroidogenneWnt beta katenina

Powiązane artykuły