Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł badawczy
Badanie to dotyczyło mężczyzn, którzy odwiedzili poradnię zewnętrzną Szpitala Ludowego w Heyuan i przeszli testy kwasu nukleinowego na obecność wirusa brodawczaka ludzkiego (HPV), dostarczając wstępnych informacji na temat cech epidemiologicznych i rozkładu genotypów zakażeń HPV w regionie. Te wyniki dostarczają wsparcia w zapobieganiu i kontrolowaniu chorób związanych z HPV.
Celem niniejszej badania było zbadanie częstości występowania i rozkładu genotypów wirusa brodawczaka ludzkiego (HPV) wśród męskich pacjentów ambulatoryjnych w Heyuan oraz porównanie wskaźników zakażenia w poszczególnych grupach wiekowych, w celu uzyskania informacji na temat lokalnych strategii zapobiegania i leczenia. W badaniu wzięło udział 1559 mężczyzn, którzy przeszli testy HPV w Szpitalu Ludowym w Heyuan w latach 2021-2024, a do analizy włączono wyniki tylko z pierwszych wizyt. Identyfikację dwudziestu trzech genotypów HPV przeprowadzono za pomocą reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR) z hybrydyzacją reverse dot blot. Przeprowadzono retrospektywną analizę przekrojową w celu oceny ogólnej częstości występowania HPV, wskaźników zakażenia specyficznych dla wieku, wzorców zakażenia, rozkładu podtypów oraz zasięgu szczepionek. Analizy statystyczne przeprowadzono za pomocą programu SPSS wersja 23.0. Dane liczbowe przedstawiono jako liczby i procenty, a różnice między grupami oceniano za pomocą testu chi-kwadrat, przy czym istotność statystyczną określono na poziomie p < 0,05. Ogólny wskaźnik zakażenia HPV wynosił 45,3% (707/1559). Wskaźniki zakażenia w poszczególnych grupach wiekowych (≤24, 25-34, 35-44, 45-54, 55-64 i ≥65 lat) wynosiły odpowiednio 42,8%, 43,1%, 45,8%, 48,2%, 68,3% i 46,4%. Najczęstszym wzorcem były infekcje jednego typu, które stanowiły 57,0% przypadków pozytywnych. Pięć najczęściej wykrywanych wysokiego ryzyka genotypów to HPV52 (9,05%), 16 (5,90%), 53 (5,09%), 51 (5,01%) i 59 (4,93%), podczas gdy dominujące niskie ryzyko genotypy to HPV6 (21,24%), 11 (9,85%) i 43 (5,17%). Teoretyczne współczynniki pokrycia dla szczepionek dwuwalencyjnych, czterowalencyjnych i dziewięciowalencyjnych wynosiły odpowiednio 8,65%, 39,74% i 55,41%. Częstość występowania zakażenia HPV wśród męskich pacjentów ambulatoryjnych w Heyuan była stosunkowo wysoka, przy czym dominującym wzorcem były infekcje jednego typu. Najczęstszymi wysokiego ryzyka genotypom były HPV52, 16, 53, 51 i 59, a prowadzącymi niskiego ryzyka HPV6, 11 i 43. Najwyższy wskaźnik zakażenia obserwowano w grupie wiekowej 55-64 lat. Wyniki te dostarczają danych specyficznych dla regionu, które mogą wspierać opracowanie dostosowanych strategii zapobiegania i szczepień przeciwko HPV dla mężczyzn w tej populacji.
Wirus brodawczaka ludzkiego (HPV) jest wirusem DNA, który jest przenoszony głównie poprzez kontakt seksualny, a jego jedynym gospodarzem są ludzie. Częstość występowania HPV jest podobna u mężczyzn i kobiet na całym świecie, waha się od 3,5% do 45% u mężczyzn i od 2% do 44% u kobiet1. Prawie 80% seksualnie aktywnych kobiet i mężczyzn zarazić się wirusem przynajmniej raz w życiu, ponieważ trasy transmisji obejmują nie tylko kontakt seksualny, ale także tarcie lub kontakt z powierzchniami skóry i błonami śluzowymi, pionowe przenoszenie z matki na dziecko itp2. Do tej pory opisano ponad 200 różnych genotypów HPV, sklasyfikowanych jako wysokiego ryzyka ze względu na ich związek z wystąpieniem raka szyjki macicy, pochwy, sromu, odbytu, głowy i szyi oraz prącia, oraz niskiego ryzyka związanego z brodawkami narządów płciowych lub brodawczakami spichrzowatymi3. W większości przypadków infekcja może zostać całkowicie usunięta przez układ odpornościowy w ciągu 12 do 24 miesięcy bez powikłań klinicznych. Jednak jeśli układ odpornościowy nie usunie wirusa, rozwija się trwała infekcja, która stanowi podstawę dla wystąpienia nowotworowych nadmiernie wzrośliwyh zmian4. Konkretnie, trwała infekcja wysokiego ryzyka wirusem brodawczaka ludzkiego (HR-HPV) jest związana z rozwojem śródnabłonkowych zmian przedrakowiaka (SILs) oraz śródnabłonkowego nowotworu przedrakowego prącia (PeiN); Obie te zmiany są stanami przedrakowymi raka szyjki macicy u kobiet i raka prącia u mężczyzn5,6. Ponadto, czynniki związane z trybem życia, takie jak długotrwałego stosowanie doustnych środków antykoncepcyjnych, palenie, niedobory odpornościowe lub współistniejące przenoszone drogą płciową infekcje mogą również sprzyjać proliferacji nowotworowej7.
Obecnie istnieje wiele badań na temat częstości występowania, czynników ryzyka i strategii zapobiegania infekcji HPV u kobiet w Chinach, a także wzrosła znacząco świadomość i wskaźnik szczepień przeciwko HPV wśród kobiet. HPV łatwo rozprzestrzenia się między partnerami seksualnymi, aw wielu przypadkach może wystąpić wiele niewykrytych zdarzeń przenoszenia między małżonkami8. Najnowsze wytyczne kliniczne w Chinach priorytetowo wskazują na szczepienia przeciwko HPV dla kobiet w wieku 9–26 lat, ze szczególnym naciskiem na dziewczęta w wieku 9–14 lat. Ponadto, szczepienia są zalecane dla kobiet w wieku 27–45 lat i mężczyzn w wieku 9–26 lat, aby promować wspólne wysiłki zapobiegawcze między płciami9.
Infekcja HPV u mężczyzn może być przyczyną infekcji HPV i powtarzającej się infekcji u partnerów seksualnych kobiet10. Ponadto, infekcja HPV może powodować choroby takie jak męskie brodawki pospolite, brodawki narządów płciowych, raka narządów płciowych, raka gardła i odbytu11, a także może być związana z niepłodnością męską12. Jednakże, jest stosunkowo niewiele badań nad infekcją HPV u mężczyzn w Chinach. Co więcej, Chiny mają rozległe terytorium i dużą liczbę grup etnicznych. Pojęcia małżeństwa i nawyki życiowe różnią się w zależności od regionu. Infekcja HPV ma również charakter regionalny, rasowy i zróżnicowany13. Inne badania wykazały, że szczepienie przeciwko HPV u mężczyzn wykazuje znaczący potencjał zapobiegania zmianom przedrakowym wśród partnerów seksualnych14. Kompleksowe zrozumienie wzorców infekcji HPV u mężczyzn i profili genotypowych może poprawić systemy zdrowia publicznego i zmniejszyć koszty związane z leczeniem i opieką nad pacjentami płci męskiej i żeńskiej. Raporty wskazują, że choroby związane z HPV u mężczyzn nakładają większy ciężar ekonomiczny na ogólne wydatki na ochronę zdrowia we Włoszech15.
Dlatego niniejsze badanie ma na celu zrozumienie częstości występowania, wieku-stratyfikowanej stopy dodatniości, częstości genotypów, dystrybucji wzorców infekcji oraz zasięgu typu szczepionki wśród mężczyzn, którzy przeszli testy w regionie Heyuan w latach 2021–2024, dostarczając ważnej podstawy dla wczesnego wykrywania, diagnozy, zapobiegania i leczenia infekcji HPV u mężczyzn w regionie.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
To badania przeglądano i zatwierdzono przez Komitet Etyki Badań Medycznych Szpitala Ludowego w Heyuan (Numer zgody: YXYJLL-SFKJ202461; Data zgody: 15 maja 2024). Świadectwo etyczne zostało przesłane jako plik uzupełniający. Pacjent, rodzic lub opiekun nieletniego podpisał oświadczenie podczas rejestracji, w którym stwierdzono “Zgadzam się na to, że moje kliniczne próbki biologiczne i dane zostaną wykorzystane do badań naukowych, innowacji technologicznych i badań klinicznych zatwierdzonych przez Komitet Etyki Badań Medycznych po usunięciu identyfikowalnych danych osobowych”, a ta analiza nie będzie stanowić żadnego dodatkowego ryzyka dla pacjenta i jest zgodna z odpowiednimi przepisami. Wszystkie materiały użyte w tym badaniu są wymienione w Tabeli Materiałów.
Podmioty
Do badania włączono 1559 mężczyzn, którzy odwiedzili poradnię zewnętrzną Szpitala Ludowego w Heyuan i przeszli testowanie na HPV w okresie od stycznia 2021 do grudnia 2024. Osoby badane były w wieku od 2 do 80 lat (populacja badawcza obejmuje wszystkich mężczyzn z prawidłowymi wynikami testów kwasu nukleinowego HPV z wizyt poradniowych w tej instytucji medycznej w latach 2021–2024; Głównym celem jest dostarczenie kompleksowego przeglądu testowania i wzorców zakażeń HPV wśród mężczyzn w regionie; Ponadto drogi zakażenia HPV obejmują nie tylko aktywność seksualną, ale także tarcie lub kontakt ze skórą i błonami śluzowymi, a także przenoszenie pionowe z matki na dziecko. Dlatego nie nałożono żadnych ograniczeń wiekowych, ze średnią wieku (34,2 ± 10,7) lat.
Metody
W badaniu zastosowano retrospektywny wzór przekrojowy w celu przeanalizowania wszystkich mężczyzn, którzy odwiedzili poradnię zewnętrzną naszego szpitala i przeszli testowanie na HPV; tylko pierwsze wyniki pobranej próbki zostały uwzględnione w przypadku osób, które przeszły wielokrotne testowanie.
Pobieranie próbek
Probki komórek złuszczonych zostały pobierane przez wyszkolonych klinicystów za pomocą sterylnych, specjalistycznych szczotek do pobierania próbek. Miejsca pobierania obejmowały grzbietową i brzuszną powierzchnię penisa, szczelinę koronarne wewnętrzną i zewnętrzną, główkę penisa, odcinek końcowy cewki moczowodu oraz wszelkie widoczne zmiany brodawkowate, przy czym wybór miejsca pobierania był uzależniony od indywidualnych ustaleń pacjenta; po pobraniu końcówki szczotek zostały złamane w dedykowanym roztworze do konserwacji próbek. Warunki konserwacji próbek: Po pobraniu próbek, próbki zostały natychmiast przechowywane w lodówce w temperaturze 2–8 °C, a test został zakończony w ciągu 3 dni.
Ekstrakcja DNA
Po oscylowaniu i wymieszaniu każdej próbki, 200 μL zostało sekwencyjnie dodawane do reagentu do ekstrakcji lub oczyszczania kwasu nukleinowego. Ekstrakcja DNA została przeprowadzona za pomocą technologii magnesowych pereł z reagentem do ekstrakcji w w pełni zautomatyzowanym urządzeniu do ekstrakcji kwasu nukleinowego SP96.
Wykrywanie HPV
Testowanie HPV-DNA przeprowadzano za pomocą zestawu do wykrywania ludzkiego wirusa brodawczaka (typ 23), który wykorzystuje kombinację PCR-based in vitro amplifikacji i hybrydyzacji kropki DNA na błonie do wykrywania gatunków HPV. Specyficzne primery zostały zaprojektowane na podstawie cech genetycznych HPV, a fragmenty docelowe z 23 gatunków HPV zostały wzmocnione. Zwiększone produkty zostały hybrydyzowane z sondami typowania umieszczonymi na błonie, w tym 17 HR-HPV (HPV16,51,52,53,18,58,59,31,33,45,56,66,35,39,68,73,82) i 6 LR-HPV (HPV6,11,42,43,81,83). Na podstawie obecności lub braku sygnałów hybrydyzacji określono status zakażenia tymi gatunkami HPV. Określony proces laboratoryjny polegał na użyciu przefiltrowanej końcówki pipety do dodania 5 μL wyekstrahowanego DNA do mieszaniny reakcji PCR, zwiększając tym samym całkowitą objętość do 25 μL. Następnie przeprowadzono amplifikację PCR. Po amplifikacji wszystkie wzmocnione produkty zostały dodane do izotermicznego hybrydyzera zawierającego paski na błonie do hybrydyzacji kolorymetrycznej. Po zakończeniu barwienia można interpretować wyniki.
Analiza statystyczna
Do analizy statystycznej zastosowano oprogramowanie SPSS 23.0. Dane liczbowe wyrażano jako liczbę przypadków (n) i procent (%). Porównanie między grupami przeprowadzono za pomocą testu χ2. Wartość p < 0,05 uznano za statystycznie istotną. Wśród 23 gatunków HPV, dodatni wynik dla dowolnego pojedynczego gatunku wskazuje na infekcję HPV; dodatni wynik tylko dla jednego gatunku wskazuje na pojedyncze zakażenie; a dodatni wynik dla dwóch lub więcej gatunków wskazuje na wielokrotne zakażenie. Wielokrotne
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Ogólna rozpowszechnienie dodatnich wyników HPV w badanej populacji
Spośród 1559 mężczyzn leczonych w trybie ambulatoryjnym, 707 przypadków było pozytywnych pod kątem DNA HPV, co daje odsetek pozytywnych wyników na poziomie 45,3%. Roczne wskaźniki zakażeń HPV wynosiły: 2021 (44,8%, 100/223), 2022 (45,5%, 231/508), 2023 (45,3%, 182/402) oraz 2024 (45,5%, 194/426). Nie stwierdzono istotnej różnicy w częstości zakażeń HPV pomiędzy poszczególnymi latami (χ2 = 0,...
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
HPV jest najczęstszym wirusem przenoszonym drogą płciową u mężczyzn i kobiet. Zakażenie wysokiego ryzyka jest ściśle związane z rakiem szyjki macicy, sromu i pochwy u kobiet oraz rakiem prącia, odbytnicy i gardła u mężczyzn. Uporczywe zakażenia niskiego ryzyka mogą prowadzić do większości brodawczaków narządów płciowych i brodawczaków dróg oddechowych16. Analiza chorób związanych z zakażeniem HPV u mężczyzn wykazała wysoką częstość występowania HPV w męskim penisie, główce penisa / bruździe wieńco...
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Autorzy nie mają żadnych sporów o interesy do zadeklarowania.
Autorzy dziękują Heyuan City Social Development Science and Technology Plan Project za finansowanie tego badania (Grant No. 241029161472532).
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Wykrywanie kwasu nukleinowego Mycoplasma pneumoniae i genu odporności na leki | Guangzhou Da 'an Gene Co., Ltd. | Stream SP96 | |
| Filtr Tips | Coring Life Science Co., Ltd. | 29822001 | 0–10 µL |
| Filtr Tips | Coring Life Science Co., Ltd. | 05623001 | 5–300 µL |
| Zestaw do wykrywania genotypowania wirusa brodawczaka ludzkiego (typ 23) | Shenzhen Ya Neng Biotechnology Co., Ltd. | 20193401918 | |
| Środki do ekstrakcji kwasów nukleinowych (metoda koralików magnetycznych) | Guangzhou Da'an Gene Co., Ltd. | 20170583 | |
| Instrument do amplifikacji PCR | Thermo Fisher Scientific | ABI Veriti DX 96 | |
| Hybridyzer PCR | Shenzhen Ya Neng Biotechnology Co., Ltd. | YN-H16 | |
| Pędzel do pobierania próbek | Shenzhen Ya Neng Biotechnology Co., Ltd. | ||
| Roztwór do konserwacji próbek | Shenzhen Ya Neng Biotechnology Co., Ltd. |
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.