Symulacja warunków hipoksycznych na dużych wysokościach opóźnia gojenie się ran u szczurów

Podsumowanie

Badanie to opracowało i wstępnie potwierdziło model szczura opóźnionego gojenia ran w warunkach hipobarycznej hipoksji na dużych wysokogórkach.

Streszczenie

Hipobaryczne warunki na dużych wysokościach mogą powodować przedłużoną hipoksję ran i upośledzenie gojenia, jednak standaryzowane modele pozostają rzadkie. W tym badaniu opracowaliśmy model opóźnionego gojenia ran i wstępnie go zweryfikowaliśmy, symulując hipoksję na dużych wysokościach za pomocą kontrolowanego układu hipobarycznego. Szczury były trzymane na symulowanych wysokościach od 3000 m (ciśnienie powietrza: 70,1 kPa, ciśnienie tlenu cząstkowe: 14,7 kPa) do 8000 m (ciśnienie powietrza: 35,6 kPa, ciśnienie tlenu cząstkowego: 7,5 kPa) w celu określenia progów bezpieczeństwa, przy czym oceniono stres oksydacyjny i niedotlenienie skóry. Wyniki wykazały zwiększone ryzyko śmiertelności na symulowanej wysokości 6000 m, z tolerancją obserwowaną poniżej 5000 m. Podwyższone wysokości wiązały się ze pogarszającym się stresem oksydacyjnym i zwiększoną hipoksją skóry; wykazywał opóźnienia w gojeniu ran zależne od wysokości, zmniejszoną perfuzję, zahamowaną remodelację kolagenu oraz nasilone reakcje zapalne. Pomimo zwiększonej aktywności czynników regeneracyjnych naczyń, gęstość mikronaczyń uległa zmaleniu. Ogólnie rzecz biorąc, to badanie opracowało i wstępnie zweryfikowało model szczura odpowiedni do badania mechanizmów i interwencji w przewlekłych ranach wywołanych hipoksją na dużych wysokościach.

Wprowadzenie

Naprawa ran skórnych stanowi powszechne i istotne wyzwanie kliniczne. Od ostrych urazów po różne rodzaje ran niegojących się, te schorzenia stanowią stałe obciążenie dla systemów opieki zdrowotnej i jakości życia pacjentów 1,2,3,4,5,6. Gojenje ran nie jest pojedynczym wydarzeniem, lecz wysoce skoordynowanym, nakładającym się procesem wieloetapowym: komórki zapalne, komórki stromalne, keratynocyty oraz układ mikronaczyniowy wspólnie odbudowują bariery i przebudowują tkanki pod wpływem wspólnej regulacji macierzy zewnątrzkomórkowej i różnorodnych sieci sygnalizacyjnych 7,8,9,10 . Biorąc pod uwagę energochłonny charakter naprawy i jej skrajną wrażliwość na środowisko wewnętrzne, zmiany w metabolizmie ogólnoustrojowym i stanach fizjologicznych — takie jak podwyższony stres oksydacyjny, zaburzenia odporności czy zaburzenia mikrokrążenia — mogą zakłócać normalny cykl naprawy w wielu punktach, prowadząc do przedłużającego się stanu zapalnego, niewystarczającej regeneracji i nieprawidłowej przebudowy 9,11,12,13 ^,14,15.

Dostarczanie tlenu jest kluczowym czynnikiem ograniczającym procesy naprawy ran, uczestnicząc w metabolizmie energii oraz migracji/proliferacji komórek, a także modulując angiogenezę i odpowiedzi zapalne poprzez szlaki sygnalizacyjne^na niedotlenienie 16,17,18. Przejściowa hipoksja we wczesnej fazie rany stabilizuje czynnik indukujący hipoksję i inicjuje adaptacyjne programy naprawcze. Jednak gdy hipoksja staje się nadmierna lub uporczywa, choć sygnały angiogenezy mogą być kompensacyjne podwyższone, mogą nie przełożyć się na skuteczną rekonstrukcję mikronaczyniową. Tymczasem zamiany fenotypów makrofagów i regresja zapalna stają się bardziej podatne na zaburzenia równowagi, tworząc błędne koło "niedoboru niedotlenienia-zapalenia-rewaskularyzacji"19,20,21,22^. Jest to szczególnie istotne w środowiskach na dużych wysokościach: obniżone ciśnienie atmosferyczne obniża ciśnienie cząstkowe tlenu wdechowego, wywołując utrzymującą się hipoksję, która zwiększa ryzyko upośledzenia gojenia się ran i powikłań związanych z infekcją⁽23,24,25,26).

Ekspozycja na duże wysokości wywołuje u ludzi wyraźną reakcję stresową niedotlenioną²⁷. Środowiska na dużych wysokościach mogą prowadzić do utrzymującej się hipoksji tkanek, niewystarczającej perfuzji oraz reakcji zapalnych w miejscach ran²⁸. Te zmiany patofizjologiczne mogą utrudniać proces gojenia poprzez sprzyjanie nadmiernej reaktywności tlenu, aktywację proteaz i indukowanie starzenia komórkowego, jednocześnie zakłócając funkcjonowanie mezenchymalnych komórek macierzystych^29,30. Badania bezpośrednio oceniające wpływ ekspozycji na duże wysokości na gojenie ran skóry u ludzi pozostają ograniczone. Dlatego wykorzystanie hipobaricznych modeli hipoksycznych zwierząt może pomóc zweryfikować wpływ czynników związanych z wysokością na naprawę ran.

Poprzednie modele zwierzęce na stałych wysokościach zgłaszały opóźnienie gojenia ran; jednak efekty zależne od wysokości, próg bezpieczeństwa przy długotrwałej ekspozycji na warunki hipobaryczne oraz bezpośrednie dowody na miejscową hipoksję skórną pozostają niejasne²⁶. Ponadto brakuje systematycznej oceny zaburzeń leczenia, co ograniczyło badania nad mechanizmami leżącymi u podstaw oraz identyfikacją potencjalnych celów interwencji³¹. W tym badaniu opracowaliśmy i wstępnie zweryfikowaliśmy model rany skórnej oparty na systemie kontroli hipobarycznej, mającym na celu symulację hipobarycznej hipoksii na dużych wysokościach w warunkach kontrolowanych. Stosując strategię stopniowo symulowanej ekspozycji na wysokość, najpierw zdefiniowaliśmy marginesy bezpieczeństwa dla długotrwałej ekspozycji hipobarycznej i oceniliśmy biologiczne skutki hipobarycznej hipoksji za pomocą wskaźników systemowych. Co istotne, potwierdziliśmy in vivo, że środowisko hipobaryczne rzeczywiście powodowało lokalne ograniczenia dostarczania tlenu w skórę. Następnie wykazaliśmy, że długotrwała hipobaryczna hipoksja opóźnia zamknięcie rany w zależności od wysokości, towarzyszą im zmiany histologiczne i nieprawidłowości kluczowych szlaków. Ogólnie rzecz biorąc, to badanie opracowało i wstępnie zweryfikowało platformę modelu zwierzęcego dla przewlekłych ran związanych z hipoksją na dużych wysokościach, umożliwiając wyjaśnienie mechanizmów i systematyczną ocenę kolejnych strategii terapeutycznych³².

Protokół

Wszystkie procedury eksperymentalne z udziałem zwierząt zostały przeanalizowane i zatwierdzone przez komisje etyczne Uniwersytetu Nauk Elektronicznych i Technologii Chin (nr 106142025091534170) oraz Wojskowego Uniwersytetu Medycznego (nr AMUWEC20265509). Graficzny workflow dla projektowania i analizy eksperymentów w tym badaniu przedstawiono na Rysunku 1. Dodatkowo, odczynniki i sprzęt użyte w tym badaniu są wymienione w Tabeli Materiałów.

Zwierzęta doświadczalne i oświadczenie etyczne
W badaniu wykorzystano samce szczurów Sprague-Dawley (SD), zakupione od Chengdu Dashuo Laboratory Animal Co., Ltd., Chiny. Wszystkie zwierzęta przeszły 7-dniowy okres aklimatyzacji w standardowych warunkach przed eksperymentami.

Kryteria włączenia i wykluczenia
Kryteria włączenia zwierząt były następujące: samce szczurów SD, 6–8 tygodni wieku, masa ciała 200–250 g, wyglądające zdrowo i wykazujące normalne zachowania, wolne od zmian skórnych lub infekcji.

Kryteria wykluczenia zwierząt były następujące: rany wykazujące wyraźne zakażenie po modelowaniu ran; rany z niestandardowym gojeniem lub rozcięciami; śmierć podczas eksperymentu lub przypadkowa śmierć spowodowana znieczuleniem.

Kryteria wykluczenia punktów danych były następujące: obrazy ran z rozległym strupkiem, zatkaniem włosów lub nierównomiernym oświetleniem; obrazy laserowego obrazowania z kontrastem plamkowym (LSCI) pokazujące artefakty ruchu; przekroje tkanek wykazujące widoczne zmarszczki, fragmenty lub brakujące obszary docelowe; próbki surowicy wykazujące wyraźną hemolizę; Obrazy immunofluorescencji (IF) lub immunohistochemii (IHC) z nadmierną ekspozycją lub nieprawidłową lokalizacją przeciwciał

Obsługa wyłączeń:
Dla wszystkich wykluczonych zwierząt lub punktów danych poprawne dane zostały ponownie uzyskane w ramach eksperymentów uzupełniających, aby zapewnić, że ostateczna prawidłowa wielkość próby dla każdej grupy wynosiła N ≥ 3 dla wszystkich analiz końcowych.

System kontroli hipobarycznej i symulowane środowisko hipoksji na dużych wysokościach
Symulowane środowisko hipoksyczne na dużych wysokościach zostało ustanowione za pomocą systemu kontroli hipobarycznej. System ten pozwala na precyzyjną regulację ciśnienia powietrza w kabinie, aby odtworzyć ciśnienie atmosferyczne odpowiadające różnym wysokościom, obniżając tym samym ciśnienie parcjalne tlenu i indukując kontrolowaną ekspozycję hipoksyjną (Rysunek 2A).

Ciśnienie w kabinie zostało dostosowane do symulacji wysokości 3000 m, 4000 m, 5000 m, 6000 m, 7000 m i 8000 m, a szczegółowe parametry przedstawiono w Tabeli 1. Przez cały eksperyment szczury SD były trzymane w grupach zgodnie z ich przydziałem doświadczalnym. Podczas pracy w kabinie nieustannie monitorowano ciśnienie wewnętrzne, temperaturę i wilgotność, aby zapewnić, że poza ciśnieniem wszystkie warunki środowiskowe pozostają porównywalne do standardowych obudów laboratoryjnych. Warunki mieszkaniowe utrzymywały temperaturę 22–24 °C, wilgotność względną 50%–60%, cykl światła i ciemności trwające 12 godzin, zapewniając bezpłatny dostęp do standardowego jedzenia i wody pitnej.

Ocena bezpieczeństwa ekspozycji hipobarycznej oraz analiza przeżycia
Aby ocenić marginesy bezpieczeństwa dla długotrwałej ekspozycji hipobarycznej, szczury zostały indywidualnie ponumerowane i losowo przypisane do grup eksperymentalnych za pomocą komputerowo generowanej sekwencji liczb losowych (funkcja RAND w Excelu). Przydział został przeprowadzony przez badacza niezaangażowanego w późniejszą opiekę nad zwierzętami, zbieranie danych ani ocenę wyników. Na podstawie referencyjnych badań na zwierzętach dotyczących ekspozycji na gradienty wysokości, wielkość próby dla każdej grupy została ustalona na 12³³. Szczury podzielono na normoksyjne grupy kontrolne (500 m n.p.m.) oraz symulowane grupy wysokościowe na 3000 m, 4000 m, 5000 m, 6000 m, 7000 m i 8000 m. Szczury z każdej grupy były nieprzerwanie trzymane w swoich środowiskach przez 30 dni. Co 2 dni system kontroli hipobarycznej jest na krótko przywracany do poziomu morza na 30 minut, aby umożliwić czyszczenie klatki oraz dostarczanie jedzenia i wody. Podczas dekompresji i rekompresji tempo zmienności ciśnienia utrzymuje się na poziomie około 300 m/min, aby zminimalizować ryzyko barotraumy. W tym okresie codziennie obserwowano i rejestrowano ogólny stan wszystkich szczurów oraz ewentualne zdarzenia śmiertelne. Krzywe przeżycia zostały wykreślone metodą Kaplana-Meiera, a testy logaritmowej rangi porównano różnice przeżywalności między grupami.

Wykrywanie markerów związanych ze stresem oksydacyjnym w surowicy
W 21. dniu ekspozycji hipobarycznej pobrano próbki krwi żylnej od szczurów pod narkozą. Po stanie w temperaturze pokojowej surowica była rozdzielana przez wirówkę (1 000 × g przez 15 minut w 4 °C) i przechowywana w temperaturze -80 °C do dalszego użycia. Poziomy dehydrogenazy mleczanowej (LDH), malondialdehydu (MDA) oraz dysmutazy nadtlenkowej (SOD) były mierzone za pomocą odpowiednich zestawów do analiz.

Ocena schorzeń hipoksycznych w tkance skóry
Zestaw do wykrywania hipoksji został użyty do oceny hipoksji tkanek skóry. Krótko mówiąc, w dniach 4 i 7 ekspozycji hipobarycznej szczury były dookołootrzewnie wstrzykiwane pimozydem (60 mg/kg); szczury zostały uśpione 1 godzinę po wstrzyknięciu, a z tyłu pobrano tkankę skórną do analizy. Szczegółowa procedura eutanazji wygląda następująco: Zgodnie z wytycznymi Amerykańskiego Stowarzyszenia Medycznych Weterynarji dotyczącymi eutanazji, zwierzę zostało umieszczone w komorze indukcyjnej i indukowane znieczuleniem przy użyciu tlenu zawierającego 4–5% izofluranu. Po utracie przytomności stężenie izofluranu jest zmniejszane do 2–3% i utrzymywane przez co najmniej 10 minut. Przed wykonaniem zwichnięcia szyjki jako metody potwierdzającej należy potwierdzić, że tętno i oddychanie ustały. Próbki tkanek były krioprezerwowane w ciekłym azocie i przechowywane w temperaturze -80 °C do dalszego użytku. Preparaty przygotowywano za pomocą mikrotomu kriostatu. Wykonano barwienie IF w celu oznaczania obszarów niedotlenionych w tkance.

Wszystkie obrazy fluorescencyjne zostały wykonane za pomocą zautomatyzowanego skanera slajdów. Ustawienia parametrów fluorescencji były następujące: DAPI (długość fali wzbudzenia 365 nm ± 10 nm, długość fali emisyjnej 440 nm ± 40 nm), Cy3 (długość fali wzbudzenia 542–566 nm, długość fali emisyjnej 579–611 nm) oraz Cy5 (długość fali wzbudzenia 628 nm, długość fali emisyjnej 692 nm). Sygnały hipoksji były analizowane ilościowo za pomocą oprogramowania ImageJ.

Model rany skórnej o pełnej grubości u szczurów
Aby ocenić zmiany w gojeniu ran skórnych w długotrwałych warunkach hipobarycznych, szczury najpierw grupowano i przystosowano do odpowiednich środowisk przed modelowaniem ran. Szczury były indywidualnie numerowane i losowo przypisywane do grupy kontrolnej normoksycznej lub grupy ekspozycji hipobarycznej, symulując wysokości 3000 m, 4000 m i 5000 m za pomocą komputerowo generowanej sekwencji liczb losowych (funkcja RAND w Excelu). Randomizację przeprowadził badacz, który nie brał udziału w późniejszym tworzeniu rany, opiece pooperacyjnej ani ocenie wyniku. Szczegółowe parametry dla każdej grupy są następujące: grupa kontrolna normoksyczna znajdowała się na wysokości 500 m n.p.m. (ciśnienie atmosferyczne: 101 kPa, ciśnienie częściowe tlenu: 21 kPa); grupa 3000 m (70,1 kPa, 14,7 kPa); grupa 4000 m (61,6 kPa, 13,1 kPa); oraz grupę 5000 m (54 kPa, 11,3 kPa).

Po 7-dniowym okresie adaptacji szczury SD były znieczulone i utrzymywane pod narkozą poprzez wdychanie 2% izofluranu. Równocześnie do wyznaczonego miejsca operacji podaje się miejscową infiltrację 5% lidokainy zawierającej adrenalinę (współczynnik rozcieńczenia: 1:100 000), aby zapewnić okołooperacyjne zmartwienie i hemostazę. Za pomocą dziurkacza biopsyjnego (z okrągłym ostrzem o średnicy 10 mm u podstawy), wykonaj nacięcie skórne. Przyłóż cios biopsyjnym do grzbietowej skóry szczura, a następnie delikatnie obróć ją tak, aby okrągłe ostrze stopniowo przecięło skórę, aż dotrze do powierzchownej powięzi podskórnej. Po usunięciu wyciska biopsyjnego tworzy się regularne, okrągłe nacięcie skórne o średnicy około 10 mm.

Po powstaniu rany szczury z każdej grupy były wracane i utrzymywane w swoich pierwotnych warunkach aż do zakończenia eksperymentu, co zapewnia, że cały proces gojenia rany przebiega w warunkach ustalonych warunków tlenowych.

Makroocena procesu gojenia się ran
Zdjęcia rany wykonano w dniach 0, 2, 4, 6, 8, 10, 12 i 14 po ranieniu, przy jednolitym oświetleniu i na stałej odległości obrazowania. Powierzchnię rany zmierzono za pomocą Obrazu J. Krótko mówiąc, obrazy ran uzyskane w każdym momencie czasu były importowane do Obrazu J, kalibrowane zgodnie z paskiem skali, a marginesy rany były ręcznie wyznaczane, aby określić powierzchnię rany³⁴. Gojenje ran obliczono następująco: Gojenje rany (%) = (Początkowa powierzchnia rany − Obecna powierzchnia rany)/Początkowa powierzchnia rany × 100%.

Ocena mikrocyrkulacji ran
Siódmego dnia gojenia rany oceniono mikrokrążenie krwi w okolicy rany za pomocą systemu LSCI. Przed badaniem szczury były znieczulone przez inhalację z użyciem 2% izofluranu i przymocowane do stołu operacyjnego o kontrolowanej temperaturze, aby utrzymać temperaturę ciała. Obszar rany grzbietowej był całkowicie odsłonięty, a sonda laserowa plamkowa umieszczona pionowo około 20 cm nad raną. Moc sondy ustawiono na 110 mW, częstotliwość próbkowania na 30 Hz, a czas naświetlenia na 3 sekundy. W ciemnych warunkach wykonaj pseudokolorowy obraz przepływu krwi w kształcie perfuzji w okolicy rany. Użyj oprogramowania LSCI do ręcznego wyznaczania obszaru rany na pseudokolorowym obrazie przepływu krwi perfuzyjnej; oprogramowanie automatycznie oblicza wartość perfuzji przepływu krwi dla tego obszaru przez okres 3 sekund (w dowolnych jednostkach [A.U.]). Na koniec wyeksportuj wartości perfuzji do odpowiedniego oprogramowania do wykresów.

Analiza barwienia histologicznego i przebudowy kolagenu
Zwierzęta były uśpione w wyznaczonych punktach czasowych, a nienaruszone tkanki skóry i otaczające je rany były pobierane, naprawiane, odwodniane, osadzane w parafinie i sekcjonowane. Hematoksylyna i eozyna (HE): używane do oceny szerokości rany, zakresu reepitelizacji oraz zregenerowanej grubości naskórka; barwienie trójchromowe Masson: stosowane do oceny osadzania włókien kolagenowych i obliczania frakcji objętościowej kolagenu; Zabarwienie Sirius Red: stosowane do rozróżnienia kolagenu typu I (COL I) i typu III (COL III) pod mikroskopią spolaryzowanym oraz obliczania stosunku COL I/COL III.

Barwienie immunohistochemiczne
Sekcje parafinowe przeszły odwoskowanie, nawodnienie i pobranie antygenów przed barwieniem IHC lub IF. Przeciwciała pierwotne inkubowano przez noc w temperaturze 4 °C, po czym dodano odpowiadające im przeciwciała wtórne. Szczegółowe informacje o przeciwciałach i odpowiadającym im rozcieńczeniu znajdują się w Tabeli Materiałów. Sekcje IHC opracowano za pomocą DAB, natomiast sekcje IF wykorzystywały fluorescencyjne przeciwciała wtórne z DAPI do przeciwbarwienia dla jąder^35,36. Wszystkie obrazy zostały wykonane w identycznych warunkach i zweryfikowane za pomocą oprogramowania ImageJ.

Analiza statystyczna
Wszystkie dane są przedstawione jako średnie ± odchylenia standardowe. Analizy statystyczne przeprowadzono za pomocą oprogramowania GraphPad Prism. Do porównań między wieloma grupami w jednym momencie czasowym zastosowano jednokierunkową analizę wariancji (ANOVA), a gdy wykryto istotną ogólną różnicę, test wielokrotnych porównań Tukeya był stosowany w kolejnych analizach międzygrupowych. Dla danych o gojeniu ran ocenianych na przestrzeni wielu punktów czasowych przeprowadzono dwukierunkową metodę ANOVA, uwzględniając grupę leczenia i czas jako niezależne czynniki do oceny głównych efektów oraz ich interakcji. Analizy post-hoc również przeprowadzono za pomocą testu porównawczego Tukey'a. Aby dokładniej ocenić moc statystyczną, przeprowadzono po-hoc analizę mocy w oprogramowaniu G*Power na podstawie głównego punktu końcowego (gojenie rany w dniu 14).

Analiza przeżycia wykorzystywała metodę Kaplana-Meiera do wyznaczania krzywych przeżycia, a testy logaritmicznego rankingu służyły do porównania różnic przeżywalności między grupami. Dla porównań parowych między wieloma grupami zastosowano korektę Bonferroniego w celu kontrolowania ryzyka błędów typu I wynikających z wielu porównań. Wszystkie testy statystyczne były dwustronne, przy czym P < 0,05 uznano za istotne statystycznie.

Wszystkie oceny wyników, w tym pomiary powierzchni ran, analizy ilościowe histologiczne i immunohistochemiczne oraz analizy LSCI, były przeprowadzane przez jednego badacza, który nie był świadomy przydziałów do grup badawczych.

Wyniki

Walidacja marginesów bezpieczeństwa dla utrzymującej się hipoksji wywołanej niskim ciśnieniem
Analiza przeżycia Kaplan–Meier wykazała stopniowe przesuwanie krzywych przeżywalności wraz ze wzrostem symulowanej wysokości, a zdarzenia śmiertelności po raz pierwszy zaobserwowano w grupie 6000 m (rysunek 2B). Porównania parowe z korektą Bonferroniego nie wykazały statystycznie istotnych różnic w wskaźnikach przeżycia między grupą kontrolną a grupami 6000 m do 8000 m. Do 30. ...

Dyskusja

Warunki na dużych wysokościach utrudniają proces gojenia się ran, wywołując niedotlenienie tkanek, zmniejszoną perfuzję krwi oraz reakcje zapalne, co z kolei sprzyja nadmiernej produkcji reaktywnych form tlenu, aktywacji proteazy, starzeniu komórkowemu oraz dysfunkcji komórek macierzystych mezenchymu 27,28,29,30 . Biorąc pod uwagę obecne ograniczenia badań nad skutkami dużej wysokości na ludzia...

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Automatyczny skaner slajdów	Olympus	VS200	Skanowanie sekcji tkanek
Albumina surowicy bydła (BSA)	Servicebio	GC305010	Odczynnik blokujący dla IHC/IF
Przeciwciało CD206	Proteintech	18704-1-AP	Wykrywanie makrofagów M2 (rozcieńczenie 1:200)
Przeciwciało CD31	Abcam	ab182981	Wykrywanie gęstości mikronaczyń (rozcieńczenie 1:800)
Przeciwciało CD86	HuaBio	ER1906-01	Wykrywanie makrofagów M1 (rozcieńczenie 1:200)
Przeciwciało CK19	HuaBio	ET1601-6	Ocena reepitelizacji (rozcieńczenie 1:200)
Zestaw do podłoża DAB	ZSGB-BIO	ZLI-9018	Podłoże chromogeniczne do barwienia IHC
IgG antykróliczy koziczy IgG sprzężony z FITC	Servicebio	GB22303	Fluorescencyjne przeciwciało wtórne przeciwciało przeciw IF (rozcieńczenie 1:100)
G*Power	Uniwersytet w Duisburg-Essen, Niemcy	www.gpower.hhu.de	Obliczanie mocy statystycznej
Oprogramowanie GraphPad Prism	Oprogramowanie GraphPad	https://www.graphpad.com/	Analiza statystyczna i generowanie grafów
Roztwór barwienia hematoksylyny	J& K Scientific	LM10N13	H& Barwienie E
HIF-1α Przeciwciało	Bioss	BS-0737R	Wykrywanie sygnalizacji związanej z hipoksją (rozcieńczenie 1:100)
IgG antykrólikowy antykróliczy sprzężony z HRP	Servicebio	GB23303	Przeciwciało wtórne na IHC (rozcieńczenie 1:100)
System kontroli hipobarycznej (Hypobaric)	Shanghai Yuyan Instruments Co., Ltd.	LP-1500	Wykorzystywane do symulacji stopniowanej hipobarycznej hipoksii na dużych wysokościach
Zestaw Hypoxyprobe-1	Hypoxyprobe Inc.	HP1-100	Wykorzystywane do wykrywania hipoksji in vivo
Zestaw wzmacniający sygnału IF555 Tyramide	Servicebio	G1233	Stosowane do wzmocnienia sygnału fluorescencyjnego
Przeciwciało IL-10	HuaBio	HA722032	Wykrywanie przeciwzapalnej cytokiny (rozcieńczenie 1:100)
IL-1β Przeciwciało	HuaBio	HA723965	Wykrywanie cytokiny prozapalnej (rozcieńczenie 1:100)
Oprogramowanie ImageJ	Narodowe Instytuty Zdrowia (NIH), USA	https://imagej.net/ij/download.html	Kwantyfikacja obrazów
Izofluran	RWD Life Science Co., Ltd.	R510-22-16
Przeciwciało Ki-67	HuaBio	HA721115	Wykrywanie proliferacji keratinocytów (rozcieńczenie 1:400)
Laserowy system obrazowania przepływu krwi z plamkami;	RWD Life Science Co., Ltd.	RFLSI ZW	Ocena  Perfuzja krwi
Zestaw do testowania LDH	Instytut Bioinżynierii Jiancheng w Nankinie	A005-1-2	Pomiar LDH w surowicy
Masson' S Trichrome Kit do barwienia	Servicebio	G1006-100ML	Analiza osadzania kolagenu
Zestaw do testowania MDA	Instytut Bioinżynierii Jiancheng w Nankinie	A003-1-1	Ocena peroksydacji lipidów
Zestaw do czerwonego plamowania Siriusa	Servicebio	G1078-100ML	Różnicowanie kolagenu I/III
Zestaw do testowania OD	Instytut Bioinżynierii Jiancheng w Nankinie	A001-1-1	Pomiar aktywności SOD w surowicy
TNF-α Przeciwciało	HuaBio	ER65189	Wykrywanie cytokiny prozapalnej (rozcieńczenie 1:200)
Przeciwciało VEGF-A	HuaBio	ET1604-28	Wykrywanie sygnalizacji związanej z angiogenezą (rozcieńczenie 1:200)