Artykuł metodologiczny

Wywiad: Wycięcie DNA wirusa HIV-1 przy użyciu wyewoluowanej rekombinazy

DOI:

10.3791/793

16 czerwca 2008

W tym artykule

Podsumowanie

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Obecne strategie HIV-1 działają w celu zahamowania cyklu życia wirusa, ale nie eliminują skutecznie infekcji. Tutaj pokazujemy, że zmodyfikowana rekombinaza może skutecznie wycinać zintegrowane prowirusowe DNA HIV-1 z genomu zakażonych komórek.

Streszczenie

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

HIV-1 integruje się z chromosomem gospodarza zakażonych komórek i utrzymuje się jako prowirus otoczony długimi końcowymi powtórzeniami. Obecne strategie leczenia są ukierunkowane przede wszystkim na enzymy wirusa lub fuzję wirus-komórka, hamując cykl życiowy wirusa bez zwalczania infekcji. Ponieważ zintegrowane prowirusy nie są celem tych metod, mogą pojawić się nowe oporne szczepy HIV-1. W tym miejscu informujemy, że zmodyfikowana rekombinaza Tre (patrz Ewolucja molekularna rekombinazy Tre, Buchholz, F., Instytut Biologii Komórki i Genetyki im. Maxa Plancka, Drezno) skutecznie wycina zintegrowane DNA prowirusa HIV-1 z genomu zakażonych komórek. Wyprodukowaliśmy loxLTR zawierający pseudotypy wirusa i zakażone komórki HeLa, aby zbadać, czy rekombinaza Tre może wyciąć prowirusa z genomu komórek ludzkich zakażonych wirusem HIV-1. Linia komórkowa uwalniająca cząsteczki wirusa została sklonowana i transfekowana plazmidem eksprymującym Tre lub wektorem kontroli rodzicielskiej. Monitorowano aktywność rekombinazy i produkcję wirusa. Wszystkie testy wykazały skuteczną delecję prowirusa z zakażonych komórek bez widocznych efektów cytotoksycznych. Wyniki te służą jako dowód zasadniczy, że możliwe jest wyewoluowanie rekombinazy w celu specyficznego ukierunkowania na LTR HIV-1 i że ta rekombinaza jest zdolna do wycięcia prowirusa HIV-1 z genomu komórek ludzkich zakażonych wirusem HIV-1.

Zanim jednak opracowana rekombinaza będzie mogła wejść na arenę terapeutyczną, konieczne jest pokonanie istotnych przeszkód. Do najważniejszych problemów, z którymi się borykamy, należą skuteczne i bezpieczne dostarczanie do docelowych komórek oraz brak skutków ubocznych.

Protokół

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Proszę zobaczyć powiązane filmy zatytułowane Principles of Site-Specific Recombinase (SSR) Technology and

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Rekombinaza Tremetoda ewolucji molekularnejrekombinaza specyficzna dla LTRintegracja genomu prowirusainfekcja kom rek HeLadostarczanie wektora lentiwirusowegouwalnianie cz steczek wirusaanaliza efektu cytotoksycznegoterapia macierzystymi kom rkami krwiotw rczymi

Powiązane artykuły