W tym filmie pokazano przygotowanie reagregowanych kultur grasicy poddanych działaniu 2-dGuo.
Method Article
W tym filmie pokazano przygotowanie reagregowanych kultur grasicy poddanych działaniu 2-dGuo.
Komórki zrębu w tkankach limfoidalnych są zorganizowane w trójwymiarowe struktury, które stanowią rusztowanie, które uważa się za kontrolujące migrację i rozwój komórek hemopoeitycznych. Co ważne, utrzymanie tej trójwymiarowej organizacji wydaje się mieć kluczowe znaczenie dla prawidłowego funkcjonowania komórek zrębu, przy czym często okazuje się, że dwuwymiarowe hodowle jednowarstwowe są w stanie wspierać tylko pojedyncze fragmenty funkcji tkanki limfatycznej. W grasicy złożone sieci komórek nabłonka korowego i rdzeniastego działają jak rama, która kontroluje rekrutację, proliferację, różnicowanie i przeżycie limfoidalnych komórek progenitorowych, gdy przechodzą one wieloetapowy proces rozwoju wewnątrztymicznych komórek T. Zrozumienie funkcjonalnej roli poszczególnych przedziałów zrębu w grasicy jest niezbędne do określenia, w jaki sposób grasica narzuca dyskryminację samo/nie-ja. W tym miejscu opisujemy technikę, w której wykorzystujemy plastyczność tkanek płodu do ponownego łączenia się w nienaruszone trójwymiarowe struktury in vitro, po ich enzymatycznej dezagregacji. Dysocjacja płatów grasicy płodu na heterogeniczne mieszaniny komórkowe, a następnie ich rozdzielenie na poszczególne składniki komórkowe, jest następnie łączona z ponowną asocjacją in vitro tych pożądanych typów komórek w trójwymiarowe struktury reagregacyjne w określonych proporcjach, dając w ten sposób możliwość zbadania poszczególnych aspektów rozwoju komórek T w określonych warunkach komórkowych. (Ten artykuł jest oparty na pracy opublikowanej po raz pierwszy w Methods in Molecular Biology 2007, tom 380, strony 185-196).
Więcej informacji na temat przygotowania kultur grasicy reggregate można znaleźć na stronie Protokoły Springera.
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionA correction was made to: Reaggregate Thymus Cultures. A revised abstract was republished due to a publisher error. The abstract was corrected to:
Stromal cells within lymphoid tissues are organized into three-dimensional structures that provide a scaffold that is thought to control the migration and development of haemopoeitic cells. Importantly, the maintenance of this three-dimensional organization appears to be critical for normal stromal cell function, with two-dimensional monolayer cultures often being shown to be capable of supporting only individual fragments of lymphoid tissue function. In the thymus, complex networks of cortical and medullary epithelial cells act as a framework that controls the recruitment, proliferation, differentiation and survival of lymphoid progenitors as they undergo the multi-stage process of intrathymic T-cell development. Understanding the functional role of individual stromal compartments in the thymus is essential in determining how the thymus imposes self/non-self discrimination. Here we describe a technique in which we exploit the plasticity of fetal tissues to re-associate into intact three-dimensional structures in vitro, following their enzymatic disaggregation. The dissociation of fetal thymus lobes into heterogeneous cellular mixtures, followed by their separation into individual cellular components, is then combined with the in vitro re-association of these desired cell types into three-dimensional reaggregate structures at defined ratios, thereby providing an opportunity to investigate particular aspects of T-cell development under defined cellular conditions. (This article is based on work first reported Methods in Molecular Biology 2007, Vol. 380 pages 185-196).
from
In the thymus, immature CD4+8+ thymocytes expressing randomly rearranged T-cell receptor α- and b-chain genes undergo positive and negative selection events based on their ability to recognize self-peptide/major histocompatibility complex (MHC) molecules expressed by thymic stromal cells. In vivo analysis of the role of thymic stromal cells during intrathymic selection is made difficult by the cellular complexity of the thymic microenvironment in the steady-state adult thymus, and by the lack of appropriate targeting strategies to manipulate gene expression in particular thymic stromal compartments. We have shown that the thymic microenvironment can be readily manipulated in vitro through the use of reaggregate thymus organ cultures, which allow the preparation of three-dimensional thymus lobes from defined stromal and lymphoid cells. Although other in vitro systems support some aspects of T-cell development, reaggregate thymus organ culture remains the only in vitro system able to support efficient MHC class I and II-mediated thymocyte selection events, and so can be used as an effective tool to study the cellular and molecular regulation of positive and negative selection in the thymus.