Wykonywanie pipet krosowych i ostrych elektrod za pomocą programowalnego ściągacza

Summary

Ten film pokazuje, jak używać programowalnego ściągacza do tworzenia pipet do łat i ostrych elektrod do elektrofizjologii. Ta sama procedura może być stosowana do wytwarzania różnych szklanych narzędzi, w tym igieł iniekcyjnych.

Abstract

Szklane mikroelektrody (zwane również pipetami) są koniem pociągowym elektrofizjologii od dziesięcioleci. Obecnie takie pipety są wykonane ze szklanych kapilar za pomocą programowalnego ściągacza. Takie instrumenty podgrzewają kapilarę za pomocą metalowego żarnika lub lasera i wyciągają szkło za pomocą grawitacji, silnika lub obu. Pipety do zapisu patch-clamp są formowane przy użyciu tylko ciepła i grawitacji, podczas gdy ostre elektrody do rejestracji wewnątrzkomórkowej wykorzystują kombinację ciepła, grawitacji i silnika. Procedura stosowana do wytwarzania wewnątrzkomórkowych pipet rejestrujących jest podobna do tej stosowanej do wytwarzania igieł iniekcyjnych do różnych zastosowań, w tym wstrzykiwania cRNA do oocytów Xenopus. Ogólnie rzecz biorąc, szkło kapilarne o średnicy <1,2 mm służy do produkcji pipet do rejestracji za pomocą zacisków krosowych, podczas gdy węższe szkło jest używane do zapisu wewnątrzkomórkowego (średnica zewnętrzna = 1,0 mm). Dla każdego narzędzia ściągacz jest zaprogramowany nieco inaczej. Ten film pokazuje, jak wykonać oba rodzaje pipet rejestrujących przy użyciu wstępnie ustawionych programów ściągacza.

Protocol

Ciągnięcie pipet

Używając ściągacza do mikroelektrod, takiego jak Sutter P-97 Flaming/Brown, wyciągnij zestaw około 10-20 pipet.

1. Wybierz swoją szklankę kapilarną. Stosujemy kapilary borokrzemianowe (Sutter BF150-110-10, średnica zewnętrzna 1,5 mm, średnica wewnętrzna 1,1 mm, długość 10 cm). Przechowuj szkło ostrożnie, aby pozostało czyste i wolne od kurzu.
2. Zaprojektuj program ściągania. Używamy 5-stopniowego programu, z opadającym ciepłem i prędkością na każdym kroku oraz małym pociągnięciem na ostatnim kroku. Książka kucharska pipet firmy Sutter jest doskonałym źródłem informacji przy opracowywaniu odpowiednich programó....

Discussion

Przedstawiony tutaj protokół jest w codziennym użyciu w laboratoriach elektrofizjologii i jest również używany do produkcji igieł iniekcyjnych dla komórek i zwierząt. Dzięki programowalnemu ściągaczowi łatwo jest wykonać pipety do różnych zastosowań.  Przy uważności i staranności filament na Twoim ściągaczu wytrzyma rok lub dłużej.  Powodzenia w eksperymentach.

....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Ściągacz do mikropipet	Instrument	Sutter Instrument Co.	P-97	Lub podobny instrument (np. Sutter P-87 lub P-2000)
Odczynnik do kapilar		szklanych Sutter Instrument Co.	BF150-86-10	Lub podobne szkło kapilarne. Aby ułatwić napełnianie pipety, należy użyć kapilary z żarnikiem szklanym.