Źródło: Laboratoria Margaret Workman i Kimberly Frye - Depaul University
W tym eksperymencie materiał celulozowy (taki jak łodygi kukurydzy, liście, t…
1. Przygotowanie próbki
2. Obróbka wstępna
3. Trawienie enzymatyczne
4. Fermentacja


Zaloguj się lub , aby uzyskać dostęp do pełnej treści. Dowiedz się więcej o dostępie Twojej instytucji do treści JoVE tutaj
Biopaliwa to paliwa pochodzące z materii biologicznej, takiej jak rośliny. Biopaliwa stanowią alternatywę dla paliw kopalnych, ponieważ można je pozyskiwać z upraw w wielu częściach świata. Dodatkowo spalają się czyściej, zmniejszając w ten sposób emisję gazów cieplarnianych.
Jednym z najczęściej stosowanych biopaliw jest etanol pochodzący z biomasy roślinnej, zazwyczaj trzciny cukrowej i kukurydzy. W Stanach Zjednoczonych większość biopaliw etanolowych jest produkowana z kukurydzy.
Wykorzystanie upraw kukurydzy jako surowca jest kontrowersyjne, ponieważ kukurydza jest energochłonna w uprawie, zużywa dużą ilość nawozów, a jej stosowanie jako surowca usuwa dużą ilość kukurydzy z pożywienia, zwłaszcza paszy dla zwierząt gospodarskich. W rezultacie wzrasta wykorzystanie innych materiałów roślinnych lub materiałów lignocelulozowych, takich jak trawa, liście, papier i niejadalne części upraw.
W tym filmie omówiono podstawy pozyskiwania etanolu z materiału lignocelulozowego i zademonstrowano produkcję etanolu z surowców lignocelulozowych w laboratorium.
Biomasa lignocelulozowa odnosi się do materii roślinnej ze zdrewniałymi ścianami komórkowymi. Ten rodzaj materii roślinnej jest jednym z najobficiej występujących surowców, ponieważ często jest produktem odpadowym rolnictwa i produkcji.
Ściany komórkowe składają się z silnie usieciowanego polimeru, ligniny i dwóch węglowodanów złożonych, hemicelulozy i celulozy. Celuloza jest głównym źródłem cukrów ulegających fermentacji, takich jak glukoza, ale najpierw musi zostać oddzielona od składników ligniny i hemicelulozy.
Pierwszym etapem przetwarzania materiału lignocelulozowego jest drobne zmielenie suchej masy roślinnej na proszek. Zmielony surowiec jest następnie poddawany obróbce wstępnej w celu rozbicia bariery ligniny i hemicelulozy w ścianie komórkowej oraz umożliwienia dostępu do celulozy.
Następnie celuloza jest traktowana enzymami hydrolitycznymi, takimi jak celulaza i hemicelulaza. Hydroliza enzymatyczna rozkłada celulozę na glukozę. Na koniec glukoza jest fermentowana przez drożdże w celu wytworzenia etanolu.
Poniższe doświadczenie demonstruje tę etapową metodę wytwarzania etanolu z biomasy celulozowej poprzez usunięcie ligniny i hemicelulozy, a następnie enzymatyczną obróbkę celulozy i fermentację glukozy w celu wytworzenia etanolu.
W tym eksperymencie etanol będzie produkowany ze słomy kukurydzianej, liści i łodyg roślin kukurydzy. Za pomocą młynka kulowego zmiel surowiec na drobny proszek i upewnij się, że nie pozostały żadne duże kawałki.
Zważ 1 g surowca, umieść go w probówce wirówkowej o pojemności 50 ml i oznacz. Oznaczyć drugą probówkę jako próbkę kontrolną i nie dodawać żadnego surowca. Aby poddać próbki obróbce wstępnej, należy ustawić zlewkę o pojemności 500 ml z około 400 ml wody i doprowadzić do delikatnego wrzenia.
Dodaj 25 ml wody destylowanej do dwóch przygotowanych probówek wirówkowych i luźno je zakryj. Zakręć rurkami, aby wymieszać. Umieść probówki we wrzącej wodzie i upewnij się, że woda z kąpieli nie przecieka do rurek. Gotuj je przez 30 minut, a następnie wyjmij i pozwól im ostygnąć do temperatury pokojowej.
Po ostygnięciu probówek dodaj 1 ml enzymu celulazy do obu probówek. Umieść probówki w inkubatorze na 24 godziny. Po 24 godzinach wyjmij rurki i pozwól im ostygnąć do temperatury pokojowej. Etanol jest wytwarzany z przefermentowanego materiału celulozowego w procesie fermentacji przez drożdże. Aby rozpocząć ten proces, dodaj 1 g aktywnych drożdży do każdej z probówek wirówkowych i zamieszaj, aby wymieszać.
Umieść śluzę powietrzną na probówkach wirówek. Śluza powietrzna umożliwia ucieczkę dwutlenku węgla, który jest wytwarzany podczas fermentacji, dzięki czemu nie rośnie ciśnienie w rurce. Umieścić probówki wirówkowe w stojaku i umieścić w inkubatorze w temperaturze 37 °C. Po zakończeniu fermentacji użyj czujnika etanolu, aby zmierzyć stężenie etanolu w probówkach kontrolnych i probówkach z próbkami.
Aby biopaliwa stały się konkurencyjnym źródłem energii, należy odpowiedzieć na pewne pytania dotyczące struktury i wydajności surowców.
Ważne jest, aby zrozumieć rozmieszczenie ligniny w różnych roślinach, aby można było skutecznie usunąć ligninę. W tym przykładzie rozkład ligniny w ścianach komórkowych roślin analizowano poprzez wycinanie cienkich warstw z łodygi rośliny. Cienkie plasterki zostały następnie zobrazowane za pomocą mikroskopii konfokalnej ze światłem laserowym o długości fali 532 nm, aby stworzyć trójwymiarowe obrazy łodygi rośliny.
Zawartość ligniny oznaczono za pomocą spektroskopii Ramana. Łącząc obrazy konfokalne i widma Ramana, uzyskano trójwymiarową mapę rozkładu ligniny.
Aby zmaksymalizować ilość bioetanolu pochodzącego z surowców roślinnych, należy porównać rodzaje surowców. W tym przykładzie etanol został wyprodukowany z tektury i porównany ze słomą kukurydzianą. Karton został przygotowany w sposób pokazany wcześniej, gdzie zmielony karton poddano obróbce wstępnej, a następnie trawieniu enzymatycznemu w celu oddzielenia ligniny i hemicelulozy od materiału i rozbicia celulozy na glukozę. Wyekstrahowana glukoza była następnie fermentowana przez drożdże w celu wytworzenia etanolu. Tektura okazała się lepszym surowcem niż słoma kukurydziana, ponieważ wytwarzała ponad dwukrotnie większe stężenie etanolu w roztworze.
W Stanach Zjednoczonych zdecydowana większość bioetanolu jest produkowana z kukurydzy. Chociaż produkcja etanolu z kukurydzy jest energochłonna, jest mniej złożona niż produkcja etanolu z biomasy celulozowej.
Aby odejść od surowców kukurydzianych, plony z biomasy celulozowej muszą być lepsze niż z kukurydzy. W tym przykładzie mąka kukurydziana i słoma kukurydziana zostały porównane przy użyciu tej samej procedury, jak pokazano wcześniej.
Mączka kukurydziana wytwarzała wyższe stężenie etanolu niż słoma kukurydziana, co pokazuje, że kukurydza jest nieco lepszym surowcem niż same łodygi kukurydzy. Jednak łodygi kukurydzy i inne surowce celulozowe są bardziej obfite i niedrogie i mogą stanowić realną alternatywę.
Właśnie obejrzałeś Wprowadzenie do biopaliw JoVE. Powinieneś teraz zrozumieć produkcję etanolu z surowców roślinnych i wyzwania związane z tym procesem. Dzięki za oglądanie!
View the full transcript and gain access to JoVE Science Education videos
Q1: What are biofuels and why are they considered an alternative to fossil fuels?
Biofuels are fuels derived from biological matter such as plants and serve as alternatives to fossil fuels because they can be sourced from crops worldwide. They are cleaner burning, reducing greenhouse gas emissions compared to traditional fossil fuels. This makes them an environmentally favorable energy option for reducing carbon footprint.
Q2: Why is cellulosic biomass preferred over corn for ethanol production?
Cellulosic biomass, including corn stalks, leaves, and grasses, is preferred because corn crops are energy intensive to grow, require large quantities of fertilizers, and their use as feedstock removes corn from the food supply. Lignocellulosic materials are abundant waste products from agriculture and manufacturing, making them more sustainable and economical alternatives for ethanol production.
Q3: What are the main components of lignocellulosic plant cell walls?
Lignocellulosic plant cell walls contain three main components: lignin, a highly crosslinked polymer; hemicellulose, a complex carbohydrate; and cellulose, another complex carbohydrate. Cellulose is the primary source of fermentable sugars like glucose, but it must be separated from lignin and hemicellulose before fermentation can occur.
Q4: What are the key steps in converting cellulosic material to ethanol?
The process involves four main steps: grinding dry plant matter into fine powder, pretreating with heat to break down lignin and hemicellulose barriers, treating with hydrolytic enzymes like cellulase to break cellulose into glucose, and fermenting glucose with yeast to produce ethanol. Each step is essential for maximizing ethanol yield from cellulosic feedstocks.
Q5: How does pretreatment improve ethanol production from cellulosic biomass?
Pretreatment, typically involving grinding and heating, breaks down the lignin and hemicellulose barrier in plant cell walls. This process enables access to cellulose, making it available for enzymatic digestion. Without pretreatment, the protective polymer structure prevents enzymes from reaching and breaking down cellulose into fermentable glucose.
Q6: What role do enzymes play in cellulosic ethanol production?
Hydrolytic enzymes, particularly cellulase and hemicellulase, break down cellulose into glucose through enzymatic hydrolysis. These enzymes are applied after pretreatment and work to convert the complex carbohydrate structure into simple sugars that yeast can ferment into ethanol, making enzymatic treatment a critical step in the conversion process.
Q7: How can different cellulosic feedstocks be compared for ethanol production efficiency?
Different feedstocks like cardboard and corn stover can be compared by subjecting them to identical pretreatment, enzymatic digestion, and fermentation procedures, then measuring ethanol concentration. Research shows cardboard produces more than double the ethanol concentration of corn stover. Understanding carbon and nitrogen analysis environmental samples helps optimize feedstock selection for maximum production yield.