Sonikacja Ekstrakcja biomarkerów lipidowych z osadu

1. Zbierz potrzebne materiały

1. Próbki (liście, brud, grzyby, kora, tkanki), zwykle zamrożone, liofilizowane, rozdrobnione i homogenizowane przed ekstrakcją, ekstrahowane w grupach w celu maksymalizacji wydajności. Pobrać trzy próbki.
2. W zależności od wielkości próbki można stosować fiolki o objętości od 4 do 60 ml. Do tego eksperymentu używa się fiolek ze szkła borokrzemianowego (40 ml) i nakrętek bezpiecznych dla rozpuszczalników. Fiolki, pipety ze szkła borokrzemianowego i puszki wagowe należy spalać w temperaturze 550 °C przez 6 godzin, aby zapewnić usunięcie ewentualnych zanieczyszczeń organicznych.
3. Dichlorometan i metanol są powszechne w większości laboratoriów geochemii organicznej. Stosuje się je pojedynczo do płukania narzędzi laboratoryjnych i szkła przed użyciem. Mieszanina dichlorometanu (DCM) z metanolem (MeOH; 9:1) jest stosowana w wielu laboratoriach do wydajnej ekstrakcji biomarkerów o szerokim zakresie polarności. Rozpuszczalniki powinny być wolne od zanieczyszczeń organicznych.
4. Użyj sonikacyjnej łaźni wodnej o temperaturze pokojowej. Szeroka gama rozmiarów sonikatorów i sonikacji z ciepłem lub bez ciepła jest dostępna w głównych sklepach ze sprzętem naukowym.
5. Stojaki na fiolki, które powinny być wodoodporne, zostaną umieszczone w kąpieli sonikacyjnej.
6. Kaptur chemiczny zatwierdzony przez rozpuszczalnik.

2. Przygotowanie próbki

1. Umieść spaloną puszkę wagową na wadze laboratoryjnej, a następnie wytaruj.
2. Przepłukać szpatułkę laboratoryjną rozpuszczalnikiem, a następnie za jej pomocą przenieść odpowiednią masę próbki do szalki wagowej i zapisać masę.
   1. Masa próbki różni się w zależności od zawartości materii organicznej. Stosunkowo chudy materiał materii organicznej (błoto morskie) może wymagać kilku gramów, podczas gdy materiał bogaty w materię organiczną (tkanka liści) może wymagać znacznie mniej.
3. Przenieś cały materiał z formy wagowej do spalonej, wstępnie zważonej i oznaczonej fiolki. Zakręć fiolkę, a następnie wyrzuć formę wagową.
4. Wykonaj kroki 2.1 - 2.3 dla każdej próbki, która ma zostać wyekstrahowana.

3. Ekstrakcja

1. Używając wstępnie spalonej pipety i gruszki, przenieść ~20 ml mieszaniny DCM:MeOH (9:1) do każdej fiolki (fiolka powinna być wypełniona w przybliżeniu do połowy). Uzupełnij fiolki przed przejściem do następnej próbki, aby lotne rozpuszczalniki nie wyparowały.
   1. Lotność DCM i MeOH jest różna. Odparowanie rozpuszczalnika ekstrakcyjnego dzięki niezakorkowanym fiolkom na próbki ma zdolność do zmiany swojej polarności, a tym samym ekstrakcji.
2. Umieścić fiolki z próbkami w wodoodpornym stojaku na fiolki.
3. Sprawdzić, czy poziom wody w kąpieli sonizacyjnej jest tylko na tyle głęboki, aby zanurzyć fiolki z próbkami aż do górnej części rozpuszczalnika ekstrakcyjnego. Zbyt duża ilość wody może spowodować unoszenie się fiolek na wodzie; Zbyt mała ilość wody może uniemożliwić prawidłowe mieszanie próbek.
4. Umieścić stojak na fiolki z znajdującymi się w nim próbkami bezpośrednio do kąpieli sonikacyjnej.
5. Sonikować przez 30 minut w temperaturze pokojowej.
6. Wyjmij stojak na próbki z sonikatora. W przypadku ekstrakcji osadów pozwól mu zastygnąć przez 30 minut, aby umożliwić osiadanie. W przypadku ekstrakcji innego zestawu próbek, należy w tym czasie umieścić w sonikatorze.
7. Wyjmij mieszaninę DCM:MeOH z fiolki ekstrakcyjnej za pomocą wstępnie spalonej pipety i gruszki, a następnie włóż do innej wstępnie zważonej, wstępnie spalonej i oznaczonej fiolki o pojemności 40 ml.
8. Powtórzyć 3,1 - 3,7 3x dla wszystkich próbek.
9. Pozostawić wyekstrahowane próbki do wyschnięcia w fiolkach, bez nakrętek i w kapturze, luźno przykryte kawałkiem folii. Oznaczyć jako "usuniętą pozostałość" i przechowywać.
10. Połączone ekstrakty dla każdej próbki należy oznaczyć jako "TLE".