Identyfikacja gryzoni I

Właściwa identyfikacja zwierząt laboratoryjnych jest podstawowym wymogiem badań biomedycznych. Istotne jest, aby badacze byli w stanie rozróżnić poszczególne zwierzęta, tak aby właściwe zwierzę zostało wykorzystane do procedur doświadczalnych i zbierania danych. Naukowcy opracowali kilka stałych i tymczasowych metod identyfikacji poszczególnych zwierząt laboratoryjnych. W tym miejscu omówimy dwie najczęściej stosowane metody: kolczykowanie uszu i dziurkowanie uszu.

Zanim zagłębimy się w procedurę dziurkowania uszu, przedstawmy kod dziurkacza w ucho, dostępne rodzaje stempli oraz omówmy zalety i wady tej metody. Jak można się domyślić, przebijanie uszu polega na wybiciu otworu lub nacięcia w zewnętrznym uchu lub małżowinie usznej zwierzęcia. W celu ujednolicenia tej metody opracowano uniwersalne kody do dziurkowania uszu.

W zależności od pozycji, nacięcia na prawym uchu reprezentują pojedyncze cyfry, takie jak 1, 3 i 5, a podwójne wycięcie reprezentuje 2. Używając różnych kombinacji tych nacięć i sumując wartość dla każdego nacięcia, możesz oznaczyć zwierzę od 1 do 9. Podobnie w lewym uchu te same nacięcia reprezentują dziesiątki. I znowu, różne kombinacje będą obejmować zakres od 10 do 90. Otwory w środku prawej i lewej małżowiny usznej reprezentują odpowiednio 100 i 200. A dziury w obu wskazują 300. Dlatego, na przykład, jeśli chcesz oznaczyć zwierzę jako 173, powinieneś wybić otwór w środku prawego ucha na 100, trzy nacięcia w lewym roku sumujące sumę do 70 i pojedyncze nacięcie w prawym górnym uchu reprezentujące miejsce jednostki "trzy".

Omówmy teraz trzy style dostępnych na rynku dziurkaczy do uszu: dziurkacz nożycowy, dziurkacz na kciuk i dziurkacz dźwigniowy. Każdy z nich ma swoje wady i zalety.

Dziurkacz kciuka wymaga ruchu szczypania, ale jest na tyle mały, że mieści się w rurki Eppendorfa, dzięki czemu tkanka ucha może być łatwiej pobrana. Ergonomicznie dziurkacz dźwigniowy jest łatwiejszy w użyciu niż dziurkacz kciukowy, szczególnie w przypadku grubszych uszu starszych szczurów. Dziurkacz nożycowy nie wymaga ruchu szczypania, dzięki czemu unika się zmęczenia i kontuzji cieśni nadgarstka.

Pomimo tego, że jest to szybka i prosta metoda identyfikacji, uderzanie w uszy ma pewne ograniczenia. Po pierwsze, omówiony powyżej kod dziurkacza w uchu ma górną granicę 399, co może ograniczać stosowanie tej metody w niektórych badaniach na dużą skalę. Innym ograniczeniem jest to, że większość zwierząt musi być chwytana za kark, aby odczytać kod, co wydłuża czas ich obsługi. Wraz z wiekiem szczury skóra ich uszu gęstnieje i trudno jest wykonać uderzenie w ucho bez powodowania znacznego stresu u zwierzęcia. Dlatego najlepiej jest wykonywać nakłuwanie uszu młodym szczurom po ich odsadzeniu. W przypadku dorosłych szczurów, które wymagają identyfikacji, podczas wykonywania nakłuwania uszu należy rozważyć zastosowanie znieczulenia wziewnego.

Teraz, gdy masz już podstawowe informacje na temat kodu dziurkacza w uchu i rodzajów dostępnych narzędzi, dowiedzmy się, jak wykonać tę technikę u myszy.

Przed przystąpieniem do zabiegu zaleca się oczyszczenie narzędzi do wykrawania roztworem dezynfekującym, spłukanie alkoholem i dokładne wysuszenie. Unikaj autoklawowania ciosów w uszy, ponieważ w końcu je stępi.

Na początek zdecyduj o kodzie doświadczalnym zwierzęcia i stemplu, który ma być użyty. Użyjmy tutaj kodu 173 i dziurkacza nożycowego jako przykładów. Ta sama procedura ma zastosowanie do każdego innego kodu lub stempla. Kiedy będziesz gotowy, powstrzymaj zwierzę, chwytając je za kark, aby uszy były łatwo dostępne. Zacznij od dołka na 100. Umieść prawe ucho w stemplu tak, aby otwór stempla znajdował się z dala od brzegu małżowiny usznej. Następnie dociśnij, aby szybko i mocno zamknąć nożyczki, aby przeciąć skórę. Następnie zwolnij stempel i wyjmij go z ucha. Unikaj ciągnięcia lub skręcania stempla, aby zapobiec rozerwaniu ucha. Aby wykonać wycięcie, umieść stempel na krawędzi małżowiny usznej w odpowiednim miejscu, w tym przypadku w górnej części prawego ucha dla "trójki" w miejscu jednostki kodu i zrób to samo - szybko i mocno dociśnij, a następnie otwórz nożyczki, aby go wyjąć. Powtórz tę samą procedurę na drugim uchu, aby przebić trzy nacięcia - dwa dla "20" w pobliżu zewnętrznego rogu i jedno dla "50" w pobliżu wewnętrznego rogu, sumując kod do "70".

Upewnij się, że został wybity prawidłowy kod przed dodaniem zwierzęcia z powrotem do klatki. Ponownie wyczyść stempel środkiem dezynfekującym, spłucz alkoholem i dokładnie wysusz, aby zapobiec rdzewieniu.

Przejdźmy teraz do kolczykowania uszu, które jest kolejną niedrogą i łatwą do wykonania metodą indywidualnej identyfikacji myszy i szczurów. Istnieje wiele dostępnych na rynku kolczyków. Należą do nich: metalowe przywieszki z wyrytą serią cyfr i/lub liter oraz plastikowe przywieszki ze znakami lub kodami kreskowymi na jaskrawym tle.

Jedną z wad metalowych zawieszek jest to, że często konieczne jest podniesienie zwierzęcia w celu odczytania kodu. W przeciwieństwie do tego, plastikowe znaczniki są łatwe do odczytania bez konieczności dotykania zwierząt. Kolejną zaletą plastikowych przywieszek jest ich kompatybilność z obrazowaniem MRI. Chociaż znaczniki zapewniają indywidualny identyfikator myszy lub szczura, nie są nieomylne. Znaczniki mogą zostać utracone z powodu nadmiernej pielęgnacji, zapalenia skóry lub infekcji, samourazów zadanych podczas próby usunięcia znaczników z powodu nietolerancji, walki i agresywnych zachowań hodowlanych. Jeśli kilka zwierząt jest trzymanych w tej samej klatce, utrata kolczyka może być kłopotliwa. Aby obejść ten problem, należy zastosować drugorzędną formę identyfikacji, taką jak kod dziurkowania na uchu po przeciwnej stronie zawieszki. Placówka powinna ujednolicić zarówno wybór ucha, które ma być oznakowane, jak i kod, który ma być używany na drugim uchu, a wszystkie kody powinny być wskazane na karcie klatki.

Teraz nauczmy się, jak prawidłowo założyć kolczyk, ponieważ nieprawidłowe ustawienie może mieć kilka niefortunnych konsekwencji. Po aplikacji omówimy również usunięcie kolczyka, które zwykle wykonuje się w przypadku infekcji spowodowanej nałożeniem kolczyka.

Pierwszym krokiem jest wybór odpowiedniego znacznika dla zwierząt, które mają być identyfikowane. Tutaj użyjemy metalowego znacznika, aby zademonstrować procedurę na myszach. Pamiętaj, aby zamówić aplikator, który jest odpowiedni do konkretnego rozmiaru i stylu używanych kolczyków. Delikatnie wyjmij przywieszkę z kartonowego uchwytu i skieruj ją do aplikatora tak, aby końcówka z otworem znajdowała się nad naciętym obszarem aplikatora. Spiczasty koniec przywieszki powinien znajdować się naprzeciwko wycięcia.

Kiedy będziesz gotowy do założenia kolczyka, utrzymaj zwierzę tak, aby uszy były łatwo dostępne. Zwierzęta mogą być mniej skłonne do walki, jeśli tylne kończyny mogą spoczywać na powierzchni, takiej jak górna część klatki lub blat. Gdy zwierzę jest już unieruchomione, umieść czubek kolczyka głęboko w małżowinie usznej ucha, tak aby numery kolczyków były skierowane do tyłu zwierzęcia. Następnie mocno ściśnij aplikator; Kolczyk przebije ucho i zablokuje się razem. Po zwolnieniu oznakowane ucho wypadnie z aplikatora. Upewnij się, że tag został prawidłowo umieszczony i zastosowany. Jeśli wolisz, aby numery kolczyków były skierowane w stronę nosa zwierzęcia, umieść końcówkę kolczyka u podstawy małżowiny usznej z tyłu ucha, a następnie ściśnij, aby zablokować kolczyk na miejscu.

Znaczniki muszą być umieszczone w taki sposób, aby nie powodowały zgięcia ucha, nie zakłócały mobilności zwierzęcia ani nie zaczepiały się o żadną część klatki. Jeśli kolczyk zostanie umieszczony zbyt blisko krawędzi ucha, można go łatwo podrzeć. Jeśli zostanie umieszczona zbyt blisko głowy, skóra w okolicy szyi może zaplątać się w znacznik, powodując podrażnienie, ból i ograniczenie ruchów, co może następnie prowadzić do samookaleczenia. Czasami metalowe zawieszki mogą powodować podrażnienie i obrzęk ucha. Często prowadzi to do infekcji małżowiny usznej, a natychmiastowe leczenie powinno obejmować usunięcie znacznika.

Aby usunąć zawieszkę, zwilż aplikator z bawełnianą końcówką roztworem antyseptycznym i użyj go do usunięcia wszelkich zanieczyszczeń z okolic przywieszki. W ciężkich przypadkach infekcji zwierzę może wymagać znieczulenia. Następnie za pomocą nożyc do drutu przetnij górną część pętli tagów od krawędzi do krawędzi. Co ważne, nie przecinaj płaskiej powierzchni, ponieważ spowoduje to ściśnięcie zawieszki, uszczypnięcie ucha i uszkodzenie ucha. Za pomocą hemostatów delikatnie przeprowadź kolczyk przez ucho i na zewnątrz ucha. Wysuń zawieszkę tak, aby zaciśnięty koniec nie przechodził, powodując uraz i powiększenie otworu do przekłuwania. Gdy nieśmiertelnik zniknie, przetrzyj ucho antyseptycznym bawełnianym aplikatorem w patyczku i włóż zwierzę z powrotem do klatki. W przypadku ropnej wydzieliny z ucha może być konieczne dalsze leczenie i zaleca się konsultację z personelem weterynaryjnym w celu oceny.

Teraz, gdy wiesz, jak oznaczać zwierzęta laboratoryjne za pomocą kolczyków i stempli, przyjrzyjmy się kilku eksperymentom, w których te metody mogą być przydatne. Jedną z głównych zalet stosowania kodu przekłuwania uszu jest to, że stemple mogą służyć jako próbki tkanek do genotypowania, zmniejszając w ten sposób stres u zwierząt spowodowany wielokrotnym obchodzeniem się. Jeśli jednak planujesz używać stempli do pobierania próbek PCR, pamiętaj, aby najpierw namoczyć aparat w roztworze odkażającym powierzchnię na co najmniej 3 minuty w celu usunięcia pozostałości DNA lub RNA, a następnie spłukać alkoholem przed użyciem.

Znaczenie techniki identyfikacji wzrasta jeszcze bardziej, jeśli eksperyment trwa kilka dni. Na przykład w tym eksperymencie naukowcy najpierw oznaczyli zwierzęta za pomocą metalowej zawieszki, a następnie wstrzyknęli do nerwu kulszowego zawiesinę transgenicznych komórek nowotworowych eksprymujących białko lucyferazy. Następnie, aby określić ilościowo progresję raka, zobrazowali zwierzęta za pomocą bioluminescencji po jednym, dziesięciu i osiemnastu dniach od wstrzyknięcia.

Właśnie obejrzeliście prezentację JoVE, w której przedstawiono dwie powszechnie stosowane metody identyfikacji gryzoni: kolczyki i dziurki w uszach. Powinieneś teraz zrozumieć kod dziurkowania uszu, znać różne rodzaje dostępnych na rynku kolczyków dla gryzoni i powinieneś być w stanie dokładnie wykonać te procedury bez powodowania znacznego dyskomfortu u zwierząt.

Pamiętaj, że każda technika ma swoje zalety i wady, które należy wziąć pod uwagę w odniesieniu do twoich potrzeb eksperymentalnych. Oprócz rozważenia kosztów, łatwość techniki i poziom bólu u zwierząt powinny być jednymi z głównych czynników branych pod uwagę przy wyborze odpowiedniej metody identyfikacji. Jak zawsze, dziękujemy za oglądanie!