5.9: Podawanie związków IV

1. Iniekcja dosercowa

1. Punkty orientacyjne i pozycjonowanie: Ustaw mysz lub szczura w pozycji leżącej po prawej stronie (z lewą stroną skierowaną do góry) lub w pozycji grzbietowej i zidentyfikuj punkty orientacyjne.
   1. Ustaw serce mniej więcej na poziomie punktu łokcia i po lewej stronie mostka.
   2. Włóż igłę między żebra w miejscu łokcia.
   3. U zwierzęcia w pozycji grzbietowej wbij igłę w klatkę piersiową równolegle do stołu.
   4. U zwierzęcia w pozycji leżącej bocznej wbić igłę w klatkę piersiową prostopadle do stołu.
2. Wstrzyknięcie artykułu
   1. Upewnij się, że ruch igły po jej wprowadzeniu do serca jest minimalny, aby zapobiec rozdarciu mięśnia i powodowaniu krwawienia do worka osierdziowego, ponieważ upośledza to czynność serca.
   2. Odessać strzykawkę, aby określić prawidłowe umieszczenie. Często dochodzi do wycieku krwi do piasty strzykawki.
   3. Trzymać strzykawkę w taki sposób, aby ręka nie znalazła się ponownie na strzykawce w celu wstrzyknięcia po umieszczeniu igły w sercu.
   4. Wstrzykuj artykuł powoli i równomiernie.
   5. Powoli wyjmować igłę, aby zminimalizować krwawienie.
   6. Myszy, które doświadczają niewydolności oddechowej, drgawek, sinicy, przedłużonej ataksji lub innych następstw związanych z urazem po wstrzyknięciu, muszą zostać ocenione przez personel weterynaryjny i poddane eutanazji zgodnie z ich zaleceniami.

Rysunek 1. Wstrzyknięcie dosercowe u myszy.

2. Wstrzyknięcie dożylne z wykorzystaniem splotu zaoczodołowego

1. Punkty orientacyjne i pozycjonowanie iniekcji
   1. Umieść zwierzę na płaskiej powierzchni w pozycji bocznej.
   2. Wbić igłę w przyśrodkową kantę oka pod kątem 45° do nosa.
   3. Głębokość igły musi być wystarczająca, aby przeniknąć do tkanek spojówek i przesunąć się za orbitę oczną do splotu ocznego. Podczas umieszczania igły nie powinna ona stykać się z kością z tyłu oczodołu.
   4. Połóż palec wskazujący na czubku głowy, a kciuk na szczęce.
   5. Delikatnie pociągnij do tyłu i w dół, aby napiąć skórę i wysunąć gałkę oczną.
   6. Uważaj, aby nie wywierać nacisku na tchawicę i nie ograniczać przepływu powietrza.
2. Zastrzyk
   1. Umieścić igłę za okiem, a nie wewnątrzgałkowo.
   2. Upewnij się, że igła ma minimalny ruch po wprowadzeniu do splotu zaoczodołowego, w przeciwnym razie naczynia pękną, powodując krwawienie i utratę środka do tkanek za okiem. Trzymać strzykawkę w taki sposób, aby ręka nie została ponownie umieszczona na strzykawce w celu wstrzyknięcia po umieszczeniu igły w splocie zaoczodołowym.
   3. Nie należy zasysać strzykawką, ponieważ spowoduje to zapadnięcie się naczyń.
   4. Wstrzykuj artykuł powoli i równomiernie.
   5. Wyjąć igłę i lekko przyłożyć do oka, aby zatamować krwawienie i zapewnić hemostazę.
   6. Myszy, które doświadczają obrzęku, zapalenia spojówek lub innych następstw związanych z urazem po wstrzyknięciu, muszą zostać ocenione przez personel weterynaryjny i poddane leczeniu lub eutanazji zgodnie z ich zaleceniami

Rysunek 2. Retro wstrzyknięcie orbitalne u myszy.

3. Wstrzyknięcie poduszki pod stopę

1. W celu unieruchomienia umieść zwierzę w rurce przytrzymującej z odizolowaną jedną tylną stopą i rozciągnij, chwytając skórę powyżej kolana.
2. Przed wstrzyknięciem należy przetrzeć stopę wodą lub alkoholem, aby usunąć zanieczyszczenia.
3. Wstrzyknąć podskórnie w środek tylnej części stopy, tworząc niewielki pęcherzyk w miejscu wstrzyknięcia. Aby ominąć naczynie krwionośne biegnące wzdłuż stopy, należy wstrzyknąć lek tuż przy linii środkowej równoległej do naczynia.

Rysunek 3. Wstrzyknięcie opuszki stopy u myszy i szczurów.

Wewnątrzsercowe, retro-oczodołowe i opuszka stopy to tylko niektóre ze specjalistycznych metod iniekcji, które naukowcy biomedyczni wykorzystują do eksperymentów wymagających dostarczania związków tymi nietypowymi drogami.

Wstrzyknięcie dosercowe dostarcza związek do lewej komory, umożliwiając substancję bezpośrednio do krążenia tętniczego. Trasa retroorbitalna jest alternatywą dla iniekcji do żyły ogonowej i służy do dostarczania związku do krążenia żylnego. Wstrzyknięcie opuszki stopy polega na podskórnym podaniu artykułu w tylną łapę zwierzęcia. Ten film zilustruje rozważania, procedury i zastosowania tych specjalnych technik iniekcji.

Zacznijmy od kilku podstawowych informacji i rzeczy, które należy wziąć pod uwagę przed rozpoczęciem tych procedur administracyjnych.

Podawanie dosercowe często odbywa się za pomocą ultradźwięków, aby skierować igłę we właściwe miejsce w sercu. Jeśli jednak zostanie wykonana prawidłowo z wykorzystaniem odpowiednich punktów orientacyjnych, podanie może być wykonane bez użycia wizualizacji ultradźwiękowej. Należy pamiętać, że procedura wymaga użycia znieczulenia ogólnego, a w przypadku procedur przetrwania dozwolone jest tylko jedno wstrzyknięcie na zwierzę. Zasadniczo do tego wstrzyknięcia używa się igły o rozmiarze 27-30, a maksymalna objętość podawania wynosi odpowiednio 100 i 300 mikrolitrów dla myszy i szczurów.

W przypadku wstrzyknięcia dożylnego drogą zaoczodołową należy dobrze zrozumieć strukturę żyły oczodołowej. Mysz ma zatokę, w której zbiega się kilka żył - a mianowicie nadoczodołowa, grzbietowa nosowa, dolna powiekowa i powierzchowna skroniowa. Natomiast u szczurów istnieje sieć lub splot składający się z kilku żył. Iniekcję wykonuje się bezpośrednio do zatoki lub splotu. Podobnie jak w przypadku choroby wewnątrzsercowej, procedura ta również wymaga zastosowania znieczulenia ogólnego, a w przypadku zabiegów przeżycia zaleca się tylko jedno wstrzyknięcie na oko dziennie, a łącznie dwa wstrzyknięcia na oko. Podobnie jak w przypadku wszystkich wstrzyknięć, należy wybrać najmniejszy rozmiar igły - zwykle rozmiar 27-30 - a zalecana maksymalna objętość to 150 ? L na oko.

Pomimo kontrowersji, w przypadku niektórych badań, zwykle związanych ze stanem zapalnym i wzrostem guza, nadal wymagane jest wstrzyknięcie poduszki pod stopę. Należy pamiętać, że zastrzyki można wykonywać tylko na jedną nogę, nigdy obustronnie. Pomiary opuszki stopy powinny być wykonywane codziennie, gdy tylko pojawi się widoczny obrzęk. Do wstrzykiwania zalecana jest igła o rozmiarze 29-30, a maksymalna zalecana objętość to 50 μl. Po każdym wstrzyknięciu wszystkie zwierzęta muszą być ściśle monitorowane pod kątem objawów bólu, poziomu spożycia pokarmu i prawidłowego poruszania się. Ogólnie rzecz biorąc, zwierzę musi zostać poddane eutanazji, gdy zmiana lub guz zakłóca zdolność zwierzęcia do poruszania się lub dotarcia do jedzenia i wody.

Poznajmy teraz procedury iniekcji, zaczynając od iniekcji dosercowej. Zademonstrujemy procedurę na myszy, ale punkty orientacyjne i protokół dla szczura są podobne.

Pierwszym krokiem jest przygotowanie strzykawki. Przypomnijmy, że igła o rozmiarze 29 i strzykawka o pojemności 1 ml są odpowiednie dla myszy. A maksymalna objętość do wstrzyknięcia dosercowego wynosi 100 mikrolitrów. Podczas pobierania roztworu należy pozostawić niewielką ilość powietrza między tłokiem a materiałem do wstrzykiwań. Ma to na celu umożliwienie przedostania się krwi do strzykawki w miarę jej umieszczania w sercu.

Na początek znieczulij zwierzę za pomocą środków wziewnych lub znieczulających do wstrzykiwań. Zapoznaj się z rozważaniami dotyczącymi utrzymania znieczulenia ogólnego w innym filmie z tej kolekcji. Następnie ustaw zwierzę w pozycji grzbietowej leżącej na izolowanej platformie. Następnie przyklej przednie kończyny do platformy i umieść kawałek taśmy poziomo w poprzek brzucha nad biodrami. Ma to na celu dalsze ustabilizowanie zwierzęcia i uniknięcie jakiegokolwiek ruchu po wkłuciu igły. Następnie za pomocą wacika zwilż klatkę piersiową zwierzęcia 70% alkoholem.

Aby wskazać miejsce wstrzyknięcia, należy najpierw zlokalizować mieczyk mieczykowaty i mostek manubrium. Następnie znajdź punkt środkowy między dwoma punktami orientacyjnymi. 1-2 mm na lewo od tego punktu znajduje się punkt orientacyjny wprowadzania igły. Za pomocą aplikatora z bawełnianą końcówką nałóż jod powidonu, aby zaznaczyć miejsce wkłucia igły.

Aby wykonać wstrzyknięcie, należy skierować igłę prostopadle do stołu i wprowadzić ją na głębokość około 2 mm. Następnie należy zastosować bardzo lekkie przeciwciśnienie do tłoka. Jaskrawoczerwona, natleniona krew powinna dostać się do piasty strzykawki, co potwierdza prawidłowe umieszczenie. Trzymać strzykawkę w tym samym miejscu i wstrzykiwać materiał powoli i równomiernie przez 30 do 60 sekund. Szybkie wstrzyknięcie może spowodować zlepianie się komórek i zatkanie tętnic, wstrząs dla systemu spowodowany znacznie niższą temperaturą substancji niż temperatura ciała lub rozszerzenie komory i zaburzenie rytmu serca.

Gdy materiał oczyści strzykawkę, powoli i ostrożnie wyjmij igłę, nie wykonując żadnych ruchów bocznych, ponieważ może to spowodować uszkodzenie mięśnia sercowego. Następnie natychmiast odpiąć taśmę z przednich nóg i brzucha i umieścić zwierzę w pozycji leżącej w czystej klatce z wystarczająco głęboką ściółką, aby działało jako warstwa izolacyjna. Należy pamiętać, że połowa tej klatki rekonwalescencji znajduje się na źródle ciepła, a znieczulone zwierzę znajduje się po ogrzewanej stronie klatki. Zapobiega to hipotermii, a gdy zwierzę dojdzie do siebie po znieczuleniu, będzie mogło w razie potrzeby zejść z ogrzewanej strony.

Następnie nauczmy się metody wstrzykiwania dożylnego z wykorzystaniem splotu zaoczodołowego u szczurów. Ponownie zademonstrujemy procedurę na myszy, ale punkty orientacyjne i protokół dla szczurów są podobne.

Przymocować odpowiednią igłę do wybranej strzykawki i napełnić materiał do wstrzykiwań. Pamiętaj, że generalnie używa się igły o rozmiarze 27-30 z najmniejszą możliwą strzykawką i maksymalną objętością 150 mikrolitrów.

Aby rozpocząć procedurę, najpierw znieczul zwierzę. Następnie umieść go na płaskiej powierzchni w bocznej pozycji leżącej. Teraz połóż palec wskazujący na czubku głowy, a kciuk na szczęce i delikatnie pociągnij do tyłu i w dół. Ma to na celu napinanie skóry i wysunięcie gałki ocznej. Uważaj, aby nie wywierać nacisku na tchawicę i nie ograniczać przepływu powietrza. Jeśli planujesz wielokrotne wstrzyknięcia, zastosuj miejscowy znieczulenie okulistyczne, takie jak tetrakaina lub proparakaina.

Wprowadzić igłę do przyśrodkowej kantu oka przy 45? kąt do nosa. Głębokość musi być wystarczająca, aby przeniknąć do tkanek spojówek i przejść do oczodołu ocznego i do zatoki. Nie powinien stykać się z kością z tyłu oczodołu. Aby uniknąć pęknięcia naczyń krwionośnych, należy upewnić się, że igła po włożeniu porusza się minimalnie. Nie należy aspirować, ponieważ spowoduje to zapadnięcie się naczyń. Wstrzykuj artykuł powoli i równomiernie. Następnie delikatnie wyjmij igłę i lekko uciskaj oko, aby zatamować krwawienie i zapewnić hemostazę.

Na koniec przyjrzyjmy się metodzie wstrzykiwania opuszki stopy u myszy i szczurów. Aby rozpocząć, należy założyć odpowiednią igłę i napełnić strzykawkę odpowiednią objętością. Zabieg ten można wykonać u zwierząt przytomnych.

Umieść zwierzę w rurce krępującej z jedną tylną stopą odizolowaną i wyprostowaną, chwytając skórę powyżej kolana. Przed wstrzyknięciem należy przetrzeć stopę wodą lub alkoholem, aby usunąć zanieczyszczenia. Aby ominąć naczynie krwionośne biegnące wzdłuż stopy, punkt orientacyjny wstrzyknięcia znajduje się pośrodku, ale tuż przy linii środkowej, bliżej palców u stóp.

Umieścić igłę pod kątem do góry w miejscu wstrzyknięcia, kierując ją w stronę pięty. Wstrzykiwać artykuł powoli i równomiernie, aby uniknąć szybkiego rozdęcia tkanek stopy. Spowoduje to pęcznienie opuszki stopy, gdy materiał iniekcyjny wypełni tę przestrzeń podskórną. Na stopie małego zwierzęcia obrzęk spowodowany wstrzyknięciem może rozciągać się na piętę, podczas gdy u większego zwierzęcia będzie bardziej zlokalizowany.

Po wstrzyknięciu należy codziennie obserwować zwierzęta i jeśli występuje utrzymujący się obrzęk lub jeśli w wyniku protokołu doświadczalnego występują zmiany chorobowe lub nowotwory, wówczas za pomocą suwmiarki wykonać pomiar opuszki stopy. Ten instrument mierzy grubość stopy w milimetrach i pomaga w ilościowym określeniu obrzęku.

Omówmy teraz kilka przykładowych eksperymentów z wykorzystaniem iniekcji dosercowych, retro oczodołowych i opuszki stóp.

Jednym z wielu zastosowań podawania wewnątrzsercowego jest opracowanie zwierzęcego modelu przerzutów nowotworowych. Tutaj naukowcy wykorzystali tę drogę do wstrzyknięcia komórek nowotworowych, które mają skłonność do kolonizacji kości. W kolejnych dniach badali wzrost guza w kościach za pomocą technik obrazowania rentgenowskiego i fluorescencyjnego. W innym badaniu trasa retroorbitalna została wykorzystana do wstrzyknięcia specyficznych przeciwciał, które znakują neutrofile. Następnie, za pomocą obrazowania przyżyciowego, naukowcy byli w stanie śledzić wzorzec migracji znakowanych komórek.

Wreszcie, badacze często używają iniekcji z opuszki stopy do analizy odpowiedzi zapalnej. W tym eksperymencie naukowcy wyizolowali jednojądrzaste komórki krwi obwodowej z próbek krwi ludzkiej, zmieszali je z różnymi antygenami testowymi i wstrzyknęli roztwory do opuszki stopy zwierzęcia. Na koniec wykonali pomiary stóp, aby określić ilościowo reakcję na obrzęk spowodowany różnymi antygenami.

Właśnie obejrzałeś ostatnią część JoVE na temat zwykłych i specjalistycznych technik podawania związków.

Przypomnijmy, że w pierwszej części przyjrzeliśmy się najczęstszej drodze pozajelitowej. W drugim rozdziale omówiliśmy procedury dojelitowe i miejscowe. Trzecia część dotyczyła pierwszego zestawu nietypowych procedur, takich jak śródskórne, donosowe i wewnątrzczaszkowe u noworodków. Na koniec omówiliśmy trzy dodatkowe trasy, które badacze biomedyczni wykorzystują w laboratoriach do określonych celów.

Po obejrzeniu tej serii powinieneś mieć znacznie lepsze zrozumienie różnych technik podawania, a także powinieneś znać ogólne i szczegółowe rozważania związane z tymi protokołami podawania związków Jak zawsze, dzięki za oglądanie!