Elektroforeza kapilarna (CE)

1. Konfiguracja oprzyrządowania CE

1. Włącz instrument CE i komputer. Za pomocą oprogramowania komputerowego włącz źródło światła do analizy UV, aby umożliwić mu rozgrzanie się. Niektóre programy mają wskaźnik, kiedy lampa jest gotowa do użycia (ikona lampy zmienia kolor).
2. Utwórz plik metod. Ustaw ważne parametry do uruchomienia CE. W tej analizie temperatura wkładu i przechowywania próbki wynosi 35 °C. Długość fali do wykrywania UV wynosi 214 nm.
3. Napisz program czasowy. Program zazwyczaj składa się z etapów płukania (w celu oczyszczenia kapilary przed analizą), etapów wtrysku, a następnie etapu elektroforezy. Na etapie płukania wykonaj 2 płukania przez 1 minutę pod ciśnieniem 20 psi. Pierwsze płukanie odbywa się za pomocą NaOH, który pomaga upewnić się, że grupy silanolowe na ścianie kapilary są zdeprotonowane. Drugie płukanie odbywa się za pomocą buforu roboczego (tutaj bufor boranowy 0,025 M), aby upewnić się, że kapilara jest zrównoważona z buforem.
4. Do iniekcji stosuje się wtrysk ciśnieniowy o ciśnieniu 0,5 psi przez 5 s.
5. Dla etapu elektroforezy warunki to napięcie separacji: 20 kV, czas: 5 min, normalna polaryzacja. Dla każdego kroku należy również wskazać, która fiolka jest wlotem, a która fiolką jest wylotem. Zapisz plik metod po wprowadzeniu wszystkich parametrów.

2. Przygotowanie wzorców i próbek sody

1. Przygotuj 500 ppm roztworów podstawowych aspartamu, kofeiny i kwasu benzoesowego w wodzie. Przygotować 50 ml każdego z nich, używając kolby miarowej.
2. Przygotować wzorcowy roztwór 150 ppm aspartamu, 150 ppm kofeiny i 100 ppm kwasu benzoesowego w kolbie miarowej o pojemności 10 ml.
3. Przygotuj standardowe roztwory kofeiny o stężeniu 50 ppm, 100 ppm, 150 ppm i 200 ppm w kolbach miarowych o pojemności 10 ml.

3. Uruchom próbki na CE

1. Umieścić fiolki zawierające próbki wzorców lub sody w uchwycie na fiolkę z próbką. Upewnij się, że zapisałeś, która próbka znajduje się w którym gnieździe. W dwóch szczelinach znajduje się bufor boranowy i 0,1 M roztwór płuczący NaOH.
2. W pliku metody wprowadź, w którym gnieździe znajduje się pierwsza fiolka z próbką.
3. Uzyskaj pojedynczy przebieg, upewniając się, że wprowadziłeś wszystkie informacje o danych, których żąda program.
4. Kontynuuj zbieranie danych, zmieniając fiolkę wejściową dla każdej próbki. Uruchom wzorzec kombinacji, 3 stężenia kofeiny oraz próbkę Pepsi i Pepsi dietetycznej.
5. Włóż tarczę do instrumentu i wybierz odpowiedni instrument.
6. Przeanalizuj dane na komputerze. Obliczanie obszarów pików i nakładanie standardów oraz rzeczywistych próbek, aby pomóc w identyfikacji pików. Wykonaj krzywą kalibracyjną dla danych dotyczących kofeiny.