1. Egzamin zewnętrzny
Ogólne zewnętrzne badanie ciała, które obejmuje oględziny ciała pod kątem zmian i mas, powinno być przeprowadzone jako pierwszy krok w sekcji zwłok. Sierść włosowa powinna być zbadana pod kątem obszarów wypadania włosów. Zęby i paznokcie są oceniane pod kątem nadmiernego wzrostu lub zużycia. Należy zwrócić uwagę na wszelkie plamy sierści na ustach, nozdrzach, oczach, otworach odbytu i narządów płciowych. W celu wykrycia pasożytów zewnętrznych należy wykonać testy taśmowe, skrobanie skóry i badania skóry (patrz procedury poniżej).
2. Wewnętrzne badanie jamy brzusznej
3. Narządy jamy brzusznej
4. Klatka piersiowa
5. Głowa
Źródło: Kay Stewart, RVT, RLATG, CMAR; Valerie A. Schroeder, RVT, RLATG. Uniwersytet Notre Dame, IN
Wiele eksperymentów na zwierzętach opiera się na k…
1. Egzamin zewnętrzny
Ogólne zewnętrzne badanie ciała, które obejmuje oględziny ciała pod kątem zmian i mas, powinno być przeprowadzone jako pierwszy krok w sekcji zwłok. Sierść włosowa powinna być zbadana pod kątem obszarów wypadania włosów. Zęby i paznokcie są oceniane pod kątem nadmiernego wzrostu lub zużycia. Należy zwrócić uwagę na wszelkie plamy sierści na ustach, nozdrzach, oczach, otworach odbytu i narządów płciowych. W celu wykrycia pasożytów zewnętrznych należy wykonać testy taśmowe, skrobanie skóry i badania skóry (patrz procedury poniżej).
2. Wewnętrzne badanie jamy brzusznej
3. Narządy jamy brzusznej
4. Klatka piersiowa
5. Głowa
Sekcja zwłok – czyli sekcja zwłok narządów i tkanek – są integralnymi elementami wielu eksperymentów laboratoryjnych, które opierają się na końcowych punktach czasowych gromadzenia danych zebranych z analiz pobranych narządów. Dlatego ważne jest, aby nauczyć się prawidłowej diagnostyki sekcji zwłok i techniki pobierania tkanek, ponieważ procedura ta może znacząco wpłynąć na jakość pobieranych próbek. W tej prezentacji omówiona zostanie metoda preparacji i ekstrakcji narządów jamy brzusznej, rozrodczości i klatki piersiowej od zwierząt laboratoryjnych.
Przed przystąpieniem do procedury należy zainicjować wypełnianie formularza, który zawiera pełną historię zwierzęcia: numer identyfikacyjny zwierzęcia, płeć, warunki przetrzymywania, datę urodzenia, datę śmierci, numer badania/protokołu oraz nazwisko głównego badacza.
Następnie przygotuj obszar sekcji. Połóż pokrycie ławki, tacę sekcyjną, narzędzia przeznaczone do sekcji zwłok, w tym nożyczki, kleszcze, sterylne ostrze skalpela, nożyce do kości, tępą sondę, małą szpatułkę i niewchłanialny materiał do szycia. Pobieranie narządów i tkanek do badania histologicznego wymaga, aby tkanki były zakonserwowane w roztworze utrwalającym. O ile nie określono inaczej, najczęściej stosowanym utrwalaczem jest 10% neutralna buforowana formalina. Należy pamiętać, że próbki tkanek powinny mieć grubość 0,5-1 cm, aby umożliwić wystarczającą penetrację roztworu utrwalającego. Utrwalenie zapobiega gniciu, autolizie i gniciu; zatrzymuje wszelkie zachodzące reakcje biochemiczne; i może zwiększyć wytrzymałość mechaniczną i stabilność leczonych tkanek.
Metoda eutanazji zwierzęcia może również mieć wpływ na jakość próbek. Najczęściej stosowaną metodą eutanazji u myszy i szczurów jest przedawkowanie gazowego dwutlenku węgla. Zwierzęta pozostawia się w klatce domowej, którą umieszcza się w komorze i stopniowo wprowadza się do niej CO2 z prędkością przemieszczenia 10-30% objętości komory/min. Powoduje to, że zwierzęta tracą przytomność przed odczuwaniem bólu, który jest związany z aktywacją nocyceptorów przez kwas węglowy. Przepływ jest następnie utrzymywany w komorze do momentu zatrzymania oddechu i śmierci zwierzęcia.
Po eutanazji należy najpierw przeprowadzić wstępne badanie zewnętrzne, dokonując oględzin tuszy pod kątem zmian i mas, nadmiernego wzrostu zębów lub jakichkolwiek plam sierści na ustach, nozdrzach, uszach, oczach oraz otworach odbytu i narządów płciowych. Jeśli jest to uzasadnione, wykonaj test taśmy, skrobanie skóry i badanie skóry, aby wykryć pasożyty zewnętrzne. Po zakończeniu badania zewnętrznego nadszedł czas na rozpoczęcie sekcji zwłok, zaczynając od jamy brzusznej. Należy pamiętać, że przed pobraniem jakichkolwiek próbek tkanek ważne jest, aby obserwować narząd in situ.
Aby rozpocząć wycinanie skóry, umieść małe nacięcie tuż przed miednicą u kobiet i powyżej napletka u mężczyzn. Następnie, stosując technikę tępego rozwarstwienia, rozluźnij skórę od powięzi i mięśni. Tępe rozwarstwienie to technika anatomicznego sekcji, w której tkanki są oddzielane, a leżące pod nimi struktury odsłaniane bez cięcia. W tej technice nożyczki służą do rozsuwania tkanek, a nie do ich rozcinania. Zamknięte końcówki są wciskane w tkankę, a następnie otwierane, aby podzielić tkankę wzdłuż naturalnych płaszczyzn. Proces ten wymaga cierpliwości i delikatnego dotyku, ponieważ rozciąganie tkanki może skutkować uszkodzeniem sąsiednich narządów i naczyń krwionośnych. Następnie przedłuż cięcie do podbródka. Następnie wykonaj poprzeczne cięcia przed kończynami tylnymi i z tyłu od kończyn przednich i użyj tępego rozwarstwienia, aby odsłonić obszar szyjki macicy i klatkę piersiową. Należy zachować szczególną ostrożność, aby uniknąć pęknięcia naczyń szyjnych i szyjnych szyi.
U samic, z wyciętą skórą, obserwuj tkankę sutka od szczytu mostka przy manubrium do otworu narządów płciowych na powierzchni brzusznej; rozciągający się na boki po obu stronach. Samice karmiące piersią lub w ciąży będą miały zwiększoną objętość tkanki sutkowej i może być obecne mleko. Aby wyciąć gruczoły sutkowe, chwyć krawędź tkanki kleszczami i użyj tępego rozwarstwienia, aby poluzować przyczepy do skóry. Po oddzieleniu gruczołu można go umieścić w roztworze utrwalającym w celu późniejszej analizy histologicznej.
Na tym etapie można zaobserwować gruczoły ślinowe podżuchwowe, które są sparowane i znajdują się w żuchwie - rozciągając się wzdłuż szyi do mostka ręcznego. Usunięcie tych gruczołów wymaga tępego wypreparowania i szczególnej ostrożności podczas pracy w odcinku szyjnym, aby zapobiec pękaniu naczyń krwionośnych. Po uwolnieniu się od leżących poniżej mięśni podnieś gruczoły i odetnij wszelkie pozostałe przyczepy. Gruczoły wymagają co najmniej jednego nacięcia, aby umożliwić penetrację utrwalacza.
Ponadto można zobaczyć tchawicę, która rozciąga się od nagłośni do rozwidlenia oskrzeli. Jest to prążkowana, chrzęstna rurka, która jest elastyczna. Chociaż zwykle jest czysta, eutanazja z użyciem CO2 może powodować gromadzenie się płynu w płucach i tchawicy, która wygląda jak pienisty przezroczysty płyn. W tym obszarze będzie również obecny podskórny tłuszcz. Oceń go pod kątem ilości i osadzania. Otyłe zwierzę może mieć dużą ilość tłuszczu, a skóra jest pogrubiona.
Przed otwarciem jamy ciała obserwuj mięśnie brzucha, międzyżebrowe i odsłonięte mięśnie szyi oraz kończyny pod kątem zgrubień, guzków lub przebarwień. Aby otworzyć jamę ciała, najpierw wykonaj małe poprzeczne cięcie w najbardziej ogonowym punkcie odsłoniętego mięśnia brzucha. Następnie unieś mięsień z dala od narządów i przetnij wzdłuż linea alba do mieczykowatej. Następnie wypreparuj mięśnie bocznie od linii środkowej do tuż nad tylnymi kończynami po obu stronach. Na koniec przeciąć wzdłuż krzywizny żeber po obu stronach. Po otwarciu jamy ciała oceń ilość i nagromadzenie tłuszczu w jamie brzusznej. Zdrowe zwierzę będzie miało poduszeczki tłuszczowe w jamie brzusznej i trochę tłuszczu wzdłuż powierzchni grzbietowej w jamie. Obserwuj kolor tej tkanki i zwróć uwagę na wszelkie nieprawidłowości.
Teraz jesteśmy gotowi do rozpoczęcia pobierania narządów jamy brzusznej. Zacznij od zlokalizowania śledziony, która jest ciemnoczerwona i znajduje się wzdłuż dolnej krzywizny żołądka. Powinien mieć regularny kształt i lekko matową powierzchnię. Aby usunąć śledzionę, podnieś narząd i odetnij przyczepy do żołądka.
Żołądek znajduje się na dystalnym końcu przełyku. Wydaje się być dwukolorowy, różnicując część mięśniową i gruczołową. Poczuj to pod kątem obecności jedzenia. Należy zwrócić uwagę na pusty żołądek, ponieważ może to wskazywać na chorobę. Nie przecinaj żołądka, ponieważ zawartość zanieczyści narządy w jamie brzusznej.
Jelito cienkie jest połączone dystalnie i niżej od żołądka. W jelicie cienkim znajdują się trzy odrębne sekcje. Pierwszym z nich jest dwunastnica - krótszy odcinek od tylnego zwieracza żołądka do początku jelita czczego. Przewód żółciowy wchodzi tutaj, a tkanka trzustki jest mocniej przyczepiona do tej części jelita cienkiego. Jelito czcze jest częścią środkową. Plamy Peyera, które są małymi owalnymi obszarami złożonymi z tkanki limfatycznej, można zaobserwować na powierzchni jelita czczego i jelita krętego. Jelito kręte to najdłuższa część jelita cienkiego, która kończy się w jelicie ślepym - znajdującym się na styku jelita cienkiego i grubego. Jelito ślepe ma zielonkawy kolor i jest bardzo miękkie.
Jelito grube ciągnie się od jelita ślepego do odbytu. Jest łatwo rozpoznawalny, ponieważ granulki kału można uwidocznić w świetle tej struktury. Jelito cienkie i grube są zakotwiczone w organizmie przez krezkę, błonę zawierającą naczynia krwionośne, tłuszcz i węzły chłonne. Należy to zbadać pod kątem powiększonych węzłów chłonnych i wszelkich mas przed usunięciem przewodu pokarmowego. Trzustka jest rozlanym narządem znajdującym się za żołądkiem. Jest to kolor od jasnobrązowego do szarego i składa się z wielu małych płatów o nieregularnych krawędziach. Aby pobrać trzustkę, chwyć narząd i delikatnie oderwij go od otaczającej tkanki krezkowej. Należy to zrobić przed usunięciem przewodu pokarmowego.
Aby usunąć cały przewód jako jeden kawałek, zaczynając od żołądka i rozciągając się do odbytu, najpierw umieść ligaturę w odbytnicy, a następnie wykonaj cięcie przez jelito grube tuż przed odbytem. Następnie umieść ligaturę na styku przełyku i żołądka, po czym można podnieść cały przewód pokarmowy i odciąć wszelkie błoniaste przyczepy. Całość można następnie oddzielić od krezki, pociąć na sekcje i przymocować.
Nerki to sparowane narządy znajdujące się przylegające do mięśni pleców. Powinny być wielkości i koloru ciemnej fasoli i mieć gładką powierzchnię. Bezpośrednio przed nerką znajduje się nadnercza, które wygląda jak mały jasnoróżowy guzek.
Aby usunąć nerkę, odizoluj ją za pomocą kleszczy i przetnij między narządem a moczowodem. Twardą warstwę zewnętrzną można następnie oderwać w celu zbadania powierzchni. Przetnij jedną nerkę na pół wzdłuż długiej osi, a drugą poprzecznie. Wszelkie ziarnistości w środku mogą wskazywać na obecność kryształów lub osadów mineralnych. Na koniec usuń wątrobę, która ma ciemnoczerwony kolor, a jej brzegi powinny być gładkie z chrupiącą krawędzią. Należy zachować ostrożność podczas obchodzenia się z wątrobą, ponieważ jest to krucha tkanka. Każde zakłócenie integralności narządu spowoduje wyciek krwi do jamy ciała i zasłonięcie innych narządów.
Aby usunąć wątrobę, najpierw delikatnie odbij płaty od przepony i wykonaj przecięcie przez naczynia krwionośne przed strukturą. Następnie odbij wątrobę z powrotem w kierunku przepony i chwyć włóknisty węzeł, który łączy wszystkie płaty centralnie. Na koniec podnieś narząd, zrywając wszystkie przyczepy do przewodu pokarmowego i żołądka.
Żeński układ rozrodczy składa się z macicy i jajników. Macica jest krótką strukturą w kształcie litery Y z rogami rozciągającymi się w obu kierunkach. Rogi kończą się na jajowodach i jajnikach - znajdujących się tuż poniżej nerek. Jajniki będą miały szorstką powierzchnię ze względu na różne etapy dojrzewania pęcherzyków.
Aby usunąć jajniki, przetnij przyczepy tętnicze z przodu, a jajowód z tyłu. Aby usunąć macicę, delikatnie chwyć i przetnij poniżej szyjki macicy. Po cięciu unieś ciało i rogi macicy, zrywając wszelkie przyczepy w jamie ciała.
U samców można również zaobserwować gruczoły napletkowe znajdujące się tuż przed napletkiem. Wydają się duże i mają kolor od szarego do żółtawego z pienistym wyglądem. Usuwanie i mocowanie tych gruczołów jest podobne do gruczołów podżuchwowych. Ponadto męski układ rozrodczy składa się z pęcherzyków nasiennych, gruczołu krokowego i jąder. Pęcherzyki nasienne są białymi, "baranimi rogami" strukturami położonymi przed pęcherzem moczowym i przyczepionymi na linii środkowej gruczołu krokowego.
Gruczoł krokowy - zwykle jasnobrązowy - znajduje się wokół pęcherza moczowego u podstawy. Aby uwidocznić jądra, chwyć poduszeczki tłuszczowe brzucha znajdujące się w dolnej części brzucha i pociągnij je do przodu. Spowoduje to wyciągnięcie jąder z moszny, aby umożliwić badanie. Powierzchnia powinna być gładka z widocznym na niej drobnym unaczynieniem.
Najądrze znajduje się wzdłuż dolnego brzegu jądra i zwęża się ku górze. Nasieniowód jest przyczepiony do końca najądrza i prowadzi z powrotem do prostaty. Aby usunąć jądra, odetnij przyczep na mosznie i przetnij nasieniowody. Aby usunąć prostatę i pęcherzyki nasienne, chwyć podstawę pęcherza moczowego i unieś, jednocześnie odcinając przyczepy pod prostatą.
Przechodząc do narządów w obrębie klatki piersiowej. Aby odsłonić ważne struktury, zdejmij membranę z mocowania do żeber. Następnie przetnij klatkę piersiową bocznie po obu stronach, aż do szczytu mostka manubrium, a następnie odbij kości czaszki, aby uwidocznić narządy klatki piersiowej.
Płuca mają zwykle jasnoróżowy kolor, gąbczastą teksturę i gładką powierzchnię. Jednak eutanazja z użyciem CO2 może powodować krwotoki płucne skutkujące ciemnoczerwonymi plamami, które mogą pokrywać całą powierzchnię płuc.
Serce jest ciemnoczerwone, a komory są muskularne, które są jędrne w dotyku. Przedsionki są koloru ciemniejszego czerwonego i znajdują się w górnej części komór. Są znacznie mniej muskularne i wydają się wiotkie. Cienka półprzezroczysta błona zwana workiem osierdziowym otacza serce.
Grasica znajduje się przed sercem i znajduje się nad tchawicą. Powinien mieć gładką konsystencję. Możesz zobaczyć tchawicę, jak opisano wcześniej, a przełyk to bardzo cienka rurka, która leży bezpośrednio za tchawicą i za sercem i przechodzi przez przeponę do żołądka.
Aby usunąć narządy w klatce piersiowej, zacznij od uchwycenia tchawicy tuż nad grasicą i wykonaj prostopadłe cięcie tuż przed kleszczami. Utrzymując chwyt, podnieś tchawicę doogonowo do góry i odetnij wszelkie przyczepy płuc do powierzchni kręgosłupa w klatce piersiowej. Przełyk może wymagać przecięcia, aby móc podnieść serce i płuca z jamy klatki piersiowej
Po usunięciu serca dla organizmu, przepłucz je solą fizjologiczną, aby usunąć resztki krwi i skrzepy, lub wypełnij je utrwalaczem przez aortę. Po wycięciu płuc umieść luźną ligaturę wokół tchawicy. Następnie nawlecz igłę przymocowaną do strzykawki zawierającej utrwalacz do światła tchawicy i dokręć ligatrę. Następnie wstrzyknąć utrwalacz, aż płuca zostaną napompowane. Na koniec wyjmij igłę i dokręć ligaturę, aby zapobiec wyciekowi.
Mając ten powiew wiedzy na temat sekcji zwłok gryzoni i zbierania tkanek, przyjrzyjmy się niektórym z obecnych eksperymentów laboratoryjnych obejmujących te procedury.
Diagnostyczna sekcja zwłok jest częstym punktem końcowym w eksperymentach z przerzutami do raka. W tym przykładzie badacze wstrzyknęli komórki rakowe do śledziony gryzonia, a następnie, trzydzieści do sześćdziesięciu dni później, przeprowadzili sekcję zwłok, która ujawniła znaczne przerzuty do wątroby.
Po ekstrakcji tkanek często następuje analiza histologiczna, która pomaga w badaniu mikroskopowej anatomii próbki. Postępując zgodnie z protokołem utrwalania, osadzania, cięcia i barwienia tkanek, naukowcy są w stanie badać mikroskopijne struktury w tych narządach i odkrywać efekt interwencji genetycznych lub farmakologicznych na poziomie atomowym.
Czasami naukowcy usuwają tkanki, aby zbadać procesy fizjologiczne, takie jak angiogeneza. Tutaj eksperymentatorzy uzewnętrznili tkankę krezkową szczura, aby stymulować wzrost naczyń krwionośnych. Następnie pobrali kilka skrawków i potraktowali je markerami, które barwią komórki dowolnego naczynia krwionośnego, aby zbadać dynamikę komórkową zaangażowaną we wzrost sieci naczyniowej.
Właśnie obejrzałeś film JoVE, w którym szczegółowo opisano etapy diagnostycznej sekcji zwłok i pobierania tkanek od zwierząt laboratoryjnych. Ważne jest, aby stosować odpowiednie techniki usuwania i konserwacji narządów, tak aby procedura ekstrakcji nie miała wpływu na interpretację zebranych danych. Jak zawsze, dziękujemy za oglądanie!
View the full transcript and gain access to JoVE Science Education videos
Q1: Why is necropsy necessary when alternative research methods are available?
Necropsy is essential when new approach methodologies like organ-on-chip systems, organoids, and in silico models cannot capture whole-body effects such as metastasis, long-term toxicity, or causes of unexpected death. These alternatives lack the complexity to replicate systemic interactions, making necropsy critical for comprehensive postmortem analysis and understanding disease progression in living organisms.
Q2: What is the purpose of using 10% neutral buffered formalin in tissue preservation?
Neutral buffered formalin is the standard fixative used to preserve collected tissues for histological examination. It prevents tissue decay, autolysis, and putrefaction while stopping ongoing biochemical reactions and increasing mechanical strength and stability. Proper fixation is critical because tissue samples must be approximately 0.5-1 cm thick to allow sufficient penetration of the fixative solution.
Q3: How does the euthanasia method impact tissue quality in necropsy procedures?
The euthanasia method significantly affects sample quality. Carbon dioxide is commonly used because it causes animals to lose consciousness before pain perception, minimizing distress. However, CO2 euthanasia can cause fluid accumulation in lungs and trachea, appearing as frothy clear fluid, and may result in pulmonary hemorrhages visible as dark red splotches on lung surfaces, affecting histological interpretation.
Q4: What is blunt dissection and why is it important during necropsy?
Blunt dissection is a technique where scissors are used to spread tissues rather than cut them, with closed tips pushed into tissue and then opened to split along natural planes. This method requires patience and a delicate touch because it separates structures without cutting, preventing damage to adjacent organs and blood vessels that could compromise sample integrity and obscure pathological findings.
Q5: What organs should be examined in the abdominal cavity during necropsy?
Key abdominal organs include the spleen, stomach, small intestines (duodenum, jejunum, ileum), large intestine, cecum, pancreas, kidneys, and liver. Each organ requires careful observation for abnormalities in size, color, texture, or contents. The mesentery anchoring intestines should be examined for enlarged lymph nodes and masses. Changes in these organs may indicate inflammation, obstruction, infection, or other pathology affecting study results.
Q6: How are reproductive organs harvested differently in male and female rodents?
In females, the Y-shaped uterus with extending horns and ovaries located below kidneys are removed by cutting arterial attachments and the fallopian tube. In males, the seminal vesicles, prostate gland, and testes are harvested by grasping abdominal fat pads to expose testes, then cutting scrotal attachments and the vas deferens. Both require careful examination for changes in size, symmetry, color, or texture indicating disease.
Q7: What special technique is required when removing and preserving lungs during necropsy?
After lung excision, a loose ligature is placed around the trachea. A needle attached to a syringe containing fixative is threaded into the trachea lumen, the ligature is tightened, and fixative is slowly injected until lungs are gently inflated without overdistension. This crucial step prevents alveolar collapse and allows accurate histological assessment of lung tissue structure and pathology.
Chapters in this video
0:00
Overview
0:53
Preparatory Steps
3:52
External and Internal Gross Examination
9:13
Abdominal Organs
14:20
Reproductive System
16:56
Thoracic Organs
19:54
Applications
20:53
Summary
Videos from this collection: