Why is sterile tissue harvest important in laboratory animal research?

Sterile tissue harvest prevents contamination of cells and organs collected from research animals, which is essential for cell and tissue cultures, protein and RNA analysis, and metabolic profiling. Using harvested tissues for in vitro experiments reduces overall animal usage in research, supporting the replacement principle of the 3 R's framework for humane research practices.

What equipment and preparation are needed before starting a sterile tissue harvest?

The procedure requires a laminar flow hood running for at least 15 minutes before use. Disinfect the hood with 70% alcohol and place wet paper towels inside. Arrange sterile instruments in order of use from left to right to maintain unidirectional workflow. The sterile technician must wear a sterile gown and two pairs of sterile surgical gloves covering the wrists to prevent skin cell contamination.

How are abdominal organs like the liver and spleen removed during sterile harvest?

For the spleen, position the animal in right lateral recumbency and cut directly over the organ, gently retracting it while avoiding punctures. For the liver, place the animal in dorsal recumbency, reflect it away from the diaphragm, and carefully sever membranes and blood vessels. The liver is fragile and easily punctured, so handle it carefully to prevent excessive blood release that could compromise tissue quality.

What is the proper technique for harvesting the heart and lungs together?

Place the animal in dorsal recumbency and open the thoracic cavity by cutting through the abdominal muscle and diaphragm. Puncture the diaphragm at the lateral rib cage and extend cuts to the sternum. Grasp the trachea with forceps and sever it with scissors, then lift and remove lung attachments from the spinal surface until the heart and lungs can be lifted free from the chest cavity.

How is the brain harvested using aseptic technique?

Strip the skin from the body and over the skull, then saturate with alcohol and remove outer gloves. Make a cut along the midline from the cervical area to the nose. Using dedicated sterile scissors, cut through the spine at the skull base and along the midline through the foramen magnum. Lever the parietal bones away, disrupt nerve attachments with a spatula, and break olfactory bulb attachments with forceps before dropping the brain into sterile media.

What research applications use sterile tissue harvest techniques?

Neural stem researchers extract tissue from mouse neonatal brains to study stem cell development and cancer progression in vitro. Metabolic profiling studies analyze tissue metabolites using nuclear magnetic resonance spectroscopy. Immunologists harvest lungs aseptically to measure bacterial load in infection models, collecting samples at multiple time points to track disease progression.

What roles do sterile and non-sterile technicians play during tissue harvest?

Both technicians wear masks and bouffants. The non-sterile technician euthanizes the animal, places the carcass on paper towels, soaks it with 70% alcohol, and opens sterile instrument packages without touching inner surfaces. The sterile technician wears a sterile gown and two pairs of gloves, removes instruments aseptically, and performs the actual organ extraction to maintain sterility throughout the procedure.

Pobieranie sterylnych tkanek

0 wyświetleń12:29 min.

1. Przygotowanie

Powszechnie używane materiały to 70% alkohol w butelce ze spryskiwaczem, sterylne igły o rozmiarze 20-25, dwie paczki sterylnych narzędzi nożyczek do tęczówki i kleszczyków do kciuków (jeden do skóry i jeden do tkanek wewnętrznych), ręczniki papierowe, sterylne rękawice chirurgiczne, sterylna szalka Petriego, sterylne podłoże i sterylna sól fizjologiczna.
Wentylator okapu powinien być włączony przez co najmniej 15 minut przed zabiegiem i powinien być zdezynfekowany 70% alkoholem.
Jeśli okap jest wyposażony w lampę sterylizacyjną UV, można go użyć do dalszej dezynfekcji powierzchni roboczej.
Do zakładania kaptura zakładane są czyste rękawice. Sprzęt jest ładowany do maski w kolejności, w jakiej będzie używany, zwykle od lewej do prawej. Pozwala to na prowadzenie pracy w jednokierunkowym przepływie pracy, co zapobiega zanieczyszczeniu czystych przedmiotów przez brudne przedmioty. Pozwoli to chronić pobrane tkanki lub narządy przed przypadkowym zanieczyszczeniem tuszami zwierzęcymi.
Sterylne opakowania narzędzi są otwierane z poszanowaniem sterylnego wnętrza opakowań. Aby zachować sterylność, opakowanie umieszcza się na środku stołu, a każda klapka jest otwierana bez przechodzenia przez sterylne pole lub wnętrze opakowania. Osoba niesterylna otwiera pierwszą górną klapę, odbijając ją dla siebie. Boczne klapki są następnie otwierane obiema rękami - po jednej na każdej klapie - i wyciągane z opakowania. Ostatnia klapka jest następnie ciągnięta w kierunku osoby otwierającej opakowanie, uważając, aby nie dotknąć żadnej z wewnętrznych powierzchni opakowania.
Umieść ręczniki papierowe w kapturze i zwilż je alkoholem.
Osoba niepłodna podda zwierzęta eutanazji.
Osoba bezpłodna nosi dwa komplety sterylnych rękawiczek chirurgicznych.
Osoba niesterylna kładzie tuszę na ręcznikach papierowych i całkowicie nasącza tuszę 70% alkoholem.
Używając jednego zestawu sterylnych nożyczek i kleszczy, wykonaj poziome nacięcie w skórze tuż przed napletkiem (u mężczyzn) lub kością miednicy (u kobiet). Unikaj przecinania mięśni brzucha.
Odłóż instrumenty na bok.

2. Pobieranie tkanek

Wykonaj małe nacięcie tuż przed miednicą u kobiet i powyżej napletka u mężczyzn.
Umieść kciuk pod nacięciem i chwyć krawędź czaszki cięcia. Drugą ręką mocno chwyć tylne kończyny i ogon, jednocześnie ciągnąc skórę w kierunku głowy.
Skóra oderwie się od ciała tuż nad tylnymi kończynami i może zostać wywrócona na lewą stronę nad głową i przednimi kończynami. To skutecznie usuwa zanieczyszczenia włosów podczas pobierania narządów.
Ponownie namocz ciało w 70% alkoholu i zdejmij powierzchowną parę rękawiczek, które nie są już sterylne.
Otwórz jamę brzuszną za pomocą sterylnych narzędzi.
1. Śledziona
  1. Aby pobrać śledzionę, ciało ustawia się w prawej pozycji bocznej.
  2. Śledzionę można uwidocznić przez mięsień brzucha.
  3. Cięcie nożycami wykonuje się bezpośrednio nad śledzioną.
  4. Śledziona jest delikatnie cofnięta z jamy ciała.
  5. Podczas przecinania wszystkich przyczepów między śledzioną, żołądkiem i tkanką trzustki należy unikać nakłuwania lub rozrywania narządu.
2. Wątroba
  1. Aby pobrać inne narządy jamy brzusznej, ciało umieszcza się w pozycji leżącej grzbietowej.
  2. Mięsień brzucha jest unoszony i odcinany, pozostawiając owalny otwór bezpośrednio nad jamą brzuszną.
  3. Po odsłonięciu jamy brzusznej odbij wątrobę doogonowo od przepony.
  4. Ostrożnie odciąć wszelkie błony łączące wątrobę z przeponą.
  5. Wykonaj cięcie prostopadłe do kręgosłupa przez naczynia krwionośne widoczne między wątrobą a przeponą.
  6. Podnieś wątrobę i odbij ją w kierunku przepony, aby uwidocznić przyczepy pod nią.
  7. Pojawią się cienkie błony łączące mniejsze płaty wątroby z żołądkiem i jelitem cienkim, które będą musiały zostać przerwane.
  8. Chwyć włóknisty węzeł w środku wątroby na jej spodzie i podnieś narząd, aby znaleźć wszystkie przyczepy. Oddziel wątrobę od leżących poniżej narządów i tkanek.
  9. Należy pamiętać, że wątroba jest delikatna i można ją łatwo przebić, co powoduje uwolnienie krwi; Dlatego należy obchodzić się z nim ostrożnie.
3. Nerki
  1. Po odsłonięciu jamy brzusznej popchnij jelita w lewo, aby uwidocznić prawą nerkę, lub w prawo, aby uwidocznić lewą nerkę.
  2. Aby usunąć nerkę, użyj ostrzy kleszczy, aby chwycić pod nerką, aby odizolować narząd od ciała. Za pomocą nożyczek lub ostrza skalpela odetnij nerkę od ciała. Wykonaj cięcie pod kleszczami, aby uniknąć uszkodzenia nerki.
  3. Po usunięciu nerki tłuszcz może zostać usunięty z narządu.
4. Jajnik
  1. Po odsłonięciu jamy brzusznej przesuń jelita czaszkowo, aby uwidocznić macicę.
  2. Podążaj za lewymi, a następnie prawymi rogami macicy do jajników.
  3. Jajniki są małe. U starszych zwierząt mogą być osadzone w tłuszczu.
  4. Wsuń kleszcze pod jajnik, aby odizolować go od ciała i odciąć od tłuszczu i jajowodu.
5. Jądra
  1. Po otwarciu jamy brzusznej delikatnie chwyć pachwinową poduszkę tłuszczową i pociągnij ją do przodu.
  2. Spowoduje to wyciągnięcie jądra z moszny.
  3. Po odsłonięciu jądra odetnij przyczepy do moszny i nasieniowodów, aby uwolnić je od ciała.
  4. Odbywa się to dla każdego jądra.
Klatka piersiowa jest otwierana w celu usunięcia narządów klatki piersiowej
1. Ciało umieszcza się w pozycji leżącej grzbietowej. Konieczne jest, aby skóra odbijała się znacznie powyżej głowy, jeśli mają zostać pobrane narządy klatki piersiowej.
2. Chwyć wyrostek mieczykowaty i unieś, aby umożliwić przecięcie mięśnia brzucha tuż doogonowo do żeber. Rozciągnij cięcie wzdłuż dolnej krzywizny klatki piersiowej po obu stronach. Umożliwi to wizualizację membrany.
3. Przebij przeponę, wykonując małe nacięcie w klatce piersiowej w najbardziej bocznym możliwym punkcie z każdej strony. Odetnij membranę od żeber.
4. Podnieś żebra na mieczykowatym, aby uwidocznić narządy klatki piersiowej.
5. Rozciągnij boczne cięcie do górnej części mostka po obu stronach i otwórz klatkę piersiową.
6. Serce i płuca najłatwiej usuwa się razem.
  1. Umieść kleszcze prostopadle do tchawicy i mocno chwyć tchawicę.
  2. Za pomocą nożyczek wykonaj cięcie prostopadłe do tchawicy tuż przed kleszczami. To cięcie powinno przeciąć tchawicę i przełyk.
  3. Nie poluzowując uchwytu tchawicy, podnieś tchawicę do góry i doogonowo. Odetnij wszelkie przyczepy płuc do powierzchni rdzenia w klatce piersiowej.
  4. Przełyk może wymagać przecięcia, aby móc podnieść serce i płuca z jamy klatki piersiowej.
7. Tylko serce
  1. Podnieś serce i ostrożnie przetnij worek osierdziowy.
  2. Aorta znajduje się w części czaszkowej serca po lewej stronie zwierzęcia.
  3. Trzymając aortę kleszczami, wykonaj cięcie dystalne do kleszczy, utrzymując chwyt aorty i serca.
  4. Chwyć aortę podczas przecinania żyły głównej przedniej oraz tętnic i żył płucnych.
  5. Podnieś serce z jamy klatki piersiowej za pomocą tętnicy aortalnej.
8. Inne narządy klatki piersiowej
  1. Narządy pobiera się w następującej kolejności, aby zachować sterylność narzędzi: grasicy, węzłów chłonnych i przełyku.
Mózg
1. W szczególnych okolicznościach mózg będzie musiał zostać pobrany w celu przeprowadzenia sterylnej hodowli.
2. Mózg jest pobierany jako ostatni po innych narządach.
3. W przypadkach, gdy mózg jest jedynym organem, który ma zostać pobrany, skóra nie jest zdzierana z ciała, ale zamiast tego wykonuje się nacięcie na karku i rozciąga się wzdłuż linii środkowej od grzbietowej części szyjki macicy do czubka nosa.
4. Po odciągnięciu skóry od czaszki na boki, odsłoniętą kość nasącza się 70% alkoholem i zdejmuje zabrudzone górne rękawice.
5. Używając dedykowanej pary sterylnych nożyczek do pobierania mózgu, wykonaj przecięcie kręgosłupa u podstawy czaszki.
6. Otwórz czaszkę, umieszczając czubek nożyczek w otworze wielkim i przecinając wzdłuż linii środkowej.
7. Użyj płaskiego końca ostrza nożyczek, aby podważyć kości ciemieniowe z dala od mózgu.
8. Ostrożnie zarąb przyczepy nerwowe w pniu mózgu i skrzyżowanie wzrokowe pod mózgiem, używając zamkniętych kleszczy kciukowych.
9. W podobny sposób wsuń zamknięte kleszcze do przodu pod mózg i zerwij przyczepy na opuszkach węchowych.
10. Mózg może być następnie upuszczony z czaszki do sterylnego podłoża.
11. Podczas pobierania mózgu jedna ręka będzie uważana za niesterylną, ponieważ chwyta skórę z czaszki odbitą pod brodą, aby ustabilizować głowę, podczas gdy czaszka jest cięta, a mózg usuwany.
Skóra
1. Tkanka sutka
  1. Tkanka sutka znajduje się od górnej części mostka w manubrium do otworu narządów płciowych na powierzchni brzusznej i rozciąga się bocznie po obu stronach, prawie dotykając powierzchni grzbietowej w biodrach i ramionach.
  2. Zbadaj tkankę sutka w poszukiwaniu mas, przebarwień lub nieprawidłowości. Samice karmiące piersią lub w ciąży będą miały zwiększoną objętość tkanki sutkowej i może być obecne mleko.
  3. Wycięcie gruczołów sutkowych wymaga uchwycenia krawędzi gruczołu kleszczami kciuka i zastosowania tępego rozwarstwienia w celu poluzowania przyczepów do skóry. Po oddzieleniu gruczołu od skóry można użyć nożyczek do tęczówki, aby przeciąć wszelkie pozostałe nasadki.
  4. Namocz odsłonięte powierzchnie w 70% alkoholu i rozpocznij pobieranie tkanek za pomocą nowego zestawu sterylnych narzędzi.
  5. Pobraną tkankę przepłukuje się sterylną solą fizjologiczną przed umieszczeniem jej w pożywce hodowlanej.
2. Guzy podskórne
  1. Często komórki nowotworowe są wielokrotnie wszczepiane zwierzętom, a następnie powstały guz jest pobierany w celu utrzymania linii komórek nowotworowych.
  2. Konieczne jest przeprowadzenie sterylnego pobierania tkanek guzów podskórnych przed naruszeniem integralności skóry.
  3. Jeśli masa uległa starciu lub jest martwicza, pobrana tkanka nie będzie dobrej jakości i może nie być sterylna.
  4. Ciało jest ustawione tak, aby odsłonić obszar zainteresowania. Skóra jest cięta wzdłuż jednej strony guza.
  5. Ostrożnie odbij skórę, aby odsłonić guz. Odłóż narzędzia do pielęgnacji skóry na bok i nasącz odsłonięte tkanki 70% alkoholem.
  6. Za pomocą nowych sterylnych narzędzi wypreparuj masę z leżących pod nią przyczepów i odetnij wszelkie naczynia krwionośne zasilające masę.
  7. Guz jest następnie umieszczany w pożywce hodowlanej.