6.10: Prawidłowe korzystanie z autoklawów

1. Nosić odpowiednie środki ochrony osobistej (PPE)

Warunki pracy pod wysokim ciśnieniem i temperaturą występujące podczas autoklawowania stwarzają potencjalne ryzyko poparzenia cieplnego lub wybuchu. Odpowiednie środki ochrony osobistej obejmują fartuch laboratoryjny, okulary ochronne, rękawice odporne na ciepło i buty z zakrytymi palcami; Należy je nosić podczas załadunku i rozładunku materiałów z autoklawu. Podczas pracy z próbkami cieczy należy nosić fartuch i osłonę twarzy jako dodatkowe środki ochrony indywidualnej.

2. Przygotowanie materiałów do załadunku

1. Zidentyfikuj materiał kompatybilny z autoklawem i materiał niekompatybilny w autoklawie
   Chociaż autoklawowanie jest powszechnie stosowaną i ekonomiczną metodą odkażania, nie wszystkie materiały nadają się do autoklawowania ze względu na warunki pracy pod wysokim ciśnieniem i temperaturą. Ogólnie rzecz biorąc, wszystkie materiały, które odparują lub stopią się pod wpływem pary pod wysokim ciśnieniem, nie są kompatybilne z autoklawowaniem. Obejmuje to materiały takie jak rozpuszczalniki organiczne, tworzywa sztuczne o niskiej odporności na ciepło, takie jak polistyren, polietylen i metale z wyłączeniem stali nierdzewnej. Nigdy nie sterylizuj w autoklawie łatwopalnych, żrących, toksycznych, reaktywnych lub radioaktywnych chemikaliów. Materiały kompatybilne z autoklawowaniem obejmują szkło Pyrex lub borokrzemianowe typu I, polipropylen, poliwęglan, rękawice, stal nierdzewną, końcówki do pipet, papier (wkładany do worków autoklawowych) i roztwory mediów.
2. Materiał opakowaniowy
   Po zidentyfikowaniu materiałów kompatybilnych z autoklawem ważne jest również odpowiednie opakowanie, które zapewnia bezpieczeństwo i wydajną autoklawizację. Oto podstawowe zasady dotyczące pakowania materiałów:
   1. Zawsze używaj pojemnika wtórnego wykonanego z polipropylenu lub stali nierdzewnej.
   2. W przypadku próbek płynnych napełnij fiolkę do około 1/2 objętości i poluzuj nakrętki lub użyj wentylowanych zakrętek. Nigdy nie napełniaj pojemników do 2/3 z całkowicie dokręconą nakrętką.
   3. Sprawdź szklane naczynie, aby upewnić się, że nie ma pęknięć. W przypadku stwierdzenia pęknięć wyrzuć szkło do odpowiedniego pojemnika. Nigdy nie sterylizuj w autoklawie znanego naczynia z potłuczonego szkła.
   4. Do pakowania odpadów zawsze używaj worków kompatybilnych z autoklawem. Worki powinny mieć na sobie taśmy oznaczeniowe i powinny być otwarte na końcach przed załadowaniem, aby para mogła dostać się do wnętrza worka.
   5. Nigdy nie przeciążaj worków ani pojemnika, aby zapewnić wystarczający przepływ pary do całkowitej sterylizacji. Pozostaw odstęp między elementami.
   6. Nie mieszaj niekompatybilnych materiałów.
   7. Nigdy nie wkładaj ostrych przedmiotów do worka na odpady.

3. Załaduj materiał

1. Sprawdź wnętrze autoklawu, aby upewnić się, że nie ma potencjalnego zagrożenia ze strony poprzedniego użytkownika.
2. Wyczyść odpływ przed załadowaniem materiałów, aby umożliwić dobrą cyrkulację.
3. Upewnij się, że worki nie dotykają wewnętrznych ścianek autoklawu, aby uniknąć stopienia.
4. Ciecze i suche materiały wymagają różnych cykli i muszą być sterylizowane w autoklawie oddzielnie.
5. Mocno zamknij drzwi.

4. Obsługa autoklawu

1. Tylko przeszkolony personel powinien być dopuszczony do obsługi autoklawów. W razie potrzeby zapoznaj się z instrukcją obsługi sprzętu, ponieważ protokoły operacyjne różnią się w zależności od różnych autoklawów.
2. Po upewnieniu się, że drzwiczki autoklawu są szczelnie zamknięte, ustaw temperaturę autoklawowania na 121 °C i utrzymuj ciśnienie co najmniej 15 psi.
3. Aby ustawić czas i cykl autoklawu, należy wziąć pod uwagę następujące czynniki:
   1. Zalecenia dotyczące sprzętu z instrukcji producenta.
   2. Rodzaj załadowanych materiałów wewnątrz: suche lub płynne.
   3. Ilość załadowanego materiału (materiałów).
   4. Kształt i rozmiar zastosowanego pojemnika.
   5. Przewodność cieplna pojemnika i materiałów.
   6. Cel dekontaminacji.

5. Rozładunek materiału (ów) autoklawowanego

1. Nosić odpowiednie środki ochrony osobistej, jak opisano powyżej.
2. Upewnij się, że temperatura i ciśnienie w autoklawie powróciły do bezpiecznego zakresu.
3. Stań za drzwiami i ostrożnie otwórz drzwi, aby uwolnić resztki pary z autoklawu do pomieszczenia.
4. Pozostaw materiały wewnątrz autoklawu na 10 minut, aby uwolnić parę lub gorące powietrze uwięzione wewnątrz materiału.
5. Nie potrząsaj żadnym płynnym materiałem podczas wyjmowania go z autoklawu. W razie potrzeby oznacz materiał jako gorący, aby uniknąć oparzeń cieplnych osoby, która może być potencjalnie nieświadoma faktu, że materiał został niedawno autoklawowany.
6. Poczekaj, aż materiał ostygnie do temperatury pokojowej przed transportem w laboratorium lub poza laboratorium. W obu przypadkach należy upewnić się, że używasz odpowiednich zabezpieczeń do transportu.
7. Zapisz szczegóły dotyczące materiałów i warunków autoklawowania w dzienniku użytkownika.

Autoklawowanie jest jedną z najczęściej stosowanych metod w laboratorium w celu dekontaminacji.

Wielu naukowców, w szczególności tych pracujących z próbkami biologicznymi, potrzebuje wysterylizowanego sprzętu i mediów, a autoklawy zapewniają szybki i ekonomiczny sposób odkażania materiałów. Używają pary wodnej w wysokich temperaturach i pod ciśnieniem do zabijania mikroorganizmów. Jednak ze względu na te ekstremalne warunki należy ich używać ostrożnie.

Ten film zilustruje, jak działają autoklawy i jak prawidłowo z nich korzystać.

W autoklawie materiały są podgrzewane parą wodną do temperatury 121 stopni Celsjusza pod ciśnieniem co najmniej 15 psi. Po co najmniej 30 minutach warunki te odwodnią i zabiją komórki.

Autoklawy mogą sterylizować zarówno materiały płynne, jak i stałe, ale należy wziąć pod uwagę różne ustawienia pracy. Ciecze wymagają dłuższego czasu niż ciała stałe, aby usunąć parę, aby zapobiec gwałtownemu wrzeniu. Ponadto większe ilości materiałów płynnych potrzebują więcej czasu, aby nagrzać się do odpowiedniej temperatury.

Nie wszystkie materiały są w stanie wytrzymać temperatury panujące wewnątrz autoklawu. Dlatego nigdy nie sterylizuj w autoklawie niczego, co topi się, pali, jest wybuchowe lub płyny, które wyparują. Nie należy również autoklawować toksycznych lub radioaktywnych chemikaliów.

Teraz pokażemy Ci, jak przygotować próbki do autoklawu i jak go obsługiwać.

Najpierw wybierz materiały, które będziesz sterylizować w autoklawie i używaj tylko kompatybilnych pojemników i instrumentów. Do autoklawowania można używać Pyrexu, szkła borokrzemianowego, stali nierdzewnej, polipropylenu i poliwęglanu.

Kompatybilne są również inne popularne materiały laboratoryjne, takie jak końcówki i pudełka do pipet. Papier można sterylizować w autoklawie w workach kompatybilnych z autoklawem.

Odpady stałe można również sterylizować w autoklawie w odpowiednim worku. Zostaw miejsce w tej torbie, aby umożliwić cyrkulację pary i związać końce. Na koniec, przed sterylizacją w autoklawie, upewnij się, że utworzyłeś mały otwór w torbie, aby umożliwić przedostawanie się pary.

W przypadku mediów wodnych i innych kompatybilnych próbek cieczy należy użyć nienaruszonego pojemnika bez pęknięć. Napełnij pojemnik mniej więcej do połowy i nigdy nie więcej niż dwie trzecie.

Aby przewietrzyć gazy z pojemnika na płyn, poluzuj nakrętkę. Jeśli nie ma nakrętki, przykryj luźno folią aluminiową, aby zapobiec zanieczyszczeniu autoklawowanego materiału.

Umieść wszystkie materiały w pojemniku wtórnym wykonanym z polipropylenu lub stali nierdzewnej. Oddziel materiały stałe i ciekłe do sterylizacji w autoklawie. Pozostaw przestrzeń między materiałami i nie przepełniaj pojemnika.

Na koniec przymocuj kawałek taśmy autoklawu do wszystkich materiałów. Ta taśma ma wskaźniki wrażliwe na temperaturę, które zmienią kolor na czarny, jeśli zostanie osiągnięta wystarczająca temperatura.

Podczas korzystania z autoklawu należy nosić odpowiednie środki ochrony osobistej, aby chronić przed ryzykiem związanym z wysoką temperaturą i ciśnieniem. Obejmuje to standardowe okulary ochronne PPE, fartuchy laboratoryjne oraz buty z zakrytymi palcami i rękawice żaroodporne. Używaj fartucha i osłony twarzy podczas pracy z próbkami cieczy.

W autoklawie najpierw otwórz drzwi i sprawdź, czy nie ma w nich zagrożeń. Materiały płynne i suche należy ładować oddzielnie, ponieważ wymagają one różnych cykli autoklawu.

Aby zapobiec topieniu się, upewnij się, że materiały nie dotykają ścian. Zapewnij dobry przepływ ciepła, zachowując wystarczające odstępy między materiałami. Na koniec zamknij i uszczelnij drzwi.

Różne autoklawy mają różne instrukcje obsługi. Cykle można ustawić, ręcznie ustawiając temperaturę i czas lub wybierając z zaprogramowanej listy. Ogólnie rzecz biorąc, należy stosować cykle zalecane dla rodzaju materiału, który odkażasz.

Istnieją różne cykle dla ciał stałych i cieczy, a także dla różnych ilości materiałów i odpadów, które mają być autoklawowane. Podczas uruchamiania cyklu upewnij się, że temperatura osiągnęła co najmniej 121 stopni Celsjusza, a ciśnienie co najmniej 15 psi.

Po zakończeniu cyklu upewnij się, że ciśnienie wróciło do zera, a autoklaw ostygł. Ostrożnie otwórz drzwi, aby wypuścić resztki pary. Następnie pozostaw materiały na 10 minut, aby uwolnić gorące gazy. Taśma autoklawu powinna mieć teraz czarne paski lub napis autoklawowany, chociaż nie jest to gwarancją, że sterylizacja miała miejsce.

Nosząc odpowiednie środki ochrony osobistej, usuń materiały, uważając, aby nie wstrząsnąć żadnymi próbkami płynów. Zanotuj swoje użycie w dzienniku, w tym rodzaj substancji i wszelkie szczególne okoliczności w przypadku ich wystąpienia. Na koniec przetransportuj materiały w bezpieczne miejsce lub okap z przepływem laminarnym w celu ostygnięcia.

Właśnie obejrzałeś wprowadzenie JoVE do autoklawów. Powinieneś teraz zrozumieć, jakie materiały można sterylizować w autoklawie, jak je przygotować i jak bezpiecznie korzystać z instrumentu. Dzięki za oglądanie!