Name: Rozprzestrzenianie się człowieka zarodkowych komórek macierzystych (ES) Cells (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 52 s
Description: Poznaj techniki hodowli i rozprzestrzeniania ludzkich komórek macierzystych ES przy użyciu kolagenazy. Metoda ta umożliwia utrzymanie linii komórkowych H1 i H9 oraz badanie ich zachowań w kulturze.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Kawasaki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+midbrain+dopaminergic+neurons+from+ES+cells+by+stromal+cell-derived+inducing+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Induction of midbrain dopaminergic neurons from ES cells by stromal cell-derived inducing activity.</a> Neuron. 28, 31-40 (2000).</li>
<li>Perrier, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+of+midbrain+dopamine+neurons+from+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Derivation of midbrain dopamine neurons from human embryonic stem cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 12543-12548 (2004).</li>
<li>Pruszak, J., Isacson, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+into+dopaminergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Directed differentiation of human embryonic stem cells into dopaminergic neurons.</a> , John Wiley and Sons. (2007).</li>
<li>Pruszak, J., Sonntag, K. C., Aung, M. H., Sanchez-Pernaute, R., Isacson, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Markers+and+methods+for+cell+sorting+of+human+embryonic+stem+cell-derived+neural+cell+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Markers and methods for cell sorting of human embryonic stem cell-derived neural cell populations.</a> Stem Cells. 25, 2257-2268 (2007).</li>
<li>Sonntag, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+yield+of+neuroepithelial+precursors+and+midbrain-like+dopaminergic+neurons+from+human+embryonic+stem+cells+using+the+bone+morphogenic+protein+antagonist+noggin%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Enhanced yield of neuroepithelial precursors and midbrain-like dopaminergic neurons from human embryonic stem cells using the bone morphogenic protein antagonist noggin.</a> Stem Cells. 25, 411-418 (2007).</li>
<li>Kawasaki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+dopaminergic+neurons+and+pigmented+epithelia+from+primate+ES+cells+by+stromal+cell-derived+inducing+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Generation of dopaminergic neurons and pigmented epithelia from primate ES cells by stromal cell-derived inducing activity.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 99, 1580-1585 (2002).</li>
<li>Ko, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+embryonic+stem+cell-derived+neural+precursors+as+a+continuous%2C+stable%2C+and+on-demand+source+for+human+dopamine+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Human embryonic stem cell-derived neural precursors as a continuous, stable, and on-demand source for human dopamine neurons.</a> J Neurochem. 103, 1417-1429 (2007).</li>
<li>Hong, S., Kang, U. J., Isacson, O., Kim, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+precursors+derived+from+human+embryonic+stem+cells+maintain+long-term+proliferation+without+losing+the+potential+to+differentiate+into+all+three+neural+lineages%2C+including+dopaminergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Neural precursors derived from human embryonic stem cells maintain long-term proliferation without losing the potential to differentiate into all three neural lineages, including dopaminergic neurons.</a> J Neurochem. , (2007).</li>
<li>Zhang, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+subtype+specification+from+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Pathol%22%5BJournal%5D)">Neural subtype specification from embryonic stem cells.</a> Brain Pathol. 16, 132-142 (2006).</li>
<li>Pankratz, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+neural+differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+via+an+obligated+primitive+anterior+stage%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Directed neural differentiation of human embryonic stem cells via an obligated primitive anterior stage.</a> Stem Cells. 25, 1511-1520 (2007).</li>
<li>Lazzari, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+derivation+of+neural+rosettes+from+cloned+bovine+blastocysts%3A+a+model+of+early+neurulation+events+and+neural+crest+specification+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Direct derivation of neural rosettes from cloned bovine blastocysts: a model of early neurulation events and neural crest specification in vitro.</a> Stem Cells. 24, 2514-2521 (2006).</li>
<li>Pomp, O., Brokhman, I., Ben-Dor, I., Reubinoff, B., Goldstein, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+peripheral+sensory+and+sympathetic+neurons+and+neural+crest+cells+from+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Generation of peripheral sensory and sympathetic neurons and neural crest cells from human embryonic stem cells.</a> Stem Cells. 23, 923-930 (2005).</li>
</ol>

rozprzestrzenianie się człowieka zarodkowych komórek macierzystych (es) cells

Propagation of Human Embryonic Stem (ES) Cells

Rozprzestrzenianie się człowieka zarodkowych komórek macierzystych (ES) Cells

Tak, nazywam się Lauren Deon. Kieruję placówką Human Amgen stem cell co w MGH. Tak, jestem Lauren, kieruję placówką Human AM stem cell co w MGH.Pracuję z ludzkimi komórkami macierzystymi Amgen od kilku lat, odkąd odbywałem staż podoktorski w laboratorium George'a De cztery lata temu. Obecnie dysponujemy dwiema liniami komórkowymi, H1 i H9, które obie pochodzą z linii Y. Sposób, w jaki namnażamy lub utrzymujemy te komórki w hodowli, a a przynajmniej sposób, w jaki dokonujemy ich pasażowania, polega na wykorzystaniu kolagenazy.Zazwyczaj w ciągu pierwszych kilku pasażów po wysianiu komórek stosuję technikę wycinania kolonii. W ten sposób pod mikroskopem mogę sprawdzić, które kolonie są prawidłowe, zróżnicowane i mają odpowiedni kształt; zbieram tylko takie kolonie, dzielę je na kilka fragmentów i przenoszę do nowej płytki. Kolonii, które wyglądają na niedostatecznie zróżnicowane, po prostu nie pobieram.Inną metodą pasażowania komórek jest zastosowanie trypsyny. W tym przypadku z tej techniki nie korzystam. Uważam, że kolagenaza jest nieco bezpieczniejsza, ponieważ ludzkie komórki macierzyste nie preferują indywidualizacji ani pozostawania w izolacji.Zatem w przypadku stosowania trypsyny, jeśli będzie ona używana zbyt długo, na przykład przez trzy do czterech minut, co jest praktyką przy innych typach komórek, ludzkie komórki macierzyste zostaną odseparowane, a większość z nich obumrze, ulegnie różnicowaniu lub nie przywrze do podłoża. Idea polega zatem na tym, aby utrzymać komórki w formie skupisk. Nie powinny one pozostawać pojedynczo w kolbie.Zatem stosując kolagenazę, zaletą jest utrzymanie komórek w stanie zbliżonym do naturalnego. Stosując chipsy, dokonuje się selekcji komórek, które przeżyją ten bardzo rygorystyczny proces opsonizacji. Komórki te charakteryzują się zazwyczaj bardzo wysoką zdolnością do proliferacji.W ten sposób można zaadaptować komórki do procesu trypsynizacji. Problemem jest jednak fakt, że niektóre komórki zachowują się inaczej i dzielą się znacznie szybciej. Istnieje ryzyko, że w wyniku tak intensywnego procesu podziałów mogą wystąpić pewne anomalie chromosomalne.Twierdzi Pan zatem, że proces ten może prowadzić do selekcji komórek w hodowli, faworyzując te o najwyższej zdolności do proliferacji. Zgadza się. Są one bardziej aktywne i prawdopodobnie wykazują wyższy wskaźnik przeżywalności niż inne komórki. Zatem po proliferacji, w zasadzie po hodowli z wykorzystaniem trypsyny przez kilka pasażów, otrzymujemy inną hodowlę o odmiennych właściwościach.Zatem trudno jest ustalić, czy są one całkowicie identyczne. Jeśli przeprowadzi się standardowy test, powiedzmy, sprawdzając markery, typowe markery komórek w pełni zróżnicowanych, takie jak OC cztery, nano jeden 60 SC cztery C, C3, wszystkie te cząsteczki mogą być nadal ekspresjonowane. Jeśli przeprowadzi się formowanie sfer, komórki te mogą nadal ulegać zróżnicowaniu i formować się jak normalne komórki.Analizując kariotyp, można zauważyć pewne nieprawidłowości, ale można również otrzymać kariotyp prawidłowy. Przewaga selekcyjna może wynikać z samej mutacji, której nie da się dostrzec podczas badania kariotypu. Sądzę zatem, że sam fakt, iż rosną one znacznie szybciej, jest nieco bardziej niepokojący.A jeśli w pewnym momencie chcielibyśmy wykorzystać te komórki do transplantacji, to zdecydowanie nie użyłbym tego typu komórek. Dobrze. Czy mógłbyś mi zatem powiedzieć, jakie są główne problemy techniczne związane z zastosowaniem tej techniki w pasażowaniu komórek? Czyli przy użyciu S, tak.Trwa to po prostu nieco dłużej i ponadto, ponieważ komórki nie namnażają się tak szybko, uzyskanie wysokiej liczby komórek do przeprowadzenia eksperymentu zajmuje znacznie więcej czasu. Powiedziałbym więc, że jest to po prostu mniej wygodne. Czy mógłbyś powiedzieć mi kilka słów o celach swojego eksperymentu?W jaki sposób wykorzystuje się komórki CS? Moim głównym celem w tym projekcie jest uzyskanie komórek śródbłonka z ludzkich komórek macierzystych AB. Zamierzamy w ten sposób umożliwić wytwarzanie krwi.Współpracujemy w dużym stopniu z laboratoriami bioinżynierii tkankowej, a jednym z ich celów jest wytwarzanie tkanek in vitro. Jednak jednym z ograniczeń jest brak naczyń krwionośnych w tych tkankach. Zatem, jeśli będziemy w stanie wprowadzić komórki śródbłonka do tej tkanki, uzyskamy lepszy wzrost tej tkanki.Więc pomysł polega na tym, że znane jest tylko kilka źródeł komórek śródbłonka, takich jak krew obwodowa lub krew tętnicza, ale interesujące byłoby posiadanie innego źródła komórek, takich jak ludzkie uszy. Przewagą jest to, że ponieważ komórki z ludzkich uszu mogą być namnażane niemal w nieskończoność, można by modyfikować te komórki, stworzyć system indukowalny i być w stanie go wykorzystać. Następnie w końcowym produkcie, w Twoich komórkach materiałowych, w tym przypadku.

propagation-of-human-embryonic-stem-es-cells

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Zdolność ludzkich embrionalnych komórek macierzystych do samoodnawiania oraz różnicowania się we wszystkie typy komórek organizmu sprawia, że stanowią one ogromną obietnicę zarówno w zastosowaniach medycznych, jak i jako narzędzie badawcze służące do odpowiedzi na fundamentalne pytania dotyczące rozwoju i chorób. W niniejszym materiale przedstawiamy zwięzły, szczegółowy protokół izolacji ludzkich embrionalnych komórek macierzystych z embrionów poprzez immunosurgicalną izolację masy komórkowej...

Wytwarzanie ludzkich embrionalnych komórek macierzystych metodą immunochirurgii

Różnicowanie ESC zbiega się z charakterystycznymi dla danego typu komórek zmianami w strukturze i składzie chromatyny. Wykrycie tych zmian dostarcza cennych informacji na temat mechanizmów definiujących pluripotencję oraz różnicowanie komórek. Immunoprecypitacja chromatyny (ChIP) stanowi wartościową metodę analizy mechanizmów molekularnych leżących u podstaw różnicowania komórek macierzystych. <br...

Immunoprecypitacja chromatyny z ludzkich embrionalnych komórek macierzystych

W niniejszym filmie zaprezentowano sposób utrzymania wzrostu ludzkich embrionalnych komórek macierzystych (hESCs) w warunkach bez komórek karmionek oraz sposób ciągłego pasażowania hESCs w warunkach bez komórek karmionek. Przedstawiono również potwierdzenie pluripotencji hESCs hodowanych bez komórek karmionek za pomocą mikroskopii immunofluorescencyjnej. Część 3 z 3.

Od MEF do Matrigelu 3: Pasażowanie hESC z Matrigelu na Matrigel

Kierowana różnicowanie hESC w konkretne komórki wzbudziło duże zainteresowanie w medycynie regeneracyjnej. Przedstawiamy zwięzły, szczegółowy protokół służący do określania losów wybranych hESC in vivo, który stanowi cenne narzędzie do charakteryzacji reagentów specyficznych dla tkanek w terapiach komórkowych.

Mapowanie losów ludzkich embrionalnych komórek macierzystych poprzez tworzenie potworniaków

Pomimo niedawnych postępów w modyfikacjach genetycznych, transfekcja ludzkich embrionalnych komórek macierzystych (HESCs) pozostaje procesem nieprzewidywalnym. Według naszej wiedzy, w literaturze nie opisano systematycznych i wydajnych metod transfekcji ludzkich indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych (iPSCs). W niniejszej pracy opisujemy niezawodne protokoły wydajnej transfekcji i nukleofekcji ludzkich iPSCs.

Transfekcja i nukleofekcja ludzkich indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych

Opracowaliśmy protokół indukcji neuroblastów bezpośrednio z pluripotencjalnych ludzkich embrionalnych komórek macierzystych utrzymywanych w ściśle określonych warunkach z zastosowaniem małych cząsteczek, co umożliwia pozyskanie dużej ilości ludzkich progenitorów neuronalnych oraz typów komórek neuronalnych rozwijającego się OUN w celu regeneracji tkanki nerwowej.

Efektywne wyprowadzanie ludzkich progenitorów neuronalnych i neuronów z pluripotencjalnych ludzkich embrionalnych komórek macierzystych z zastosowaniem indukcji małymi cząsteczkami

Test ekspresji genów jednokomórkowych jest potrzebny do zrozumienia heterogeniczności komórek macierzystych.

Profilowanie pojedynczych ludzkich embrionalnych komórek macierzystych za pomocą ilościowego RT-PCR

Reporterowe linie komórkowe oferują sposób na wizualizację, śledzenie i izolowanie interesujących komórek z heterogenicznych populacji. Jednak celowanie w geny za pomocą konwencjonalnej rekombinacji homologicznej w ludzkich embrionalnych komórkach macierzystych jest wyjątkowo nieefektywne. W tym miejscu opisujemy celowanie w locus czynnika transkrypcyjnego PITX3 specyficznego dla OUN za pomocą EGFP przy użyciu rekombinacji homologicznej wzmocnionej nukleazą palca cynkowego.

Ukierunkowanie genów na nukleazę palca cynkowego w ludzkich embrionalnych komórkach macierzystych

Przedstawiony tutaj jest protokół generowania jednokomórkowej hodowli ludzkich embrionalnych komórek macierzystych i ich późniejszego różnicowania w neuronalne komórki progenitorowe. Protokół jest prosty, solidny, skalowalny i odpowiedni do badań przesiewowych leków i zastosowań w medycynie regeneracyjnej.

Efektywne różnicowanie neuronalne przy użyciu hodowli jednokomórkowej ludzkich embrionalnych komórek macierzystych

Tutaj pokazujemy, jak w naszym laboratorium zawiesza barwy linii ludzkich zarodkowych komórek macierzystych.

Zamrażanie komórek ES człowieka

Poznaj techniki hodowli i rozprzestrzeniania ludzkich komórek macierzystych ES przy użyciu kolagenazy. Metoda ta umożliwia utrzymanie linii komórkowych H1 i H9 oraz badanie ich zachowań w kulturze.

Rozprzestrzenianie się człowieka zarodkowych komórek macierzystych (ES) Cells

Przeglądaj więcej filmów