Name: Sekcja mózgu naczelnych w przestrzeni stereotaktycznej (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-07-16T20:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 9 s
Description: Naucz się techniki blokowania mózgu naczelnych w przestrzeni stereotaktycznej. Metoda obejmuje przygotowanie głowy małpy, wykonywanie koronarnych cięć i pomiar struktur mózgowych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy chcieliby podziękować Ikiel Ptito za stałe wsparcie techniczne. Grant NSERC dla MP.

Część 1: Obróbka wstępna tkanki
<ol>
<li>Tkanka powinna zostać dobrze przepłukana paraformaldehydem, glutaraldehydem lub formaliną. Można to osiągnąć poprzez standardową perfuzję transkardialną, zazwyczaj stosowaną podczas pobierania innych organów. W niniejszym badaniu obiekt został głęboko uśpiony za pomocą chlorowodorku ketaminy (10 mg/kg, i.m.), uśmiercony przedawkowaniem pentobarbitalu sodu (25 mg/kg, i.v.) i poddany perfuzji transkardialnej 0.1 M PBS aż do całkowitego upuszczenia krwi. Następnie przez 5 min zastosowano 4% roztwór paraformaldehydu w PBS (~1 liter).</li>
</ol>
Część 2: Blokowanie stereotaktyczne
<ol>
<li>Przed umieszczeniem głowy w ramie stereotaktycznej należy wyznaczyć współrzędne zera płaszczyzny Horsley-Clarke/międzyusznej. Jest to teoretyczny punkt środkowy między uszami. Aby zmierzyć tę płaszczyznę, należy równomiernie dopasować pręty uszne w aparaturze, następnie umieścić ostrze skalpela w ramieniu manipulatora stereotaktycznego i zmierzyć punkt środkowy między prętami usznymi. Jest to istotne dla określenia miejsca blokowania tkanki w zależności od potrzeb badawczych. Po zakończeniu tego etapu czaszkę należy przygotować do unieruchomienia w aparacie stereotaktycznym.</li>
<li>Aby umieścić głowę w ramie stereotaktycznej, należy usunąć żuchwę za pomocą kleszczykostrugów do kości i skalpela. Dodatkowo należy usunąć skórę, mięśnie i tkankę łączną, aby odsłonić czaszkę. Po usunięciu tkanki łącznej z czaszki należy odsłonić mózg, usuwając fragmenty sklepienia czaszki (część blaszkowatą kości potylicznej, a także kości ciemieniowe i czołowe). W niniejszym eksperymencie część sklepienia czaszki została już usunięta. Należy uważać, aby nie usunąć całkowicie kości skroniowych, ponieważ kanały słuchowe muszą pozostać nienaruszone, aby można było umieścić głowę w ramie stereotaktycznej. Z odsłoniętego mózgu należy usunąć pozostałą oponę twardą. Czaszka jest teraz gotowa do umieszczenia w ramie stereotaktycznej.</li>
<li>W taki sam sposób, w jaki wykonuje się zabieg stereotaktyczny, należy wyregulować pręty oczne, podniebienne i uszne tak, aby głowa była stabilnie unieruchomiona w aparacie stereotaktycznym. Umieścić manipulator stereotaktyczny w wcześniej określonych współrzędnych przednio-tylnych (A/P) i przesunąć manipulator do bocznej części mózgu. Powoli opuścić ostrze do mózgu, całkowicie je wycofać, a następnie przesunąć w stronę przyśrodkową i ponownie opuścić ostrze. Powtarzać te dwa kroki, aż ostrze dotrze do bocznej części przeciwległej półkuli. Tak kończy się wykonanie pierwszego bloku czołowego. W przypadku kolejnych bloków czołowych należy przesunąć manipulator o 1cm w osi A/P i powtarzać czynność, aż cały mózg zostanie podzielony na bloki.</li>
</ol>
Część 3: Usuwanie mózgu z czaszki
<ol>
<li>Zdejmij głowę z zestawu stereotaktycznego i utrzymaj odsłonięty mózg w zagłębieniu dłoni. Aby unieruchomić mózg, delikatnie ułóż go w dłoni i oprzyj mały palec o płaty czołowe, co zminimalizuje przemieszczanie się mózgu wewnątrz czaszki. W celu zapobiegania wysychaniu powierzchni opon miękkich mózgu, przykryj go kawałkiem gazy nasączonej PBS. Mocno chwyć głowę za czaszkę i odłup pozostałe części kości potylicznej i skroniowej wraz z kręgosłupem. Odsłoni to podstawę oraz boczne powierzchnie mózgu. Na koniec usuń pozostałą część kości czołowej oraz kość nosową, co umożliwi dostęp do opuszek węchowych. Ważne jest, aby kość czołową usunąć na samym końcu, ponieważ podczas usuwania podstawy czaszki mózg lekko się przemieszcza, a płaty czołowe mogą zostać uszkodzone o poszarpane krawędzie kości czołowej. Wytnij i usuń pozostałą oponę twardą. Ostrożnie unieś przednią część mózgu, wsuń skalpel pod spód i oddziel mózg od czaszki.</li>
</ol>
Część 4: Pomiary
<ol>
<li>Przed zamrażaniem można wykonać szereg przydatnych pomiarów. Na przykład, za pomocą suwmiarki można zmierzyć oś A/P mózgu. Ponadto gęstość właściwą można określić poprzez zważenie mózgu, pomiar objętości metodą wypierania wody w cylindrze mierniczym, a następnie podzielenie masy przez objętość wypartej cieczy (Tabela 1).</li>
</ol>
Część 5: Zakończenie blokowania mózgu.
<ol>
<li>Zazwyczaj, gdy ostrze skalpela zostaje wprowadzone do mózgu, nie jest ono wystarczająco długie, aby całkowicie przeniknąć przez pełną rozciągłość grzbietowo-brzuszną organu. Po usunięciu mózgu i wykonaniu pomiarów makroskopowych, należy użyć ostrza do krojenia tkanek i dokończyć blokowanie mózgu aż do jego strony brzusznej (Rycina 2).</li>
<li>Przed zamrożeniem bloków konieczne jest zastosowanie krioprotekcji tkanki w stopniowanych roztworach sacharozy w buforze PBS (10%, 20% i 30%) utrzymywanych w temperaturze 4˚C, aż do momentu opadnięcia mózgu na dno. Zazwyczaj inkubacja w roztworze 10% trwa przez noc, w 20% od 2 do 3 dni, a w 30% dodatkowe 3 do 5 dni, zanim bloki opadną na dno naczynia. Zaleca się codzienną wymianę 30% roztworu sacharozy.</li>
</ol>
Część 6: Reprezentatywne wyniki
Po usunięciu mózgu z czaszki można wykonać szereg pomiarów morfologicznych. Obejmują one długość A/P, masę oraz gęstość właściwą (Tabela 1). Zazwyczaj dzielimy mózg na 6-7 bloków o wielkości 1cm (Rysunek 1). Każdy fragment jest następnie fotografowany (Rysunek 2) i może zostać dalej poddany sekcji w zależności od potrzeb badawczych lub przygotowany do zamrożenia w roztworach sacharozy o rosnącym stężeniu.
<table border="1">
<tbody>
<tr>
<td> Obiekt</td>
<td>Długość A/P (mm)</td>
<td>Masa (gramy)</td>
<td>Wyporność wody (ml)</td>
<td>Gęstość właściwa (g/ml)</td>
</tr>
<tr>
<td>O2303-2-1-1</td>
<td>64.3</td>
<td>28.1</td>
<td>24</td>
<td>1.171</td>
</tr>
<tr>
<td>O5180-1</td>
<td>71.3</td>
<td>38.7</td>
<td>34</td>
<td>1.138</td>
</tr>
<tr>
<td>O2708-3-1</td>
<td>62.8</td>
<td>28.7</td>
<td>26</td>
<td>1.104</td>
</tr>
<tr>
<td>O9184-4-2</td>
<td>65.3</td>
<td>29.5</td>
<td>24</td>
<td>1.229</td>
</tr>
<tr>
<td>N459-1-14-2</td>
<td>68.2</td>
<td>31.6</td>
<td>26</td>
<td>1.215</td>
</tr>
<tr>
<td>ŚREDNIA</td>
<td>66.38</td>
<td>31.32</td>
<td>26.8</td>
<td>1.171</td>
</tr>
<tr>
<td>ODCHYLENIE STANDARDOWE</td>
<td>3.38</td>
<td>4.33</td>
<td>4.17</td>
<td>0.052</td>
</tr>
</tbody>
</table>
Tabela 1. Pomiary morfologii makroskopowej prawej półkuli mózgu 5-miesięcznych małp z gatunku vervet
<img src="/files/ftp_upload/1259/1259fig1.jpg" alt="Schemat anatomii mózgu ze skalą przedstawiający struktury kory mózgowej do badań z zakresu neuronauki." data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="rycina 1"> <img src="/files/ftp_upload/1259/1259fig2.jpg" alt="Schemat anatomii mózgu; widok z boku z podziałem na sekcje; stosowany do badań i analiz z zakresu neuronauki." data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="rycina 1.5"> Rycina 1. Schematy płaszczyzn czołowych wykorzystywanych do blokowania mózgu. Przedstawiono przykład zewnętrznego mózgu dorosłego małpy zielonki. Przykład procedury blokowania. Linie pionowe są rozmieszczone co 1cm, co zazwyczaj pozwala na uzyskanie 7 bloków czołowych z każdej półkuli.
<img src="/files/ftp_upload/1259/1259fig3.jpg" alt="Sekcja anatomiczna mózgu, linijka jako skala, badanie edukacyjne nad porównaniem struktury mózgu." data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="rycina 2"> Rycina 2. Bloki tkanki mózgowej w przestrzeni stereotaktycznej.Z każdego bloku zostanie pobranych około 200 przekrojów o grubości 50µm. Przy takim schemacie próbkowania pobranych zostanie ponad 1200 przekrojów przez korę oraz dodatkowe 400-500 z móżdżku przy cięciu w płaszczyźnie czołowej.

<ol><li>Gallagher, M., Rapp, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+animal+models+to+study+the+effects+of+aging+on+cognition.+Annu+Rev+Psychol+48%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">The use of animal models to study the effects of aging on cognition. Annu Rev Psychol 48.</a> , 339-370 (1997).</li>
<li>Clancy, B., Darlington, R., Finlay, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translating+developmental+time+across+mammalian+species%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Translating developmental time across mammalian species.</a> Neuroscience. 105, 7-17 (2001).</li>
<li>Nowakowski, R. S., Rakic, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+site+of+origin+and+route+and+rate+of+migration+of+neurons+to+the+hippocampal+region+of+the+rhesus+monkey%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">The site of origin and route and rate of migration of neurons to the hippocampal region of the rhesus monkey.</a> J Comp Neurol. 196, 129-154 (1981).</li>
<li>Rakic, P., Bourgeois, J. P., Eckenhoff, M. F., Zecevic, N., Goldman-Rakic, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concurrent+overproduction+of+synapses+in+diverse+regions+of+the+primate+cerebral+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Concurrent overproduction of synapses in diverse regions of the primate cerebral cortex.</a> Science. 232, 232-235 (1986).</li>
<li>Granger, B., Tekaia, F., Le Sourd, A. M., Rakic, P., Bourgeois, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tempo+of+neurogenesis+and+synaptogenesis+in+the+primate+cingulate+mesocortex%3A+comparison+with+the+neocortex%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Tempo of neurogenesis and synaptogenesis in the primate cingulate mesocortex: comparison with the neocortex.</a> J Comp Neurol. 360, 363-376 (1995).</li>
<li>Zecevic, N., Rakic, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+layer+I+neurons+in+the+primate+cerebral+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Development of layer I neurons in the primate cerebral cortex.</a> J Neurosci. 21, 5607-5619 (2001).</li>
<li>Ervin, F. R., Palmour, R. M., Young, S. N., Guzman-Flores, C., Juarez, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Voluntary+consumption+of+beverage+alcohol+by+vervet+monkeys%3A+population+screening%2C+descriptive+behavior+and+biochemical+measures%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Biochem+Behav%22%5BJournal%5D)">Voluntary consumption of beverage alcohol by vervet monkeys: population screening, descriptive behavior and biochemical measures.</a> Pharmacol Biochem Behav. 36, 367-373 (1990).</li>
<li>Palmour, R. M., Mulligan, J., Howbert, J. J., Ervin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Of+monkeys+and+men%3A+vervets+and+the+genetics+of+human-like+behaviors%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Hum+Genet%22%5BJournal%5D)">Of monkeys and men: vervets and the genetics of human-like behaviors.</a> Am J Hum Genet. 61, 481-488 (1997).</li>
<li>Boire, D., Théoret, H., Ptito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stereological+evaluation+of+neurons+and+glia+in+the+monkey+dorsal+lateral+geniculate+nucleus+following+an+early+cerebral+hemispherectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Stereological evaluation of neurons and glia in the monkey dorsal lateral geniculate nucleus following an early cerebral hemispherectomy.</a> Exp Brain Res. 142, 208-220 (2002).</li>
<li>Bjugstad, K. B., Teng, Y. D., Redmond, D. E. J. r, Elsworth, J. D., Roth, R. H., Cornelius, S. K., Snyder, E. Y., Sladek, J. R. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+neural+stem+cells+migrate+along+the+nigrostriatal+pathway+in+a+primate+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Human neural stem cells migrate along the nigrostriatal pathway in a primate model of Parkinson's disease.</a> Exp Neurol. 211, 362-369 (2008).</li>
<li>Lemere, C. A., Beierschmitt, A., Iglesias, M., Spooner, E. T., Bloom, J. K., Leverone, J. F., Zheng, J. B., Seabrook, T. J., Louard, D., Li, D., Selkoe, D. J., Palmour, R. M., Ervin, F. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alzheimer%27s+disease+abeta+vaccine+reduces+central+nervous+system+abeta+levels+in+a+non-human+primate%2C+the+Caribbean+vervet%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Alzheimer's disease abeta vaccine reduces central nervous system abeta levels in a non-human primate, the Caribbean vervet.</a> Am J Pathol. 165, 283-297 (2004).</li>
<li>Mash, D. C., Staley, J. K., Doepel, F. M., Young, S. N., Ervin, F. R., Palmour, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+dopamine+transporter+densities+in+alcohol-preferring+vervet+monkeys%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Altered dopamine transporter densities in alcohol-preferring vervet monkeys.</a> Neuroreport. 7, 457-462 (1996).</li>
<li>Burke, M. W., Palmour, R. M., Ervin, F. R., Ptito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+reduction+in+frontal+cortex+of+primates+after+prenatal+alcohol+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Neuronal reduction in frontal cortex of primates after prenatal alcohol exposure.</a> Neuroreport. 20, 13-17 (2009).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Małpka z St. Kitts (Chlorocebus aethiops sabeus) jest naczelnym z Nowego Świata, u którego wzorce i tempo rozwoju kory oraz struktur podkorowych mózgu są podobne do ludzkich. Gatunek ten był wykorzystywany do modelowania złożonych zaburzeń behawioralnych występujących u ludzi, takich jak zachowania lękowe, nadciśnienie8, hemisferektomia9, choroba Parkinsona10, choroba Alzheimera11 oraz nadużywanie alkoholu12. W ostatnim czasie gatunek ten posłużył do badania...

<table><tbody><tr><td>Skalpel</td><td>Fine Science Tools</td><td>10003-12</td><td></td></tr><tr><td>Ostrza do skalpela</td><td>Fine Science Tools</td><td>10011-00</td><td></td></tr><tr><td>Nożyczki</td><td>Fine Science Tools</td><td>14090-11</td><td>Wystarczą dowolne nożyczki chirurgiczne</td></tr><tr><td>Kleszczyki kostne</td><td>Fine Science Tools</td><td>16121-14</td><td></td></tr><tr><td>Pinceta</td><td>Fine Science Tools</td><td>11027-12</td><td></td></tr><tr><td>Papier filtrujący</td><td>Fisher Scientific</td><td>09-924-150</td><td></td></tr><tr><td>Aparat stereotaktyczny</td><td>Kopf Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ostrze do krojenia tkanek</td><td>Thomas Scientific</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

disekcja mózgu naczelnych zwierząt niebędących ludźmi w przestrzeni stereotaksycznej

Dissecting the Non-human Primate Brain in Stereotaxic Space

Wykorzystanie naczelnych innych niż człowiek zapewnia doskonały model translacyjny dla naszego zrozumienia procesów rozwojowych i starzenia się u ludzi1-6Ponadto zastosowanie naczelnych niebędących ludźmi umożliwiło ostatnio naturalne modelowanie złożonych zaburzeń psychiatrycznych, takich jak nadużywanie alkoholu7W niniejszym opracowaniu opisujemy technikę blokowania mózgu w płaszczyźnie wieńcowej u małpy werwetki (Chlorocebus aethiops sabeus) w nienaruszonej czaszce w przestrzeni stereotaksycznej. Metoda opisana w niniejszym opracowaniu zapewnia standardową płaszczyznę cięcia pomiędzy blokami i osobnikami oraz minimalizuje liczbę przekrojów częściowych między blokami. Cięcie bloku tkanki w płaszczyźnie czołowej ułatwia również wyznaczenie obszaru zainteresowania. Metoda ta pozwala na uzyskanie bloków o rozmiarach umożliwiających pracę, ponieważ jedna półkula małpy z gatunku vervet daje ponad 1200 przekrojów przy cięciu o grubości 50μm. Ponadto podział mózgu na bloki o wielkości 1cm ułatwia penetrację sacharozy w celu krioprotekcji i pozwala na krojenie bloku na standardowym kriostacie.

Nieludzkie naczelne są istotnym gatunkiem translacyjnym dla naszego zrozumienia prawidłowych procesów zachodzących w mózgu. Organizacja anatomiczna mózgu naczelnych może dostarczyć ważnych informacji na temat stanów prawidłowych i patologicznych u ludzi.

Disekcja mózgu naczelnych zwierząt niebędących ludźmi w przestrzeni stereotaksycznej

Wykorzystanie naczelnych niebędących ludźmi zapewnia doskonały model translacyjny dla naszego zrozumienia procesów rozwojowych i starzenia się u ludzi1-6. W ...

Procedura ta rozpoczyna się od dobrze ukrwionej głowy małpy. Po usunięciu kalwy głowa zostaje umieszczona w aparacie stereotaksycznym, a następnie za pomocą ramienia manipulatora wykonuje się serię koronarnych cięć stereotaksycznych; mózg zostaje następnie usunięty, zmierzony i poddany krioterapii ochronnej. Witajcie, jestem dr Mark Burke z Laboratorium Neuronauk Wizualnych w Szkole Optometrii na Uniwersytecie w Montrealu.Jestem dr Shaheen Zur, również z Laboratorium Neuronauk Wizualnych w Szkole Optometrii na Uniwersytecie w Montrealu. Jestem dr Mo Petto, dyrektor Laboratorium Neuronauk Wizualnych w Szkole Optometrii na Uniwersytecie w Montrealu. Dzisiaj zaprezentujemy Państwu procedurę blokowania mózgu naczelnych niebędących ludźmi w przestrzeni stereotaktycznej.Stosujemy tę procedurę w naszym laboratorium do badania różnych aspektów organizacji mózgu w normalnym rozwoju oraz w odpowiedzi na zaburzenia rozwojowe. Zatem zacznijmy. Niniejszy protokół rozpoczyna się po eutanazji, utrwaleniu i odcięciu głowy małpy z gatunku vervet.Przed usunięciem mózgu należy przygotować ramkę stereotaktyczną. W pierwszej kolejności należy wyznaczyć współrzędne punktu zero płaszczyzny międzyusznej Horsley’a-Clarka, czyli teoretyczny punkt środkowy między uszami. Aby wyznaczyć tę płaszczyznę, należy równomiernie dopasować pręty uszne do aparatury.Następnie umieść ostrze skalpela w ramieniu manipulatora stereotaktycznego i zmierz punkt środkowy między prętami usznymi. Następnie przygotuj głowę do umieszczenia w aparacie stereotaktycznym. Użyj kleszczyków do kości i skalpela, aby usunąć żuchwę.Na tym etapie, w kolejnych krokach, sukcesywnie usuwaj pozostałe fragmenty kalwy. Należy uważać, aby nie usunąć kości skroniowych, ponieważ kanały słuchowe muszą pozostać nienaruszone, by umożliwić stabilne zamocowanie głowy w aparacie stereotaksycznym. Używając pęsety i nożyczek, ostrożnie wytnij widoczną oponę twardą z odsłoniętego mózgu.Czaszka jest teraz gotowa do umieszczenia w manipulatorze stereotaksycznym. Aby rozpocząć blokowanie stereotaksyczne mózgu, umieść głowę w ramie, a następnie wyreguluj paletę oczną i pręty uszne w taki sam sposób, jak w przypadku zabiegu stereotaksycznego. Ustaw manipulator stereotaksyczny w wcześniej określonej osi przedniej, tylnej lub AP.Aby rozpocząć blokowanie mózgu, ustaw manipulator po lewej lub prawej stronie mózgu i opuść ostrze, aby wykonać pierwsze cięcie. Ostrze powinno być prostopadłe do linii środkowej mózgu, tnąc w płaszczyźnie wieńcowej.Podnieś ostrze tak, aby całkowicie oddalić je od powierzchni mózgu. Następnie przesuń się przyśrodkowo, tak aby krawędź lekko nachodziła na pierwsze cięcie, i opuść ostrze. Powtórz tę czynność. Kontynuuj wykonywanie nachodzących na siebie cięć, aż dotrzesz do przeciwległej krawędzi mózgu.To kończy pierwszy blok wieńcowy. Przesuń manipulator o jeden centymetr do przodu lub do tyłu wzdłuż osi AP i wykonaj kolejną serię cięć w płaszczyźnie wieńcowej równolegle do poprzednich. Kontynuuj w ten sposób, aż zablokujesz cały mózg.Po zakończeniu cięcia należy wyjąć mózg z czaszki. Najpierw wyjmij głowę z uchwytu. Postaraj się zabezpieczyć mózg, delikatnie obejmując go dłonią, aby zapobiec jego przemieszczaniu się wewnątrz czaszki i ewentualnym uszkodzeniom.Umieść mały palec na płatach czołowych, aby zapobiec wysychaniu odsłoniętej powierzchni mózgu. Zwilż kawałek gazy w PBS i przykryj nim mózg. Mocno przytrzymaj głowę za czaszkę i usuń pozostałe kości potyliczne i skroniowe wraz z kolumną kręgową.Uwidacznia to podstawę oraz powierzchnie boczne mózgu. Następnie usuń pozostałą oponę twardą. Na koniec usuń kość nosową oraz wszelkie pozostałości kości czołowej, co umożliwi dostęp do cebulek węchowych.Ważne jest, aby usunąć kość czołową na samym końcu, ponieważ podczas usuwania podstawy czaszki mózg przesuwa się nieznacznie, a poszarpane krawędzie kości czołowej mogłyby uszkodzić płaty czołowe.Ostrożnie usuń pozostałości opony twardej, unieś przednią część mózgu, wsuń skalpel pod spód i uwolnij mózg z czaszki. Pozostanie on w całości, podobnie jak cebula nacięta wzdłuż łodygi, ponieważ ostrze nie dociera do strony brzusznej. Przed zamrożeniem mózgu można wykonać szereg przydatnych pomiarów.Najpierw można użyć suwmiarki do pomiaru osi AP mózgu. Następnie, aby wyznaczyć jego gęstość właściwą, należy zważyć mózg. Potem zmierz objętość, określając wyporność wody w cylindrze mierowym.Obliczyli Państwo gęstość jako masę podzieloną przez objętość. Po dokonaniu pomiarów całego mózgu należy teraz oddzielić poszczególne bloki tkanki w miejscach ich przyczepu do strony brzusznej mózgu i przygotować je do zamrożenia. Używając ostrza do krojenia tkanek, wykonajcie Państwo nacięcia przez stronę brzuszną mózgu, uwalniając bloki.Do pomiaru wymiarów AE w płaszczyźnie przyśrodkowej, bocznej oraz przednio-tylnej można użyć suwmiarki. Bloki mózgu są teraz gotowe do krioprotekcji i zamrażania. Przedstawiliśmy właśnie sposób blokowania mózgu naczelnego w przestrzeni stereotaksycznej.Podczas wykonywania tej procedury ważne jest całkowite wycofanie ostrza przed wykonaniem jakiegokolwiek ruchu w płaszczyźnie bocznej za pomocą manipulatora stereotaktycznego. Ponadto, podczas usuwania kości z mózgu, należy zachować ostrożność, aby nie uszkodzić kory za pomocą ERs. To wszystko.Dziękujemy za oglądanie i życzymy powodzenia w przeprowadzaniu eksperymentów.

dissecting-the-non-human-primate-brain-in-stereotaxic-space

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Sekcjonowanie mózgu nietworów naczelnych w przestrzeni stereotaktycznej

Bankowanie mózgu i systematyczne pobieranie próbek materiału biologicznego stanowią podstawę do bezstronnej stereologii i pozwalają na maksymalne wykorzystanie danych uzyskanych z każdego preparatu.

Bankowanie mózgów: maksymalne wykorzystanie materiału badawczego

Anatomiczna organizacja mózgu naczelnych może dostarczyć istotnych informacji na temat stanów prawidłowych i patologicznych u ludzi. Obiektywna stereologia jest metodą dokładnego i wydajnego szacowania całkowitej liczby neuronów (lub innego typu komórek) w danym obszarze referencyjnym1.

Wiedza o tym, co liczy się w analizie: nieobciążona stereologia w mózgu naczelnych zwierząt niebędących ludźmi

Ściany komór bocznych zawierają największy region zarodkowy w dorosłym mózgu ssaków. Tradycyjnie badania nad neurogenezą w tym obszarze opierały się na klasycznych technikach sekcjonowania do analizy histologicznej. Przedstawiamy tutaj alternatywne podejście — technikę preparatów całych (wholemount), która zapewnia kompleksowy widok en-face tego regionu zarodkowego.

Strefa podkomorowa en-face: barwienie całego preparatu i przepływ ependymalny

Ten artykuł demonstruje skuteczne wykorzystanie metody preparacji włókien do ujawnienia powierzchownych dróg istoty białej i struktur okołokomorowych ludzkiego mózgu, w przestrzeni trójwymiarowej, aby pomóc studentom zrozumieć morfologię komór.

Eksploracja głębokiego kosmosu - odkrywanie anatomii struktur okołokomorowych w celu ujawnienia bocznych komór ludzkiego mózgu

Ten artykuł opisuje szczegółową metodologię uzyskiwania spłaszczonych przekrojów stycznych z kory mózgowej ssaków i wizualizacji modułów korowych za pomocą metod histochemicznych i immunohistochemicznych.

Wizualizacja modułów korowych w spłaszczonych korach ssaków

Opisana poniżej metoda ma na celu dostarczenie kompleksowego protokołu do przygotowania neurochirurgii na naczelnych (NHP) przy użyciu nowatorskiego połączenia metod drukowania trójwymiarowego (3D) i ekstrakcji danych MRI.

Zestaw narzędzi oparty na rezonansie magnetycznym do planowania neurochirurgicznego u naczelnych

Przedstawiamy praktyczny, krok po kroku, szybki protokół usuwania mózgu myszy i preparowania dyskretnych obszarów z świeżej tkanki mózgowej. Pozyskiwanie regionów mózgu do analizy molekularnej stało się rutyną w wielu laboratoriach neurobiologicznych. Te obszary mózgu są natychmiast zamrażane w celu uzyskania wysokiej jakości danych transkryptomicznych do analizy na poziomie systemu.

Mikrodysekcja mózgu myszy na funkcjonalnie i anatomicznie różne regiony

Ten artykuł przedstawia zautomatyzowane procesy planowania neurochirurgicznego u naczelnych na podstawie skanów rezonansu magnetycznego (MRI). Techniki te wykorzystują etapy proceduralne w programowaniu i projektowaniu platform w celu wspierania niestandardowego projektowania implantów dla NHP. Ważność każdego komponentu można następnie potwierdzić za pomocą trójwymiarowych (3D) wydrukowanych modeli anatomicznych naturalnej wielkości.

Zestaw narzędzi do projektowania implantów neuronowych dla naczelnych

Seryjna tomografia dwufotonowa (STPT) to technika obrazowania masy tkanki w jej trójwymiarowym kształcie poprzez połączenie obrazowania dwufotonowego z automatyczną kontrolą etapu i krojeniem mikrotomów. Tutaj opisujemy protokół jego implementacji dla mózgów marmozet, aby lepiej zrozumieć ich cechy strukturalne.

Seryjna tomografia dwufotonowa całego mózgu marmozety do analiz neuroanatomicznych

Elektroporacja pojedynczych komórek (SCE) to specjalistyczna technika umożliwiająca dostarczenie DNA lub innych makrocząsteczek do poszczególnych komórek w obrębie nienaruszonej tkanki, w tym w preparatach in vivo. W niniejszym materiale szczegółowo opisujemy procedurę SCE w celu wprowadzenia barwnika fluorescencyjnego lub plazmidowego DNA do neuronów w nienaruszonym mózgu kijanki Xenopus laevis.

Elektroporacja pojedynczych komórek in vivo w nienaruszonym rozwijającym się mózgu

Naucz się techniki blokowania mózgu naczelnych w przestrzeni stereotaktycznej. Metoda obejmuje przygotowanie głowy małpy, wykonywanie koronarnych cięć i pomiar struktur mózgowych.

Disekcja mózgu naczelnych zwierząt niebędących ludźmi w przestrzeni stereotaksycznej

Przeglądaj więcej filmów