Pomiar ciśnienia tętniczego u myszy z wykorzystaniem rejestracji objętościowo-ciśnieniowej metodą mankietu ogonowego

Słowo coda w języku włoskim oznacza ogon. System nieinwazyjnego pomiaru ciśnienia krwi Coda umożliwia pomiar ciśnienia tętniczego u gryzoni dzięki specjalistycznemu czujnikowi rejestrującemu ciśnienie objętościowe, który mierzy zmiany objętości krwi w ogonie zwierzęcia po umieszczeniu go na jego powierzchni. W niniejszym filmie zaprezentowano sposób konfiguracji systemu, przygotowania zwierząt oraz jednoczesnego pomiaru ciśnienia krwi u ośmiu osobników.

Witajcie, nazywam się Anju Bala Krishnan i pracuję w laboratorium Alana Dougherty'ego w Centrum Badań nad Układem Sercowo-Naczyniowym na Uniwersytecie w Kentucky w Lexington. Dzisiaj zaprezentujemy procedurę pomiaru ciśnienia tętniczego u myszy z wykorzystaniem metody mankietu ogonowego z rejestracją objętościowo-ciśnieniową. Stosujemy tę procedurę w naszym laboratorium do badania układu sercowo-naczyniowego.

Zacznijmy zatem. Aby skonfigurować system CODA, wybierz w laboratorium miejsce, w którym temperatura pokojowa jest stabilna i wynosi 20 °C lub więcej. Unikaj lokalizacji w pobliżu nawiewów klimatyzacji; narażenie zwierząt na głośne dźwięki lub zapachy może powodować irytację lub stres.

Zapachy zwierzęce mogą obejmować wszelkie silne perfumy, których możesz używać. Włącz kontroler Coda, a następnie platformy grzewcze ustawione na trzeci poziom. Jeśli temperatura w pomieszczeniu przekracza 25 °C, zacznij od poziomu pierwszego lub drugiego.

Najpierw przeprowadź test diagnostyki kontrolera, otwierając oprogramowanie Coda. Wybierz urządzenie Coda, klikając na nie. Kliknij test selected device.

Wybierz mankiety i kanały do sprawdzenia, a następnie kliknij test. Po zakończeniu testu diagnostycznego sterownika zamknij okno testu urządzenia. Wybierz kod sterownika do użycia, a następnie kliknij.

Użyj tych urządzeń do skonfigurowania oprogramowania. Wybierz narzędzia zarządzania personelem. Następnie kliknij badacza jeden.

Aby zmienić nazwę, kliknij w kolejne wiersze, aby dodać dodatkowych badaczy. Następnie kliknij przycisk zapisu danych. Przejdź do karty techników, aby zmodyfikować listę techników lub dodać nowych.

Następnie kliknij kartę okazów, aby nazwać zwierzęta w celu łatwej identyfikacji i wybrać ich typ. Następnie kliknij zapisz dane. Na koniec kliknij kartę zwierząt.

Aby zmienić typ zwierzęcia i czułość, kliknij zapisz dane, a następnie zamknij. Aby rozpocząć nowy eksperyment, wybierz plik Nowy eksperyment. Wprowadź nazwę eksperymentu, wybierz głównego badacza oraz wybierz datę rozpoczęcia.

Kliknij dalej. Następnym krokiem jest wprowadzenie podstawowych informacji o sesji. Zacznij od wprowadzenia nazwy sesji; ustaw liczbę cykli aklimatyzacyjnych na pięć lub, jeśli nie chcesz uwzględniać cykli aklimatyzacyjnych, ustaw ją na zero.

Ustaw liczbę serii na jedną, a czas przerwy między seriami na 30 sekund w przypadku wielu serii. Ustaw liczbę cykli w serii na 20 cykli oraz czas przerwy między cyklami na pięć sekund. Następnie kliknij Dalej.

Aby rozpocząć wybór próbek, wybierz próbkę z puli próbek i przypisz ją do pierwszego dostępnego kanału. Następnie kliknij „dalej”, aby ustawić parametry sesji. Ustaw maksymalne ciśnienie okluzji na 250 millimeters.

Ustaw czas deflacji rtęci na 20 seconds. Dla myszy ustaw minimalną objętość na 15 µL oraz styl wyświetlania na jeden kanał na wykres. Można również dodać dodatkowych badaczy i techników.

Następnie kliknij „dalej”. Przejrzyj skrypt sesji i kliknij „dalej”. Nie wybieraj opcji „zakończ”, dopóki nie wykonasz sekcji przygotowania zwierzęcia, która jest opisana w dalszej części.

Teraz można wyjąć zwierzęta i umieścić je obok systemu pomiaru ciśnienia krwi CODA. Przed umieszczeniem zwierząt w uchwytach należy zwrócić uwagę na wielkość każdego zwierzęcia w stosunku do rozmiaru wybranego uchwytu. Zwierzę powinno móc swobodnie wejść do uchwytu.

Umieść każde zwierzę w uchwycie, chwytając je za ogon i delikatnie wkładając do tylnej części uchwytu, która jest skierowana w stronę otwartego końca stożka nosowego. Ostrożnie zamocuj tylną klapkę do uchwytu, przekręcając śrubę znajdującą się na klapce. Należy uważać, aby podczas mocowania tylnej klapki nie przyciąć ogona ani żadnej innej części ciała.

Kolejny slajd. Stożek nosowy skierowany w stronę tylnego włazu. Ogranicza to ruchy zwierzęcia.

Stożek na nos powinien znajdować się w pozycji ograniczającej możliwość obrotu zwierzęcia. Po umieszczeniu zwierzęcia w uchwycie, należy ustawić uchwyt na platformie grzewczej. W wyznaczonej pozycji należy pozostawić zwierzę na co najmniej pięć minut, aby mogło zaaklimatyzować się w uchwycie.

Nie dotykać i nie manipulować zwierzęciem. Podczas przebywania w uchwycie zwiększony kontakt może podrażnić zwierzę; nigdy nie pozostawiać zwierzęcia w uchwycie bez nadzoru. Aby prawidłowo założyć mankiet do okluzji ogona, należy przełożyć ogon przez mankiet i umieścić go jak najbliżej nasady ogona, nie stosując siły.

Następnie przełóż ogon przez mankiet czujnika VPR, umieszczając go w odległości dwóch milimetrów od mankietu okluzyjnego. Zabeziecz rurkę w wycięciu znajdującym się z tyłu na górze uchwytu. Mankiet okluzyjny ogona zostaje napompowany, aby zablokować przepływ krwi do ogona.

Mankiet okluzyjny jest powoli spuszczany, a mankiet VPR na ogonie, zawierający specjalnie zaprojektowany czujnik, mierzy fizjologiczne właściwości powracającego przepływu krwi w momencie, gdy krew zaczyna ponownie napływać do ogona. Czujnik VPR mierzy obrzęk ogona wynikający z pulsacji tętniczych przepływu krwi. Ciśnienie skurczowe jest automatycznie mierzone przy pierwszym pojawieniu się obrzęku ogona.

Ciśnienie skurczowe krwi jest automatycznie obliczane w momencie, gdy ustaje wzrost tempa obrzęku ogona. Po umieszczeniu wszystkich zwierząt w uchwytach i założeniu mankietów na ogony, należy odczekać co najmniej pięć minut na ich termoregulację. Zapisz temperaturę zwierząt.

Przy użyciu termometru na podczerwień należy sprawdzić, czy temperatura zwierząt mieści się w przedziale od 32 do 35 °C. Teraz, gdy zwierzęta są gotowe, możemy rozpocząć eksperyment. Kliknij przycisk „Zakończ”, aby rozpocząć eksperyment.

Czerwona linia reprezentuje wydeflowanie mankietu oklazyjnego i mankietu czujnika VPR. Niebieska linia reprezentuje zmiany objętości krwi w ogonie. Pierwszy punkt przegięcia niebieskiej linii, czyli minimalna szybkość zmian, wyznacza skurczowe ciśnienie krwi.

Drugie załamanie niebieskiej linii, czyli maksymalna szybkość zmian, określa ciśnienie krwi w rozkurczu w momencie zakończenia eksperymentu. Należy niezwłocznie zdjąć mankiety i wyjąć zwierzęta z uchwytu. Wyświetlony zostanie uproszczony raport podsumowujący sesję.

Dane zebrane podczas eksperymentu są zapisywane w pliku Excel. Istnieje kilka sposobów przetwarzania danych w pliku Excel. Powszechną praktyką jest obliczanie średniej i odchylenia standardowego oraz usuwanie pomiarów.

Jeśli odchylenie standardowe jest większe niż 30. Ponadto można przeglądać odrzucone cykle, a całą bazę danych można łatwo wyeksportować do programu Excel. Należy zapoznać się z protokołem pisemnym oraz instrukcją obsługi.

W ramach uzupełnienia informacji, zaprezentowałem właśnie sposób nieinwazyjnego pomiaru ciśnienia tętniczego u myszy z wykorzystaniem rejestracji objętościowej ciśnienia. W celu uzyskania dokładnych i spójnych pomiarów najważniejsze jest zminimalizowanie stresu zwierzęcia poprzez ścisłe przestrzeganie tej procedury. To wszystko.

Dziękujemy za obejrzenie materiału i życzymy sukcesów w przeprowadzaniu eksperymentów.