Name: Umieszczanie koralików pokrytych czynnikiem wzrostu na eksplantatach grzbietowego przodomózgowia (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-01-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 7 s
Description: Naucz się umieszczania koralików pokrytych czynnikiem wzrostu na eksplantatach przodomózgowia. Poznaj techniki z użyciem pipety szklanej i igły wolframowej do indukcji ekspresji genów w tkance nerwowej.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy nie zgłaszają żadnych konfliktów interesów.

umieszczanie kuleczek pokrytych czynnikami wzrostu w eksplantach grzbietowej części przedmózgowia

Growth Factor-Coated Bead Placement on Dorsal Forebrain Explants

W niniejszym filmie zaprezentowano dwie metody przygotowania i umieszczania kuleczek pokrytych czynnikiem wzrostu na eksplantach rozwijającej się kory mózgu. Kuleczki te mogą być wykorzystywane do indukcji przestrzennie ograniczonej ekspresji genów w rozwijającej się tkance nerwowej, takiej jak eksplanty przedmózgowia. Przedstawiono metody wykorzystujące zarówno kuleczki Affi-Gel, jak i akrylowe kuleczki heparynowe.

Umieszczanie kuleczek pokrytych czynnikami wzrostu w eksplantach grzbietowej części przedmózgowia

Oto pierwszy rodzaj kulek, których użyję. Są to niebieskie kuleczki żelowe. Są one miękkie.Zatem na końcu pipety ustnej muszę użyć szklanej pipety zbiorczej, aby umieścić te kuleczki na Xs. Drugim rodzajem kuleczek, który zaprezentuję, są akrylowe kuleczki z heparyną. Są to kuleczki o sztywnej strukturze, które umieszczę na eksplantach X za pomocą igły wolframowej. Oto szklane rurki kapilarne, które najpierw stopię przy użyciu palnika Bunsena.Następnie wyciągnę je, aby utworzyć cieńszą końcówkę. Trzymam rurkę kapilarną w środku płomienia i obracam ją w miarę topnienia rurki. Czuję, jak staje się miękka.Wyjmę rurkę z płomienia, a następnie ją wyciągnę. Za pomocą tego rysika z diamentową końcówką nacinam linię w poprzek kapilary, aby uzyskać ładne, proste cięcie. Następnie wypoleruję końce w płomieniu w celu ich oczyszczenia.Przesunę kapilarę przez płomień, aby wypolerować jej koniec i zwęzić otwór, co pozwoli na uchwycenie koralika i zapobiegnie jego przejściem przez kapilarę. Ważne jest, aby nie trzymać rurki kapilarnej w płomieniu zbyt długo. Powinien to być bardzo szybki ruch, w przeciwnym razie otwór zostanie zamknięty.Zazwyczaj przygotowuję kilka takich elementów, ponieważ w wi

growth-factor-coated-bead-placement-on-dorsal-forebrain-explants

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Umieszczenie perełek pokrytych czynnikiem wzrostu na wycinach grzbietowej części przedniej części mózgu

Różnorodne czynniki wzrostu i białka oddziałują na siebie, indukując komórki do przyjmowania różnych przeznaczeń komórkowych podczas rozwoju. W niniejszej pracy demonstrujemy zastosowanie preparacji in ovo w celu zbadania możliwych oddziaływań między różnymi białkami w rozwoju, poprzez umieszczanie kulek w embrionach kurzych w stadium E2.5.

Umieszczanie kulek powlekanych czynnikami wzrostu w zarodkach kurczat we wczesnym stadium rozwoju

Demonstrujemy sposób wycinania i hodowli eksplantów zwoju statoakustycznego w dniu E4 oraz rdzenia kręgowego w dniu E6 zarodka kurczaka. Eksplanty są hodowane w warunkach bezsurowiczych w trójwymiarowych żelach kolagenowych przez 24 godziny. Reaktywność neurytów jest badana przy użyciu pożywki uzupełnionej o czynniki wzrostu oraz koralików pokrytych białkiem.

Disekcja i hodowla eksplantów zrazustatoakustycznego i rdzenia kręgowego kurczaka w żelach kolagenowych do testów wzrostu neurytów

Hodowla eksplantów neuronalnych z wypreparowanych embrionów Xenopus laevis wykazujących ekspresję fluorescencyjnych białek fuzyjnych umożliwia obrazowanie dynamiki cytoszkieletu stożka wzrostu.

Kultury eksplantów neuronalnych z Xenopus laevis

Ten film demonstruje model kokulturacyjny eksplantacji zwoju korzenia grzbietowego i komórek Schwanna. W warunkach kokultury kwas askorbinowy sprzyja różnicowaniu komórek Schwanna w formy mielinizujące. Mielinizujące się komórki Schwanna wielokrotnie owijają aksony, aby utworzyć osłonkę mielinową, która jest niezbędna do funkcjonowania nerwów.

Wspólna hodowla eksplantatu zwoju korzenia grzbietowego z komórkami Schwanna do mielinizacji neuronów

Ten protokół opisuje ulepszoną procedurę eksplantacji, która obejmuje elektroporację ex utero, sekcję i hodowlę całych półkul mózgowych od embrionalnej myszy. Preparat ułatwia badania farmakologiczne i testy funkcji genów we wczesnym okresie rozwoju kory mózgowej.

Ex utero Elektroporacja i eksplantaty całej półkuli: prosta metoda eksperymentalna do badań nad wczesnym rozwojem kory mózgowej

Neurony embrionalne rodzą się w strefie komorowej cewy nerwowej, ale migrują, aby dotrzeć do odpowiednich celów. Neurony skrzelomotoryczne twarzy (FBM) są użytecznym modelem do badania migracji neuronów. Protokół ten opisuje całą hodowlę ex vivo zarodków myszy w tyłomózgowiu w celu zbadania mechanizmów regulujących migrację FBM.

Hodowla ex-vivo tyłomózgowia myszy w celu zbadania migracji neuronów skrzelowo-ruchowych twarzy

Poprzez szczepienie koralików nasączonych czynnikami wzrostu lub specyficznymi inhibitorami szlaków sygnałowych do rozwijających się zarodków, możliwe jest bezpośrednie testowanie ich efektów in vivo. W tym protokole kulki są szczepione w zawiązku kończyny w celu określenia wpływu tych cząsteczek na ekspresję genów i transdukcję sygnału.

Szczepienie kulek w rozwijających się kończynach zarodka kurczaka w celu identyfikacji szlaków transdukcji sygnału wpływających na ekspresję genów

W embrionach Xenopus, komórki z dachu blastocoelu są pluripotencjalne i mogą być zaprogramowane do generowania różnych tkanek. W tym miejscu opisujemy protokoły stosowania eksplantatów dachowych z blastocoelu jako systemu testowego do badania kluczowych cech in vivo i in vitro wczesnego rozwoju neuronalnego.

Podobne do komórek macierzystych eksplantaty embrionalne Xenopus do badania wczesnych cech rozwojowych neuronów in vitro i in vivo

Przejście nabłonkowe do mezenchymalnego (EMT) pozwala nowotworom stać się inwazyjnymi. W celu zbadania EMT opisano model in vitro oparty na neuronalnych komórkach macierzystych (NSC) pozbawiony surowicy i enzymów. Ten ustandaryzowany system umożliwia ilościową i jakościową ocenę migracji komórek, ekspresji genów i białek. Model nadaje się do odkrywania leków.

Wolny od enzymów i surowicy model hodowli nerwowych komórek macierzystych do badań EMT, odpowiedni do odkrywania leków

Tutaj prezentujemy system mieszanych hodowli jednowarstwowych ex-vivo do badania migracji ludzkich komórek glejaka (hGC) w czasie rzeczywistym. Model ten zapewnia możliwość obserwowania interakcji między hGC a aksonami mielinizowanymi i niemielinizowanymi w obrębie komory z przedziałami.

Monitorowanie w czasie rzeczywistym migracji komórek ludzkiego glejaka w kokulturach aksonów i oligodendrocytów w zwoju korzenia grzbietowego

Naucz się umieszczania koralików pokrytych czynnikiem wzrostu na eksplantatach przodomózgowia. Poznaj techniki z użyciem pipety szklanej i igły wolframowej do indukcji ekspresji genów w tkance nerwowej.

Umieszczanie kuleczek pokrytych czynnikami wzrostu w eksplantach grzbietowej części przedmózgowia

Przeglądaj więcej filmów