Umieszczanie koralików pokrytych czynnikiem wzrostu na eksplantatach grzbietowego przodomózgowia

Więc to są pierwszy rodzaj koralików, których użyję. Są to żelowe niebieskie kulki żelowe. Są miękkie.

Muszę więc użyć szklanej pipety z pulą na końcu pipety do ust, aby umieścić te koraliki na Xs.Drugim rodzajem koralików, które zademonstruję, są koraliki akrylowe heparyny. Są to sztywne koraliki i umieszczę je na X eksplantatach za pomocą igły wolframowej. To są szklane rurki kapilarne, które najpierw stopię za pomocą palnika Bunsena.

Następnie wyciągnę je, aby stworzyć drobniejszą końcówkę. Trzymam więc rurkę kapilarną w środku płomienia i zwijam ją, gdy rurka się topi. Czuję, jak mięknie.

Podniosę go z płomienia, a następnie wyciągnę. Zamierzam wytrawić linię w poprzek rurki kapilarnej za pomocą tego pisaka z diamentową końcówką, aby uzyskać ładne proste cięcie. Następnie wypoleruję końcówki na płomieniu, aby to posprzątać.

Zamierzam przepuścić kapilę przez płomień, aby wypolerować koniec i zmniejszyć otwór, aby mógł uchwycić koralik, a nie koralik przechodzący przez kapilarę. Ważną rzeczą, na którą należy zwrócić uwagę, jest to, że nie chcesz trzymać rurki kapilarnej w płomieniu zbyt długo. W rzeczywistości jest to bardzo szybkie przejście, w przeciwnym razie się uszczelni.

Zwykle robię kilka z nich, ponieważ wiele z nich okazuje się tam, gdzie końcówka jest uszczelniona przez płomień. Trudno to kontrolować, więc po prostu robisz kilka. Jest to przykład takiego, w którym końcówka została uszczelniona.

To jest przykład dobrej pipety. Odpipetowałem 250 mikrolitrów kulek agel do tej rurki einor i zamierzam umyć je pięć razy jednym mililitrem PBS, aby usunąć roztwór azi, w którym się moczyły. Poczekam około trzech minut, aż kulki opadną, a następnie odessam nadmiar PBS i powtórzę to jeszcze cztery razy.

Koraliki jeszcze się nie ustabilizowały, więc koraliki już opadły, a ja zamierzam odessać nadmiar PBS i powtórzyć to cztery razy. A na koniec dodam 300 mikrolitrów PBS i zacznę pracować z koralikami. To jest standardowa pipeta do ust i zamierzam po prostu wezwać kapilarę, którą wyciągnąłem, i wepchnąć ją tam około jednej trzeciej wysokości.

Najpierw napełnij pipety PBS. Zwykle wypełnia się tylko przez działanie kapilarne. Więc to jest pokrywka z 30-milimetrowego naczynia hodowlanego i umieściłem kroplę koralików w kolorze niebieskim.

A obok znajduje się mała kropelka PBS. A w tym naczyniu znajduje się pięć mikrolitrowych kropelek roztworu białka. W tym przypadku jest to B i P cztery, ale możesz użyć wybranego białka za pomocą pipety doustnej.

Zamierzam przenieść koralik z tego niebieskiego koła tutaj, spłukać go raz w kropli PBS. Następnie wezmę koralik za pomocą pipety doustnej i umieszczę go w kropelce roztworu białkowego i inkubuję w temperaturze pokojowej przez około godzinę lub cztery stopnie przez kilka godzin. Więc tam widzisz pulę koralików w PBS i muszę wybrać koraliki o odpowiednim rozmiarze.

Jeśli są za małe, po prostu przejdą przez pipetę doustną. Muszą po prostu usiąść na końcu. Więc teraz widzisz, że wybrałem tam kilka koralików, trzy większe koraliki i trzy mniejsze koraliki.

W eksperymencie użyję większych koralików. Zamierzam teraz przenieść duży koralik z kropli PBS na kropelkę roztworu białkowego. Aby to zrobić, delikatnie odsunę język od pipety do ust.

Nie jest to ruch ssania, ale po prostu po to, aby wywrzeć trochę podciśnienia. A potem przeniosę go na drugą stronę, a następnie w zasadzie położę język z powrotem nad ustami. Główka rury, nie, ale po prostu dodając trochę pozytywnego ciśnienia, aby zepchnąć rytm z końca.

Mam teraz pięć kulek w kropelce roztworu białka i będę je inkubować w temperaturze czterech stopni przez kilka godzin lub alternatywnie w temperaturze pokojowej przez pół godziny do godziny. To jest danie hodowlane, które zawiera błonę, która unosi się w pożywce wraz z bakłażanem, które już przeanalizowałem. Wezmę końcówkę pipety i wezmę trochę mediów.

Zamierzam opłukać koraliki w kropli pożywki tylko jeden raz, bezpośrednio przed umieszczeniem koralika na X explan. To są igły wolframowe, których użyję do podniesienia i umieszczenia koralików akrylowych. To jest igła wolframowa i jest teraz w uchwycie.

A to są cienkie kleszcze. pod kątem 45 stopni. Zamierzam użyć mojej wolframowej igły w kleszczach, aby podnieść koralik z tej puli PBS i przenieść koralik na kropelkę roztworu białka.

Tak jak zrobiłam to z koralikami agel. Podobnie jak w przypadku koralików agel, spłukałem te akrylowe koraliki pięć razy w PBS i przeniosłem kroplę na tę płytkę. Następnie użyję mojej wolframowej igły w kleszczach, aby przenieść kulkę do kropli białka i inkubować, tak jak zrobiłem to z kulkami żelowymi.

Więc jest to podniesienie koralika. Prawą rękę mocno opieram o stół, a lewego palcem wskazującym podtrzymuję igłę, gdy schodzę do płynu, delikatnie dotykam igłą koralika i powoli wyjmuję go z płynu. Czasami spada z igły, więc po prostu wróć po inną.

Teraz lewą ręką mam kleszcze pod kątem 45 stopni. Czubkami skierowanymi w dół dotykam koralika i igły płynu i używam. Użyj końcówki kleszczy, aby delikatnie go docisnąć.

Więc teraz mam pięć koralików w białku. Okej, więc prawą ręką mam wolframową igłę w koraliku, a lewą ręką, moimi kleszczami znowu czubkiem w dół w taki sam sposób, w jaki je odpycham od czterech, zrobię to ponownie tutaj na x explan. Inkubuj w temperaturze 37 stopni, a czas zależy od konkretnego testu.