Name: Badanie agresji u muszek owocowych (muszki owocowe) (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-02-25T00:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 6 s
Description: Poznaj metodę badania agresji u muszek owocowych w kontrolowanych warunkach laboratoryjnych. Technika izolacji osobników i przygotowania aren walk pozwala analizować mechanizmy neuronalne zachowań agresywnych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

1. Montaż ścianek komory
<ol>
<li>Należy wziąć dwa zwykłe szkiełka przedmiotowe, zaznaczyć środek na obu krawędziach, a następnie, posługując się linijką z prostą krawędzią jako prowadnicą, naciąć szkło przecinakiem diamentowym. </li>
<li>Przesuwaj przecinak diamentowy w przód i w tył kilka razy, aż usłyszysz dźwięk skrobania. </li>
<li>Umyć szkło, a następnie, trzymając je za pomocą dwóch ręczników papierowych nad pojemnikiem na stłuczone szkło, przyłożyć delikatny nacisk w pobliżu nacięcia od strony nacięcia. skierowanym od siebie, aby przełamać szkiełko na dwie połowy.</li>
<li>Obficie nałożyć klej do szkła wzdłuż krawędzi jednego kawałka szkła, a następnie docisnąć do niego drugi kawałek szkła pod kątem prostym. Położyć całość na płaskiej powierzchni (folii aluminiowej, papierze woskowanym lub zwykłym papierze) i pozostawić do utwardzenia na co najmniej godzinę.</li>
<li>Po godzinie powtórz etap nakładania kleju w celu utworzenia kwadratowej komory i pozostaw do utwardzenia na noc. <img src="/files/ftp_upload/old/155_2008_9_3_3/155_figure-01.png" alt="Static equilibrium, ΣFx=0, prism setup, optical experiment, refraction analysis, glass apparatus." width="358" height="266" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Figure 1"> </li>
</ol>
2. Umieszczanie ścianek w szalce Petriego
<ol>
<li>Wziąć pokrywkę szalki Petriego i wypełnić ją do głębokości co najmniej 5 mm podgrzanym 2% roztworem agarozy (agarozę w wodzie dejonizowanej należy podgrzewać w mikrofalówce do całkowitego rozpuszczenia).</li>
<li>Odczekać kilka minut, a następnie, gdy agaroza jest wciąż w stanie płynnym, umieścić ścianki komory w centrum szalki. Wziąć dno szalki Petriego i położyć je stroną dolną do góry. Za pomocą rozgrzanej w płomieniu prostej igły sekcyjnej wykonać w centrum szalki zestaw małych otworów (&gt; 1 mm) w celu zapewnienia wentylacji. Wykonać jeden większy otwór (średnica ~ 4 mm) nieco z boku, aby umożliwić wprowadzanie much do komory. Większy otwór zakleić kawałkiem usuwalnej taśmy etykietującej. <img src="/files/ftp_upload/old/155_2008_9_3_4/155_figure-02.png" alt="Równowaga statyczna, układ chromatograficzny; szalki Petriego, proces rozdzielania substancji, metoda eksperymentalna." width="447" height="207" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Rysunek 2"> <img src="/files/ftp_upload/old/155_2008_9_3_5/155_figure-03.png" alt="Równowaga statyczna; przezroczysty pojemnik w szalce Petriego; schemat układu; słowa kluczowe dla celów edukacyjnych." width="328" height="211" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Rysunek 3"> </li>
</ol>
3. Przygotowanie naczynia z pożywką
<ol>
<li>Podgrzać fiolkę z pożywką dla muszek do momentu, aż pożywka się roztopi. Za pomocą pipety Pasteura przenieść pożywkę do fiolki scyntylacyjnej, wypełniając ją tak, aby na górze utworzyła się płaska powierzchnia. Należy uważać, aby nie powstały pęcherzyki powietrza, a następnie pozostawić do ostygnięcia.</li>
<li>Przygotować świeżą pastę drożdżową, ucierając niewielką ilość suchych drożdży z kilkoma kroplami wody w moździerzu z tłuczkiem. Dodawać więcej drożdży lub wody, aż konsystencja będzie na tyle gęsta, by można było nabrać wykałaczką małą, widoczną kroplę i nanieść ją na środek powierzchni pożywki.</li>
<li>Umieścić fiolkę z pożywką w centrum komory, a na górze komory położyć dno szalki Petriego, odwrócone tak, aby boki były skierowane do góry i nie zasłaniały widoku. Do wnętrza komory wprowadzić za pomocą aspiratora dwie muszki w wieku 3-5 dni przez większy otwór w górnej części. Otwór ten zakleić taśmą, a do górnej szalki włożyć kawałek czarnego papieru filtracyjnego z wyciętym otworem o średnicy 2 cm.</li>
<li>Nad komorą ustawić lampkę biurkową w odległości wystarczającej, aby nie nagrzewała ona komory, oraz w pozycji zapewniającej oświetlenie powierzchni pożywki. Cały zestaw najlepiej umieścić w środowisku o wysokiej wilgotności i temperaturze 22-25°C. <img src="/files/ftp_upload/old/155_2008_9_3_6/155_figure-04.png" alt="Układ do kiełkowania nasion w szalce Petriego; eksperyment nad wzrostem roślin; badanie w kontrolowanym środowisku." width="284" height="212" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Rycina 4"> </li>
</ol>
4. Rozpocznij nagrywanie wideo przez przednią ściankę komory, gdy obie muchy znajdą się na powierzchni pożywki.

badanie agresji u drosophila (muszek owocówek)

Studying Aggression in Drosophila (fruit flies)

Agresja jest wrodzonym zachowaniem, które ewoluowało w ramach obrony lub pozyskiwania zasobów. To złożone zachowanie społeczne jest kształtowane przez czynniki genetyczne, hormonalne i środowiskowe. U wielu organizmów agresja jest kluczowa dla przetrwania, jednak kontrolowanie i tłumienie agresji w określonych kontekstach staje się coraz bardziej istotne. W ostatnich latach bezkręgowce stają się coraz bardziej użyteczne jako systemy modelowe do badania genetycznych i systemowo-biologicznych podstaw złożonych zachowań społecznych. Wynika to częściowo z różnorodnego repertuaru zachowań przejawianych przez te organizmy. W towarzyszącym filmie przedstawiamy metodę analizy agresji u Drosophila, której projekt uwzględnia istotne ograniczenia eko-etologiczne. Szczegóły obejmują kroki dotyczące: wykonania komory walki, izolowania i malowania much, umieszczania much w komorze walki oraz nagrywania walk. Podejście to jest obecnie wykorzystywane do identyfikacji genów kandydackich istotnych dla agresji oraz do opracowania obwodów neuronalnych, które leżą u podstaw przejawiania agresji i innych zachowań społecznych.

Badanie agresji u Drosophila (muszek owocówek)

Agresja jest wrodzonym zachowaniem, które wyewoluowało w ramach obrony lub zdobywania zasobów. To złożone zachowanie społeczne jest kształtowane przez...

Nazywam się Sarah Ertel i jestem pracownikiem postdoktoranckim w laboratorium EDA Kravitza tutaj, w Katedrze Neurobiologii w Harvard Medical School. Nazywam się Sibu. Jestem studentem medycyny z Niemiec i odbywam tutaj staż badawczy w laboratorium Kravitza.Chcemy pokazać Państwu, w jaki sposób organizujemy walki oraz badamy agresję u muszek owocówek. Pierwszym krokiem jest przygotowanie probówek izolacyjnych, co polega na podgrzaniu pożywki dla muszek w kuchence mikrofalowej i dodaniu 1,5 ml pożywki do probówki hodowlanej po jej zastygnięciu. Następnie zamykamy ją watą.Pierwszym krokiem jest pozyskanie społecznie naiwnych much. Nie miały one kontaktu z innymi osobnikami. W tym celu pobieramy poczwarki w późnym stadium rozwoju z wybranych linii much, a następnie ostrożnie usuwamy je z fiolki za pomocą pęsety.Należy wziąć przygotowaną fiolkę do izolacji, usunąć watę i delikatnie umieścić w niej poczwarkę, a następnie zakręcić fiolkę i ją opisać. Poczwarki zostają umieszczone z powrotem w inkubatorze z kontrolowaną temperaturą i cyklem dobowym. Następnego dnia sprawdzamy, czy poczwarki przekształciły się w dorosłe osobniki, a następnie zapisujemy datę wylęgu much.Następnie pozostawiamy je na trzy do pięciu dni, a w tym czasie nakładamy farbę na tylną część odwłoków much, aby móc je zidentyfikować. Teraz przygotowujemy komory do właściznych walk. W tym celu używamy dwóch zwykłych szkiełek przedmiotowych, odmierzamy środek i zaznaczamy go rysikiem diamentowym, nacinając powierzchnię, a następnie odnajdując krawędź nacięcia, dzięki czemu szkiełko przedmiotowe powinno łatwo pęknąć na pół. Dobrze.Następnie krawędzie szkiełek sklejamy za pomocą kleju. Potem obie połowy są ze sobą sklejone, tworząc pudełko. Możemy oczyścić je 70% etanolem, a następnie wodą, aby usunąć pozostałości z palców.Wypełnij dno komory 1% agros i umieść komorę wewnątrz. Zapewni to odpowiednią wilgotność dla much. Następnie chcemy dostarczyć muchom coś, o co będą mogły walczyć.Zatem, mimo że faktyczny rozmiar komory można uznać za terytorium, dostarczamy im pokarm. Pokarm ten umieszczamy w fiolce scyntylacyjnej. Tworzy to dodatkowy poziom potencjalnej terytorialności, której pojedyncza mucha mogłaby chcieć bronić.Teraz wezmę świeżo podgrzaną w mikrofalówce pożywkę i przeleję ją do kubeczków z pożywką, które w rzeczywistości są nakrętkami do probówek scyntylacyjnych; będą one służyć jako arena walki, na której muchy będą później walczyć. Ważne jest, aby powierzchnia była lekko wypukła, co pozwoli na obejrzenie całej jej powierzchni. Należy również unikać powstawania pęcherzyków powietrza, ponieważ stanowiłyby one przeszkodę dla much podczas poruszania się po kubeczku z pożywką, co jest istotne, aby zwabić muchy do pożywki.Dodamy również kroplę pasty drożdżowej na środek naczynia z pożywką. Najpierw musimy przygotować pastę drożdżową. W tym celu pobieramy żywą pastę drożdżową, umieszczamy ją w naczyniu z pożywką, następnie dodajemy kroplę wody i mieszamy, aż powstanie pasta.Po ostygnięciu kubeczków z pożywką należy nałożyć pastę drożdżową lub jej niewielką kroplę na środek kubeczka. Znajdujemy się obecnie w pomieszczeniu do obserwacji behawioralnych, jednym z dwóch takich pomieszczeń. To pomieszczenie jest całkowicie zaciemnione po wyłączeniu wszystkich świateł, a wilgotność i temperatura w nim są kontrolowane.Utrzymujemy temperaturę na poziomie 25°C i staramy się zachować wilgotność powyżej 40%, aby w przypadku muszek kontrolować jak najwięcej parametrów. Teraz przygotuję klatki. Przyniesione wcześniej przygotowane kubki z pożywką znajdują się tutaj i zamierzam umieścić je w tych komorach.Postaraj się umieścić je na środku komory. Nakładamy pokrywkę. Dobrze. Teraz użyję tego aspiratora, aby odessać muchy – dokładnie parę much.W związku z tym wezmę dwie muchy, odessę je tutaj, a następnie umieszczę w komorze. Tak postąpię. Teraz będę trzymać fiolkę w ten sposób, ponieważ wiadomo, że muchy poruszają się przeciwnie do kierunku działania grawitacji i w stronę światła, więc mają tendencję do przemieszczania się w górę.Dzięki temu łatwiej mi je złapać podczas usuwania waty. Jak widać, w tej chwili w pułapce znajdują się obie muchy. Muszę również upewnić się, że ponieważ są to muchy malowane, wybiorę jedną malowaną oraz jedną niemalowaną.Lub jeśli użyjemy dwóch kolorów, jednego pomalowanego w jeden kolor, a drugiego w inny, mimo że mają ten sam genotyp. Teraz umieszczam je w odpowiedniej komorze. Usuwam kulkę wosku.Znajduje się tam niewielki otwór, przez który wprowadzam muchy; staram się ustawić pokrywkę w taki sposób, aby muchy nie mogły uciec podczas stukania. Muchy opadną nieco w dół, a następnie delikatnie dmucham, aby nie robić tego zbyt gwałtownie, gdyż mogłoby to zakłócić ich stan. Potrzebują one od trzech do powiedzmy 40 minut, aby uspokoić się i zapoznać z otoczeniem w komorze.Następnie zaczną zajmować naczynie z pokarmem i rozpocznie się walka. Teraz wezmę całą komorę i umieszczę ją przed kamerą, a następnie muszę dostosować wysokość tak, aby filmować naczynie z pokarmem pod niewielkim kątem, aby było ono w całości widoczne. I aby całe naczynie z pokarmem znajdowało się w ostrości.Ważne jest również pomieszczenie, w którym przygotowywane są te testy agresji. Jest to odizolowany pokój, wolny od ruchu i hałasu. Utrzymuje się w nim temperaturę 25 °C i staramy się zachować wilgotność na poziomie od 45 do 55%, aby zapewnić muszkom odpowiednie warunki do zachowania zdrowia i dobrostanu w tej sytuacji.Dodatkowo przyciemniamy światła górne, aby światło nad naczyniem z pokarmem również stanowiło atrakcję dla muszek. Wykorzystanie DFA jako modelu oraz tego rodzaju konfiguracji pozwala nam badać nie tylko intensywność agresji, ale także konkretne wzorce agresywnych zachowań, które obserwujemy. Jesteśmy bardzo zainteresowani poznaniem tego, w jaki sposób mózg jest okablowany podczas rozwoju, a następnie, jak objawia się to u osobnika dorosłego, który nie nauczył się tych zachowań.W związku z tym wychodzą natychmiast, gdy widzą, że zaczynają one wchodzić w interakcje z innymi muchami. Wiedzą, jak gwałtownie atakować, wiedzą, jak być agresywnymi. Chcemy zatem dowiedzieć się, w jaki sposób te zachowania są zakodowane w układzie nerwowym much i jak są następnie kontrolowane.

studying-aggression-in-drosophila-fruit-flies

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Badanie agresji u Drosophila (muchówek owocowych)

Agresja jest wrodzonym zachowaniem, a wcześniejsze doświadczenie w walce wpływa na strategię walki i wynik późniejszych zawodów w muchach. Ten film opisuje test używany do badania agresywnego zachowania Drosophila. Przykładowy protokół obejmuje test wykonywany w konfiguracji, która eliminuje obsługę much, a tym samym zmniejsza stres u zwierząt, który w przeciwnym razie wpłynąłby na wydajność badanych.

Drosophila Test agresji: metoda badania plastyczności behawioralnej u much

W tym artykule wideo opisujemy zautomatyzowany test do pomiaru wpływu głodu lub sytości na zależne od węchu zachowanie związane z poszukiwaniem pokarmu u dorosłej muszki owocowej Drosophila melanogaster.

Test pojedynczej muchy na zachowania żerowe u Drosophila

Tutaj prezentujemy protokół do ilościowego określenia unikania osób zestresowanych. Ten paradygmat jest potężny, ale przyjazny dla użytkownika i może być wykorzystany do oceny wpływu genów i środowiska na jeden rodzaj interakcji społecznych u Drosophila melanogaster.

Prosty test do ilościowego oznaczania unikania społecznego u Drosophila melanogaster

Podczas walk muszek owocowych, obserwowane wzorce zachowań, dynamika walki oraz związane z nią uczenie się i pamięć są pod wpływem warunków eksperymentalnych. Przedstawiony tutaj protokół opisuje nowatorską procedurę, która całkowicie eliminuje obchodzenie się z muchami podczas eksperymentów. Poprawia to dynamikę walki i pozwala na tworzenie silnych efektów "przegranych".

Nowe podejście, które eliminuje postępowanie w celu badania agresji i efektu "przegranego" u Drosophila melanogaster

Opisujemy protokół wywoływania nagradzających i nienagradzających doświadczeń u muszek owocowych (Drosophila melanogaster) przy użyciu dobrowolnego spożycia etanolu jako miary zmian w stanach nagrody.

Prosty sposób na zmierzenie zmian w zachowaniu związanym z poszukiwaniem nagrody za pomocą Drosophila melanogaster

Ten artykuł opisuje test behawioralny, który wykorzystuje popęd godowy samców u Drosophila melanogaster do badania motywacji. Korzystając z tej metody, naukowcy mogą wykorzystać zaawansowane techniki neurogenetyczne much, aby odkryć mechanizmy genetyczne, molekularne i komórkowe, które leżą u podstaw tej motywacji.

Pomiar i zmiana popędu godowego u samca Drosophila melanogaster

Ten protokół opisuje test uczenia się i zapamiętywania u Drosophila zwany warunkowaniem zalotów. Ten klasyczny test opiera się na zmniejszeniu zachowań związanych z zalotami samców po odrzuceniu seksualnym przez niepodatną samicę z premfetem. Ta naturalna forma plastyczności behawioralnej może być wykorzystana do testowania uczenia się, pamięci krótkotrwałej i pamięci długotrwałej.

Drosophila Warunkowanie zalotów jako miara uczenia się i pamięci

Test Flypub mierzy zachowanie, jakie muszka owocowa Drosophila melanogaster przejawia pod wpływem etanolu. Test może być łatwo opanowany przez eksperymentatorów na wszystkich poziomach i stosowany do różnych odparowanych bodźców, ułatwiając badania nad nadużywaniem substancji i uzależnieniami.

Flypub do badania odhamowania behawioralnego i uwrażliwienia wywołanego etanolem

Ten protokół opisuje, jak stworzyć prostą komorę obserwacyjną zachowania dorosłego Drosophila i jak robić zdjęcia/filmy w wysokiej rozdzielczości morfologii lub zachowania różnych typów muszek owocowych w komorze obserwacyjnej za pomocą stosunkowo prostych i niedrogich metod.

Regulowany system obrazowania w wysokiej rozdzielczości do badań behawioralnych dorosłych Drosophila

Ta praca opisuje prosty paradygmat behawioralny, który pozwala na analizę awersyjnego uczenia się asocjacyjnego u dorosłych muszek owocowych. Metoda opiera się na tłumieniu wrodzonego negatywnego zachowania geotaksji ze względu na związek powstały między określonym kontekstem środowiskowym a porażeniem prądem.

Drosophila Pasywne zachowanie unikające jako nowy paradygmat badania awersyjnego uczenia się awersyjnego

Zaburzenie ze spektrum autyzmu (ASD) wiąże się z zaburzeniami zachowań społecznych i komunikacyjnych oraz pojawieniem się powtarzających się zachowań. W celu zbadania wzajemnych relacji między genami ASD a deficytami behawioralnymi w modelu Drosophila, w tym artykule opisano pięć paradygmatów behawioralnych do oceny odstępów społecznych, agresji, zalotów, pielęgnacji i zachowań habituacyjnych.

Paradygmaty oceny behawioralnej w modelu zaburzenia ze spektrum autyzmu Drosophila

Poznaj metodę badania agresji u muszek owocowych w kontrolowanych warunkach laboratoryjnych. Technika izolacji osobników i przygotowania aren walk pozwala analizować mechanizmy neuronalne zachowań agresywnych.

Badanie agresji u Drosophila (muszek owocówek)

Przeglądaj więcej filmów