Name: Hodowla piskląt ex ovo i test CAM ex ovo: jak to naprawdę działa (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-11-30T14:45:00.000+00:00
Duration: 17 min 23 s
Description: Poznaj technikę hodowli ex ovo i test CAM do badania angiogenezy oraz wzrostu nowotworów w modelu zarodka kurzego. Metoda umożliwia łatwą obserwację i dokumentację efektów eksperymentalnych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Autorzy pragną podziękować J. Kueperowi i J. Wittschierowi za doskonałą pomoc techniczną oraz prof. Ruebbenowi za hojne udostępnienie materiału nowotworowego.

<ol><li>Auerbach, R., Kubai, L., Knighton, D., Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+procedure+for+long-term+cultivation+of+chicken+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">A simple procedure for long-term cultivation of chicken embryos.</a> Dev. Biol. 41, 391-394 (1974).</li>
<li>Tufan, A. C., Akdogan, I., Adiguzel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shell-less+culture+of+the+chick+embryo+as+a+model+system+in+the+study+of+development+neurobiology%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroanatomy%22%5BJournal%5D)">Shell-less culture of the chick embryo as a model system in the study of development neurobiology.</a> Neuroanatomy. 3, 8-11 (2004).</li>
<li>Deryugina, E. I., Quigley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chick+embryo+chorioallantoic+membrane+models+to+quantify+angiogenesis+induced+by+inflammatory+and+tumor+cells+or+purified+effector+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymology%22%5BJournal%5D)">Chick embryo chorioallantoic membrane models to quantify angiogenesis induced by inflammatory and tumor cells or purified effector molecules.</a> Methods Enzymology. 444, 21-44 (2008).</li>
<li>Ribatti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chick+embryo+chorioallantoic+membrane+as+a+useful+tool+to+study+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+Rev.+Cell+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Chick embryo chorioallantoic membrane as a useful tool to study angiogenesis.</a> Int. Rev. Cell Mol. Biol. 270, 181-224 (2008).</li>
<li>Höckel, M., Sasse, J., Wissler, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purified+monocyte-derived+angiogenic+substance+%28angiotropin%29+stimulates+migration%2C+phenotypic+changes%2C+and+%22tube+formation%22+but+not+proliferation+of+capillary+endothelial+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Purified monocyte-derived angiogenic substance (angiotropin) stimulates migration, phenotypic changes, and "tube formation" but not proliferation of capillary endothelial cells in vitro.</a> J. Cell Physiol. 133, 1-13 (1987).</li>
<li>Wissler, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+of+blood+vessel+patterns+by+Angio+Morphogens+%5BAngiotropins%5D%5BTitle%5D)+AND+%22Materialwiss.+Werkstofftech%22%5BJournal%5D)">Engineering of blood vessel patterns by Angio Morphogens [Angiotropins].</a> Materialwiss. Werkstofftech. 32, 984-1008 (2001).</li>
<li>Kistler, H. B. J. r., LaVail, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Penetration+of+horseradish+peroxidase+into+the+optic+nerve+after+vitreal+or+vascular+injections+in+the+developing+chick%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Penetration of horseradish peroxidase into the optic nerve after vitreal or vascular injections in the developing chick.</a> Invest Ophthalmol. Vis. Sci. 20, 705-716 (1981).</li>
<li>Halfter, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Change+in+embryonic+eye+size+and+retinal+cell+proliferation+following+intravitreal+injection+of+glycosaminoglycans%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Change in embryonic eye size and retinal cell proliferation following intravitreal injection of glycosaminoglycans.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 49, 3289-3298 (2008).</li>
<li>Oppitz, M., Busch, C., Shriek, G., Metzger, M., Just, L., Drews, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-malignant+migration+of+B16+mouse+melanoma+cells+in+the+neural+crest+and+invasive+growth+in+the+eye+cup+of+the+chick+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Melanoma+Res%22%5BJournal%5D)">Non-malignant migration of B16 mouse melanoma cells in the neural crest and invasive growth in the eye cup of the chick embryo.</a> Melanoma Res. 17, 17-30 (2007).</li>
<li>Uchibayashi, T., Egawa, M., Nakajima, K., Hisazumi, H., Tanaka, M., Endo, Y., Sasaki, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Responses+of+tumour+cell+lines+implanted+onto+the+chorioallantoic+membrane+of+chick+embryo+to+anticancer+agents+in+combination+with+hyperthermia%5BTitle%5D)+AND+%22Urol.+Res%22%5BJournal%5D)">Responses of tumour cell lines implanted onto the chorioallantoic membrane of chick embryo to anticancer agents in combination with hyperthermia.</a> Urol. Res. 20, 237-239 (1992).</li>
<li>Demir, R., Naschberger, L., Demir, I., Melling, N., Dimmler, A., Papadopoulus, T., Sturzl, M., Klein, P., Hohenberger, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia+generates+a+more+invasive+phenotype+of+tumour+cells%3A+an+in+vivo+experimental+setup+based+on+the+chorioallantoic+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22Pathol.+Oncol.+Res%22%5BJournal%5D)">Hypoxia generates a more invasive phenotype of tumour cells: an in vivo experimental setup based on the chorioallantoic membrane.</a> Pathol. Oncol. Res. , (2008).</li>
<li>Kunzi-Rapp, K., Genze, F., Kufer, R., Reich, E., Hautmann, R. E., Gschwend, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chorioallantoic+membrane+assay%3A+vascularized+3-dimensional+cell+culture+system+for+human+prostate+cancer+cells+as+an+animal+substitute+model%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Urol%22%5BJournal%5D)">Chorioallantoic membrane assay: vascularized 3-dimensional cell culture system for human prostate cancer cells as an animal substitute model.</a> J. Urol. 166, 1502-1507 (2001).</li>
<li>Hall, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Grafting+of+organs+and+tissues+to+the+chorioallantoic+membrane+of+the+embryonic+chick%5BTitle%5D)+AND+%22TCA+Manual%22%5BJournal%5D)">Grafting of organs and tissues to the chorioallantoic membrane of the embryonic chick.</a> TCA Manual. 4 (3), 881-883 (1978).</li>
<li>Kunzi-Rapp, K., Kaskel, P., Steiner, R., Peter, R. U., Krahn, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+blood+levels+of+human+S100+in+melanoma+chick+embryo+xenografts%27+circulation%5BTitle%5D)+AND+%22Pigment+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Increased blood levels of human S100 in melanoma chick embryo xenografts' circulation.</a> Pigment Cell Res. 14, 9-13 (2001).</li>
<li>McFall, R. C., Sery, T. W., Makadon, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+new+continuous+cell+line+derived+from+a+human+retinoblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Characterization of a new continuous cell line derived from a human retinoblastoma.</a> Cancer Research. 37, 1003-1010 (1977).</li>
<li>Deryugina, E. I., Zijlstra, A., Partridge, J. J., Kupriyanova, T. A., Madsen, M. A., Papagiannakopoulos, T., Quigley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unexpected+effect+of+matrix+metalloproteinase+down-regulation+on+vascular+intravasation+and+metastasis+of+human+fibrosarcoma+cells+selected+in+vivo+for+high+rates+of+dissemination%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Unexpected effect of matrix metalloproteinase down-regulation on vascular intravasation and metastasis of human fibrosarcoma cells selected in vivo for high rates of dissemination.</a> Cancer Research. 65, 10959-10969 (2005).</li>
<li>Kim, J., Kovalski, K., Ossowski, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((requirement+for+specific+proteases+in+cancer+cell+intravasation+as+revealed+by+a+novel+semiquantitative+PCR-based+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">requirement for specific proteases in cancer cell intravasation as revealed by a novel semiquantitative PCR-based assay.</a> Cell. 94, 353-362 (1998).</li>
</ol>

Innowacyjny czy po prostu kolejny protokół hodowli zarodków kurzych?
W przypadku wcześniejszych protokołów hodowli bez skorupki1-4 całkowite wskaźniki przeżywalności embrionów kurzych były niskie, np. ok. 30%1. Udoskonalony protokół hodowli ex ovo opisany w niniejszym artykule wideo pozwala natomiast na osiągnięcie przeżywalności powyżej 50%. W porównaniu do klasycznych hodowli in ovo, hodowla embrionów kurzych ex ovo znacząco ułatwia dostęp do...

<table><tbody><tr><td>Zapłodnione jaja</td><td>Zwierzę</td><td>Sorries-Trockels Vermehrungszucht GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Myszy</td><td>Zwierzę</td><td>Charles River Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Inkubator typu 3000 z obrotową taca do jaj</td><td>Narzędzia</td><td>Siemens AG</td><td>9503</td><td>Utrzymać w temperaturze 37°C&amp;#x00B0;C z wilgotnością względną ustawioną na wartość powyżej 60%</td></tr><tr><td>Inkubator do jaj BSS 160</td><td>Narzędzia</td><td>Grumbach, Niemcy</td><td>8101</td><td>Utrzymywać w temperaturze 37–38°C przy wilgotności względnej ustawionej powyżej 60%</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Odczynnik</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td>PBS powinien być schłodzony (&lt;silny&gt;&amp;gt;&lt;/strong&gt; 4&amp;#x00B0;C) i sterylne</td></tr><tr><td>Dulbecco&amp;rsquo;zmodyfikowana pożywka Eagle'a&amp;rsquo;pożywka s</td><td>Odczynnik</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D 6429</td><td>pożywka DMEM</td></tr><tr><td>Leibovitz&amp;rsquo;pożywka L-15</td><td>Odczynnik</td><td>Invitrogen</td><td>31415-029</td><td>podłoże do pobierania próbek guzów</td></tr><tr><td>Medium specyficzne dla komórek nowotworowych</td><td>Odczynnik</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td>każdy zespół badawczy powinien użyć medium, w którym hoduje komórki nowotworowe, lub powszechnie stosowanych mediów hodowlanych, np. medium Leibovitza&amp;rsquo;podłoże lub Dulbecco&amp;rsquo;zmodyfikowana pożywka Eagle&amp;rsquo;pożywka s&lt;br/&gt;uzupełnione o 15% płodowej surowicy bydlęcej (FBS), 4 mM L-glutaminy oraz 50 &amp;#x03BC;insulina M</td></tr><tr><td>70% EtOH</td><td>Odczynnik</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mieszadło magnetyczne, trójkątne 80 mm</td><td>Narzędzie</td><td>VWR international</td><td>442-0391</td><td>Trójkątny mieszadło magnetyczne dobrze sprawdza się przy rozbijaniu skorup jaj.</td></tr><tr><td>Pinceta DUMONT #5 </td><td>Narzędzie</td><td>Fine Science Tools</td><td>11252-30</td><td>ukośne, bardzo cienkie trzpienie (końcówka 0,05 mm x 0,02 mm)</td></tr><tr><td>Pinceta DUMONT nr 7</td><td>Narzędzie</td><td>Fine Science Tools</td><td>11271-30</td><td>zakrzywione trzpienie (końcówka 0,07 mm x 0,10 mm)</td></tr><tr><td>Nożyczki sprężynowe, proste, 8 cm</td><td>Narzędzie</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-00</td><td>cienkie, małe ostrza proste</td></tr><tr><td>Precyzyjne nożyczki irydologiczne, proste</td><td>Narzędzie</td><td>Fine Science Tools</td><td>14094-11</td><td>Użyć do wycięcia błony chalazowej (CAM)</td></tr><tr><td>Standardowe nożyczki, proste, ostre/tępe</td><td>Narzędzie</td><td>Fine Science Tools</td><td>14007-14</td><td>Stosować do dekapitacji lub zwichnięcia stawów szyjnych</td></tr><tr><td>mikrostrzykawka 1702 TLLX, 25 &amp;mu;l</td><td>Narzędzie</td><td>Hamilton Co</td><td>80222</td><td>Do iniekcji do ciała szklistego</td></tr><tr><td>igła Hamilton 33-G (15 mm)</td><td>Narzędzie</td><td>Fine Science Tools</td><td>18073-15</td><td>Do wstrzyknięć do ciała szklistego</td></tr><tr><td>Sterylne skalpele</td><td>Narzędzie</td><td></td><td></td><td>Stosować do preparowania próbek guza</td></tr><tr><td>Mała łyżka drenująca</td><td>Narzędzie</td><td>Geuder</td><td>15758</td><td>Służy do przenoszenia małych zarodków kurzych</td></tr><tr><td>Klocek woskowy z pinezkami mocującymi</td><td>Narzędzie</td><td>Własnej produkcji</td><td></td><td>Stosowane do utrwalania zwierząt do sekcji</td></tr><tr><td>szalki Petriego 60 x 15 mm</td><td>Narzędzie</td><td>Greiner Bio-One</td><td>628102</td><td></td></tr><tr><td>Szalki Petriego 92 x 16 mm</td><td>Narzędzie</td><td>Sarstedt Ltd</td><td>82.1472</td><td></td></tr><tr><td>Sterylna szalka Petriego 100 x 20 mm</td><td>Narzędzie</td><td>Greiner Bio-One</td><td>664160</td><td>ekstra głębokie, z dystansami zapewniającymi wentylację</td></tr><tr><td>Zlewka</td><td>Narzędzie</td><td></td><td></td><td>300-600 ml</td></tr><tr><td>probówki Falcon</td><td>Narzędzie</td><td>Falcon BD</td><td></td><td>15 ml i 50 ml</td></tr><tr><td>probówki Eppendorf</td><td>Narzędzie</td><td>Eppendorf</td><td></td><td>1,5 ml i 2 ml</td></tr><tr><td>końcówki do pipety 1 ml</td><td>Narzędzie</td><td></td><td></td><td>Stosować do wycinania pierścieni plastikowych w celu aplikacji substancji / komórek</td></tr><tr><td>Obwodowy cewnik żylny (PVL)</td><td>Narzędzie</td><td>Viggo&amp;#174;</td><td></td><td>Służy do wycinania z rurki pierścieni silikonowych do aplikacji substancji / komórek</td></tr><tr><td>Pipety i końcówki do pipet</td><td>Narzędzie</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Autoklawowane filtry składane 595 1/2, średnica 110 mm</td><td>Narzędzie</td><td>Schleicher Schuell</td><td>311643</td><td>Nośnik, który spowodował najmniejsze podrażnienie błony przejrzystej jaja (CAM); wykorzystany w pracy</td></tr><tr><td>Platek PTFE, niewchłanialny, 6,3 x 152,4 x 1,6 mm</td><td>Narzędzie</td><td>santec-medical</td><td>REF 277, LOT 832/511-1</td><td>Nośnik; spowodował wyniki fałszywie dodatnie</td></tr><tr><td>Hydroksyetyloceluloza Tylose H 100000</td><td>Odczynnik</td><td></td><td></td><td>Nośnik zmieszany z Kollidon 17 PF; spowodował wyniki fałszywie dodatnie</td></tr><tr><td>Kollidon 17 PF</td><td>Odczynnik</td><td>BASF</td><td>S30200</td><td>wymieszano z hydroksyetylocelulozą; spowodowało to wyniki fałszywie dodatnie</td></tr><tr><td>Kolagenowa biomacierz TissuDura</td><td>Narzędzie</td><td>Baxter International Inc.</td><td>REF B2246000999999</td><td>Nośnik; spowodował wyniki fałszywie dodatnie</td></tr><tr><td>Okrągłe szkiełka okrywkowe, 11 mm</td><td>Narzędzie</td><td>Asystent Niemcy</td><td>1001/0011</td><td>Nośnik; powoduje wyniki fałszywie dodatnie</td></tr><tr><td>Gąbka kolagenowa z bydlęcej skóry</td><td>Narzędzie</td><td>Wyeth Animal Health</td><td></td><td>Nośnik; spowodował wyniki fałszywie dodatnie</td></tr><tr><td>Wchłanialna błona kolagenowa Resodont</td><td>Narzędzie</td><td>Resorba Woundcare Niemcy</td><td>PARTIA 280303</td><td>Nośnik; spowodował wyniki fałszywie dodatnie</td></tr><tr><td>Tampony niewyplecione</td><td>Narzędzie</td><td>Fink Walter GmbH</td><td>REF 328132</td><td>Nośnik; spowodował wyniki fałszywie dodatnie</td></tr></tbody></table>

hodowla kurcząt ex ovo oraz test cam ex ovo: jak to naprawdę działa

Chick ex ovo Culture and ex ovo CAM Assay: How it Really Works

Jaja kurze we wczesnej fazie inkubacji stanowią system pośredni między układami in vitro a in vivo i zapewniają unaczynione środowisko testowe, które pozwala na badanie nie tylko angiogenezy, ale także tumorigenozy. Po wykształceniu się błony chorioallantoicznej (CAM) kurczaka, jej sieć naczyń krwionośnych staje się łatwo dostępna, podatna na manipulacje i możliwa do obserwacji, co czyni ją optymalnym układem do przeprowadzania testów angiogenezy. Ponieważ układ limfatyczny nie jest w pełni rozwinięty aż do późnych etapów inkubacji, embrion kurczaka służy jako naturalnie immunodeficyjny organizm gospodarza, zdolny do utrzymania przeszczepionych tkanek i komórek bez ograniczeń specyficznych dla gatunku. Poza wspieraniem rozwijających się allograftów i ksenograftów, sieć naczyń krwionośnych CAM zapewnia wyjątkowo sprzyjające środowisko dla intravasacji, dysseminacji i zatrzymania naczyniowego komórek nowotworowych, a także stanowi rezerwuar, w którym zatrzymane komórki ulegają extravasacji, tworząc mikroogniska przerzutowe.
W celach eksperymentalnych w większości niedawnych badań błonaałantowo-chorionowa (CAM) była eksponowana poprzez wycięcie okienka w skorupce jaja, a eksperymenty przeprowadzano in ovo, co skutkowało znacznymi ograniczeniami w dostępie do CAM oraz w możliwościach obserwacji i dokumentacji fotograficznej efektów. W przypadku zastosowania kultur zarodka kury bez skorupki1-4 nie podano szczegółów eksperymentalnych, a jeśli w ogóle były publikowane, wskaźniki przeżywalności tych kultur były niskie. Znacząco udoskonaliliśmy metodę hodowli zarodków kury ex ovo, wprowadzając racjonalnie kontrolowaną ekstruzję zawartości jaja. Hodowle ex ovo zwiększają dostępność CAM i zarodka kury, umożliwiając łatwą dokumentację efektów in vivo oraz ułatwiając manipulacje eksperymentalne z zarodkiem. Pozwala to na skuteczne zastosowanie tej metody w odpowiedzi na liczne pytania naukowe: (1) jako ulepszony test angiogenezy5,6, (2) jako układ eksperymentalny ułatwiający iniekcje do ciała szklistego oka zarodka kury7-9, (3) jako środowisko testowe dla rozsiewania i intrawazacji rozproszonych komórek nowotworowych z ustalonych linii komórkowych inokulowanych na CAM10-12, (4) jako ulepszony system podtrzymujący dla skutecznej transplantacji i hodowli pąków kończyn kur i myszy13, a także (5) do przeszczepiania, propagacji i ponownego przeszczepiania litej tkanki guza pierwotnego uzyskanej z biopsji na powierzchnię CAM14.
W niniejszym artykule wideo opisujemy ustanowienie udoskonalonej hodowli kurczaka ex ovo oraz testu CAM z przeżywalnością przekraczającą 50%. Ponadto przedstawiamy szczegółową instrukcję krok po kroku dotyczącą udanego zastosowania hodowli ex ovo w szerokim zakresie zastosowań naukowych. 
Daniel S. Dohle, Susanne D. Pasa i Sebastian Gustmann wnieśli równy wkład w to badanie.

Błona chorioallantoiczna (CAM) zarodka kurczaka stanowi unikalne, naturalnie immunodeficyjne środowisko hodowlane do badania angiogenezy i tumorigenzy. Niniejszy artykuł wideo prezentuje poszczególne etapy hodowli kurczaka ex ovo, aplikację substancji potencjalnie angiogennych oraz skuteczną inokulację komórek i tkanek nowotworowych na powierzchni CAM.

Hodowla kurcząt ex ovo oraz test CAM ex ovo: jak to naprawdę działa

Jaja kurze we wczesnej fazie inkubacji stanowią system pośredni między układami in vitro a in vivo i zapewniają unaczynione środowisko testowe, które pozwala nie tylko na badanie...

Witajcie, jestem Susan Paa. Pracuję w Instytucie Chemii Fizjologicznej, w katedrze Endokrynologii Biochemicznej na Uniwersytecie w Burg Esen w Niemczech. Cześć, jestem Daniel Ze Basian Dole.Pochodzę z tej samej instytucji co Susan. Cześć, jestem Mann z Instytutu Anatomii w Katedrze Neurologii na Uniwersytecie w Burg. Pokażemy Państwu, jak w praktyce przebiega hodowla CH X oraz test błony współhodowlanej.Przejdźmy zatem do laboratorium. W większości niedawnych badań eksperymentalnych błona CAM, czyli błona żółtkowo-allantoiczna, była eksponowana poprzez wycięcie okna w skorupce jaja, a eksperymenty przeprowadzano in ovo, co skutkowało znacznymi ograniczeniami w dostępności do CAM oraz w możliwościach obserwacji i dokumentacji fotograficznej efektów. Hodowle zarodków kurzych ex ovo znacznie ułatwiają dostęp do CAM oraz do zarodka kurczego.Prosimy zwrócić uwagę na bijące serce, które umożliwia łatwą dokumentację efektów in vivo oraz manipulacje eksperymentalne na embrionie. W naszym artykule wideo przedstawimy instruktaż krok po kroku dotyczącą skutecznego zastosowania hodowli ex ovo w odpowiedzi na liczne pytania naukowe. Jaja są inkubowane w inkubatorze z ruchomą taca.Tutaj widoczny

chick-ex-ovo-culture-and-ex-ovo-cam-assay-how-it-really-works

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Hodowla kurcząt ex ovo i test CAM ex ovo: Jak to naprawdę działa

W tym filmie zaprezentowano New culture – metodę, dzięki której zarodki kurcząt są hodowane poza jajem przez maksymalnie 24 hr. Metoda ta umożliwia badanie wczesnego rozwoju (od pręgi pierwotnej do 14 som.), co odpowiada okresowi E7-9 u myszy. Zastosowania tej techniki obejmują elektroporację, hybrydyzację in situ oraz immunohistochemię.

Metoda hodowli wczesnych zarodków kurczaka ex vivo (nowa hodowla)

W niniejszym artykule przedstawiamy prostą metodologię umożliwiającą długotrwałą hodowlę embrionów ptaków ex-ovo. Technika ta jest idealna do eksperymentów podłużnych, które wymagają pełnej dostępności optycznej i/lub sterylnego transportu embrionów ptaków.

System hodowli embrionów kurzych ex-ovo odpowiedni do obrazowania i zastosowań mikrochirurgicznych

Błona kosmówkowo-omoczniowa (CAM) in ovo jest przeszczepiona świeżymi tkankami nowotworowymi pochodzącymi z mięsaka, ich pojedynczymi zawieszeniami komórkowymi oraz stałymi i przejściowymi fluorescencyjnie znakowanymi liniami komórkowymi mięsaka. Model służy do badania zachowań przeszczepu (żywotność, wskaźnik proliferacji Ki67, martwica, infiltracja) i gospodarza (naciekanie fibroblastów, wrastanie naczyń).

Test CAM in ovo jako model ksenoprzeszczepu mięsaka

Hodowle embrionalnych komórek siatkówki kurcząt stanowią cenne narzędzia do badania biologii fotoreceptorów. Opracowaliśmy skuteczną technikę transferu genów opartą na elektroporacji plazmidowej siatkówki ex ovo przed hodowlą. Technika ta znacznie zwiększa wydajność transfekcji w porównaniu z obecnie dostępnymi protokołami, dzięki czemu manipulacja genetyczna jest możliwa dla tego systemu.

Efektywny transfer genów w siatkówkach piskląt w badaniach pierwotnych hodowli komórkowych: podejście do elektroporacji ex-ovo

Oglądanie i dostęp do zarodka kurczaka podczas rozwoju może być wyzwaniem. Opracowaliśmy metodę ex ovo, która jest prosta, opłacalna i może być łatwo stosowana w klasie lub w środowisku badawczym. Metoda ta zapewnia dostęp do zarodka w późnych stadiach rozwoju zarodkowego (HH 40).

Zoptymalizowana hodowla ex-ovo zarodków piskląt do zaawansowanych etapów rozwoju

Błona kosmówkowo-omoczniowa (CAM) jest niedoszczepiona immunologicznie i wysoce unaczyniona, co czyni ją naturalnym modelem in vivo wzrostu guza i angiogenezy. W tym protokole opisujemy wiarygodną metodę hodowli trójwymiarowych, unaczynionych guzów raka wątrobowokomórkowego (HCC) za pomocą testu CAM.

Test błony chorioomoczniowej piskląt in ovo (CAM) jako skuteczny model ksenoprzeszczepu raka wątrobowokomórkowego

Tutaj prezentujemy protokół do badania inwazji komórek nowotworowych na żywe normalne fragmenty tkanek w trzech wymiarach. Ta technika hodowli narządowej jest stosowana głównie do testowania potencjalnie przeciwinwazyjnych leków in vitro.

Test inwazji serca piskląt do badania inwazyjności komórek rakowych i aktywności potencjalnie przeciwinwazyjnych związków

Tutaj prezentujemy nową technikę hodowli zarodków piskląt ex ovo do obrazowania poklatkowego przy użyciu światła przechodzącego i mikroskopii fluorescencyjnej. Kanapka z zanurzoną bibułą filtracyjną jest wariantem dobrze znanej techniki nośnika bibuły filtracyjnej1, która pozwala na hodowlę zarodków piskląt całkowicie zanurzonych w płynnej pożywce hodowlanej.

Zanurzona kanapka z bibuły filtracyjnej do długoterminowego obrazowania poklatkowego ex ovo wczesnych zarodków piskląt

Błona kosmówkowo-omoczniowa (CAM) ptasiego zarodka jest bardzo użytecznym i przydatnym narzędziem w różnych dziedzinach badań. Specjalny model ex ovo przepiórki japońskiej CAM nadaje się do badań nad leczeniem fotodynamicznym.

Przepiórcza błona chorioallantoiczna - narzędzie do diagnostyki i terapii fotodynamicznej

Tutaj opisujemy protokół rozwoju modelu ksenoprzeszczepu błony kosmówkowo-omoczniowej (CAM) dla ludzkiej tkanki jajnika i demonstrujemy skuteczność tej techniki, ramy czasowe rewaskularyzacji przeszczepu oraz żywotność tkanki w ciągu 6-dniowego okresu szczepienia.

Model błony moczowo-omoczniowej kurcząt (CAM) jako narzędzie do badania przeszczepu tkanki jajnika

Poznaj technikę hodowli ex ovo i test CAM do badania angiogenezy oraz wzrostu nowotworów w modelu zarodka kurzego. Metoda umożliwia łatwą obserwację i dokumentację efektów eksperymentalnych.

Hodowla kurcząt ex ovo oraz test CAM ex ovo: jak to naprawdę działa

Przeglądaj więcej filmów