Name: Wykorzystanie odpowiedzi optokinetycznej do badania funkcji wzrokowych danio pręgowanego (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-02-02T18:45:00.000+00:00
Duration: 8 min 59 s
Description: Poznaj nową metodę pomiaru odpowiedzi optokinetycznej u dorosłych danio pręgowanych. Protokół umożliwia badanie funkcji wzrokowych i analizę ruchów gałek ocznych w modelu zwierzęcym.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dziękujemy Pani Fan Shen za wsparcie w hodowli zebrafish. Praca ta została sfinansowana z grantów przyznanych dr. Bing Hu (Chińska Akademia Nauk, „Bai Ren Ji Hua”, NSFC 30870833 oraz Narodowy Program Nauk Podstawowych Chin, 2009CB941302).
Wszystkie eksperymenty na zwierzętach zostały przeprowadzone zgodnie z wytycznymi i przepisami ustanowionymi przez Centrum Zasobów Zwierzęcych Uniwersytetu Nauki i Technologii w Chinach (USTC) oraz Uniwersytecką Komisję ds. Opieki i Wykorzystania Zwierząt.

Część I: Konstrukcja aparatury OKR
Szczegóły przedstawiono w demonstracji wideo.
Część II: OKR dorosłych danio-pręgowanych
Jeśli w Twoim laboratorium zbudowano aparat OKR, kluczowym elementem badania OKR u dorosłych danio pręgowanych jest unieruchomienie ryby. W tej części przedstawimy ten proces krok po kroku.
Nasze urządzenie składa się z następujących części, podobnych do tych wymienionych wcześniej. Okrągła komora dla ryb ma średnicę zewnętrzną 7,0 cm, średnicę wewnętrzną 6,5 cm i wysokość 7,0 cm. Bęben otaczający komorę dla ryb ma średnicę zewnętrzną 8,5 cm, średnicę wewnętrzną 7,5 cm i wysokość 7,0 cm. Może on obracać się zgodnie i przeciwnie z ruchem wskazówek zegara z prędkością od 20~70 rpm. Jedenaście cykli czarnych i białych pasów zostało narysowanych na papierze kalkowym, który przyklejono do zewnętrznej strony bębna. System oświetlenia składa się z dwóch okrągłych świetlówek o średnicy 21 cm.
<img src="/files/ftp_upload/1742/1742fig1.jpg" alt="Schemat dwóch ułożonych jeden na drugim sześcianów z oznaczonymi wymiarami, ilustrujący obliczanie objętości przestrzennej." data-altupdatedat="1761735611000" data-alt="Rysunek 1"> Rysunek 1. Model gąbki. Wycięcie wykonane w środku służy zapewnieniu, aby pole widzenia nie było przesłonięte.
<ol>
<li>Gąbka przedstawiona na Rys. 1 składa się z dwóch części. Część lewa ma wymiary: długość 3 cm x szerokość 3 cm x wysokość 2 cm. Część prawa ma wymiary: długość 3 cm x szerokość 3 cm x wysokość 3 cm.</li>
<li>Umieść tę gąbkę na dnie komory dla ryb i wlej wodę hodowlaną do głębokości około 2 cm. Należy usunąć pęcherzyki powietrza uwięzione w gąbce.</li>
<li>Wbij pinezkę w przednią część prawej strony gąbki, około 2 mm za krawędzią.</li>
<li>Zanurz dorosłego zebrafisha w roztworze MS-222 w celu znieczulenia.</li>
<li>Połóż zebrafisha na gąbce grzbietem do góry, tak aby jedna z jego płetw piersiowych znajdowała się przed pierwszą pinezką.</li>
<li>Drugą pinezkę wbij za drugą płetwą piersiową. Wraz z pierwszą pinezką zapobiega to kurczeniu się ciała zebrafisha (patrz również Rys. 2).</li>
<li>Zaciśnij ogon kleszczykami naczyniowymi i zamocuj kleszczyki w kawałku gumy (plasteliny) przyklejonym do komory dla ryb.</li>
<li>Trzecią i czwartą pinezkę wbij w okolicy otworu kloaki ciała ryby. Zapobiega to intensywnemu machaniu ogonem przez zebrafisha.</li>
<li>Piątą pinezkę umieść pomiędzy pierwszą a trzecią pinezką, a następnie szóstą pinezkę po przeciwnej stronie. Zapobiegną one drżeniu ciała zebrafisha.</li>
<li>Siódmą i ósmą pinezkę wbij w okolicach skrzeli, aby utrzymać orientację głowy.</li>
<li>Dolej wodę hodowlaną do komory dla ryb.</li>
<li>Po wybudzeniu się zebrafisha pozwól mu na aklimatyzację przez 5~10 minut.</li>
<li>Włącz światło w aparacie i pozwól zebrafishowi przyzwyczaić się do oświetlenia przez 2 minuty.</li>
<li>Włącz silnik napędzający kratkę i pozwól zebrafishowi na adaptację przez 1 minutę.</li>
<li>Włącz kamerę i zarejestruj ruchy oczu.</li>
<li>Przeanalizuj kąty ustawienia oczu6 oraz liczbę sakad na komputerze osobistym (reprezentatywny przykład analizy kątów ustawienia oczu przedstawiono na Rys. 2).</li>
</ol>
<img src="/files/ftp_upload/1742/1742fig2.jpg" alt="schemat analizy lokomocji ryb z punktami śledzenia i wykresem kąta ruchu w czasie" data-altupdatedat="1761735611000" data-alt="Rycina 2"> Rycina 2. Kąt pomiędzy osią oka a osią ciała. 
a) Gdy kierunek prążkowania jest od strony nosowej do skroniowej, zdefiniowano, że kąt przed ciałem ryby jest kątem ujemnym, a kąt przy ciele ryby jest kątem dodatnim i na odwrót (w celu krótkiego przeglądu patrz również Ref. 6). Liczby na rysunku reprezentują kolejność pinów. 
b) Przykład analizy OKR u jednej ryby z grupy kontrolnej. Jednosekundowy film przeniesiono do serii klatek, a kąty oczu na każdej klatce zmierzono za pomocą oprogramowania Image-pro Plus. Każdy punkt na tym wykresie reprezentuje każdą zmierzoną klatkę.
Uwagi:
<ol class="lalpha">
<li>Wszystkie piny służą jedynie do zapobiegania drganiom ciała danio prążkowanego; zbyt mocne ich dociśnięcie może zaszkodzić rybie.</li>
<li>Zacisk tętniczy może uszkodzić ogon ze względu na małą powierzchnię styku. Po uwolnieniu ogona bardzo trudno jest ponownie unieruchomić rybę. W niektórych przypadkach zaleca się owinięcie ogona bandażem.</li>
<li>Siódmy i ósmy pin, umieszczane w okolicy skrzeli, nie powinny zasłaniać rybie widoczności kratki.</li>
</ol>

Część III. OKR larw danio pręgowanego
1. Metyloceluloza
Larwy danio pręgowanego można unieruchomić w 6% roztworze metylocelulozy, utrzymując je przy życiu przez długi czas. Roztwór metylocelulozy należy przygotować w następujący sposób.
<ol>
<li>Zagotować 200 ml ddH2O w kuchence mikrofalowej przez około 3 minuty na wysokiej mocy.</li>
<li>Przenieść gorącą wodę na mieszadło magnetyczne z podgrzewaniem i intensywnie mieszać.</li>
<li>Stopniowo dodawać 12 g metylocelulozy do gorącej wody.</li>
<li>Mieszać przez kolejne 3 minuty, aż metyloceluloza zostanie dobrze zdyspergowana.</li>
<li>Schłodzić roztwory w kąpieli lodowej, aż staną się klarowne, a następnie przechowywać w temperaturze 4°C.</li>
</ol>
2. Larwy danio pręgowanego
<ol>
<li>W zbiorniku do tarła umieszcza się dwa samce i jedną samicę dorosłych danio pręgowanych o godzinie 17:00 po karmieniu. Następnego ranka przenosi się je do świeżego zbiornika do tarła i zbiera zarodki po 1 godzinie.</li>
<li>Jaja utrzymuje się w pożywce dla zarodków w inkubatorze w temperaturze 28,5±0,5°C przy cyklu światła i ciemności 14:10.</li>
<li>Kluski wykluwają się 48 godzin po zapłodnieniu (hpf), a OKR jest testowany w 72 hpf lub później. W tym filmie larwy znajdują się w 5 dpf.</li>
</ol>
3. Procedura OKR
<ol>
<li>Umieść aparat pod stereomikroskopem wyposażonym w kamerę CCD i włącz oświetlenie urządzenia.</li>
<li>Do szalki Petriego o średnicy 55 mm dodaj 20 ml 6% metylocelulozy.</li>
<li>Umieść kilka larw w rzędzie w centrum szalki.</li>
<li>Wprowadź w pole widzenia kamery pęcherzyk powietrza o objętości około 1 μl, który może służyć jako lustro do odbijania kierunku kratki.</li>
<li>Włącz silnik i zarejestruj ruchy ich oczu.</li>
</ol>

Część IV. OMR u dorosłych danio pręgowanych
Badanie OMR u dorosłych rybek danio również można przeprowadzić przy użyciu tego urządzenia; wystarczy umieścić kolumnę w komorze dla ryb, aby zapobiec ich przepływaniu przez środek (pokazano na Ryc. 3a, prędkość obrotowa wynosi 36 rpm, cykle czarno-białe wynoszą 11).
<ol>
<li>Umieść rybę w komorze dla ryb.</li>
<li>Ustaw kolumnę o średnicy 2 cm w centrum komory dla ryb.</li>
<li>Przeprowadź adaptację przez jedną minutę zarówno przy nieruchomej kratce, jak i przy kratce obrotowej.</li>
<li>Zarejestruj ruch zebrafish.</li>
<li>Przeanalizuj współczynnik zbieżności czasowej na komputerze osobistym (przykład pokazano na ryc. 3b; prędkość obrotowa wynosi 36 rpm, cykl czarno-biały wynosi 11)</li>
</ol>
<img src="/files/ftp_upload/1742/1742fig3.jpg" alt="Danio pręgowany w szalce Petriego (a) oraz wykres słupkowy odpowiedzi na bodziec (b), przedstawiający wskaźniki koincydencji." data-altupdatedat="1761735611000" data-alt="Rysunek 3"> Rysunek 3. OMR u dorosłych osobników Danio pręgowanego. (a) W centrum komory dla ryb umieszczono białą plastikową kolumnę, aby zapobiec przepływaniu ryb przez nią. (b) Wskaźnik koincydencji dorosłych osobników Danio pręgowanego podążających za prążkami. Wskaźnik koincydencji zdefiniowano jako stosunek czasu podążania za prążkami do całkowitego czasu rejestracji. Wartość 50% wskazuje na przypadkowe pływanie ryby, natomiast 100% oznacza bardzo dokładne podążanie za prążkami. Oba nerwy wzrokowe zostały zmiażdżone pęsetą jubilerską przez około 10 sekund. Po zmiażdżeniu zachowanie OMR objawiało się jako przypadkowe pływanie.

<ol><li>Beck, J., Gilland, E., Tank, D., Baker, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+the+Ontogeny+of+Optokinetic+and+Vestibuloocular+Behaviors+in+Zebrafish+Medaka%2C+and+Goldfish%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Quantifying the Ontogeny of Optokinetic and Vestibuloocular Behaviors in Zebrafish Medaka, and Goldfish.</a> J Neurophysiol. 92, 3546-3561 (2004).</li>
<li>Brockerhoff, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+the+optokinetic+response+of+zebrafish+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Measuring the optokinetic response of zebrafish larvae.</a> Nature Protocols. 1, 2448-2451 (2006).</li>
<li>Emran, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OFF+ganglion+cells+cannot+drive+the+optokinetic+reflex+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">OFF ganglion cells cannot drive the optokinetic reflex in zebrafish.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 104, 19126-19131 (2007).</li>
<li>Rinner, O., Rick, J., Neuhauss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contrast+Sensitivity%2C+Spatial+and+Temporal+Tuning+of+the+Larval+Zebrafish+Optokinetic+Response%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Contrast Sensitivity, Spatial and Temporal Tuning of the Larval Zebrafish Optokinetic Response.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 46, 137-142 (2005).</li>
<li>Roeser, T., Baier, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visuomotor+Behaviors+in+Larval+Zebrafish+after+GFP-Guided+Laser+Ablation+of+the+Optic+Tectum%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Visuomotor Behaviors in Larval Zebrafish after GFP-Guided Laser Ablation of the Optic Tectum.</a> The Journal of Neuroscience. 23, 3726-3734 (2003).</li>
<li>Easter, S., Nicola, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Development+of+Vision+in+the+Zebrafish+%28Danio+rerio%29%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">The Development of Vision in the Zebrafish (Danio rerio).</a> Developmental Biology. 180, 646-663 (1996).</li>
<li>Maaswinkel, H., Li, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatio-temporal+frequency+characteristics+of+the+optomotor+response+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Vision+Research%22%5BJournal%5D)">Spatio-temporal frequency characteristics of the optomotor response in zebrafish.</a> Vision Research. 43, 21-30 (2003).</li>
</ol>

Zgodnie z definicją OKR jest to zjawisko, w którym zwierzęta poruszają oczami, aby spontanicznie śledzić obracającą się kratkę. Jeśli zachowanie to trwa przez dłuższy czas (np. powyżej 6 godzin), mięśnie gałki ocznej mogą ulec zmęczeniu, co doprowadzi do osłabienia odpowiedzi OKR.
Odpowiedź optokinetyczna (OMR) u dorosłych rybek zebrafish została w pełni opisana przez innych autorów7. W tym filmie prezentujemy jedynie to zachowanie z wykorzystaniem naszej aparatury. Po zmiażdżeniu ...

<table><tbody><tr><td>Metyloceluloza</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M6385</td><td>Lepkość 25 cP</td></tr></tbody></table>

wykorzystanie odpowiedzi optokinetycznej do badania funkcji wzrokowych u rybek danio

Using the optokinetic response to study visual function of zebrafish

Odruch optokinetyczny (OKR) to zachowanie polegające na tym, że zwierzę wykonuje ruchy gałek ocznych w celu śledzenia obracającej się wokół niego kratki. Jest on powszechnie wykorzystywany do oceny funkcji wzrokowych larw zebrafish1-5. Niemniej jednak standardowy protokół dla larb ryb nie jest jeszcze łatwo stosowalny u dorosłych osobników zebrafish. W niniejszym materiale przedstawiamy sposób pomiaru OKR u dorosłych zebrafish z wykorzystaniem naszego prostego, autorskiego urządzenia oraz nowego protokołu opracowanego w naszym laboratorium. Zarówno konstrukcja urządzenia, jak i procedura pomiaru OKR u dorosłych zebrafish krok po kroku zostały przedstawione w tym filmie. Ponadto w filmie zaprezentowano pomiary OKR u larw, a także test odruchu optomotorycznego (OMR) u dorosłych zebrafish. Przeprowadzony przez nas test OKR u dorosłych zebrafish może trwać do 4 godzin. Zastosowanie testu OKR u dorosłych ryb pozwoli na bardziej efektywne badanie funkcji wzrokowych w sytuacjach, gdy układ wzrokowy dorosłych ryb zostaje poddany manipulacjom.
Su-Qi Zou i Wu Yin wnieśli równy wkład w tę pracę.

Reakcja optokinetyczna była szeroko stosowana do oceny funkcji wzrokowych larw danio prążkowanego. Niemniej jednak standardowy protokół dla ryb larwalnych nie jest jeszcze łatwo stosowalny u osobników dorosłych1-5. W niniejszej pracy przedstawiamy sposób pomiaru OKR u dorosłych danio prążkowanych z wykorzystaniem nowego protokołu opracowanego w naszym laboratorium.

Wykorzystanie odpowiedzi optokinetycznej do badania funkcji wzrokowych u rybek danio

Odpowiedź optokinetyczna (OKR) to zachowanie polegające na tym, że zwierzę porusza gałkami ocznymi w sposób wibrujący, aby śledzić obracającą się wokół niego kratkę. Jest ona powszechnie stosowana do oceny...

Cześć wszystkim. Nazywam się Mean Jing i pochodzę z USTC. Jak wiemy, optokinetyczna odpowiedź, w skrócie OKR, to test behawioralny, w którym zwierzę porusza oczami, aby śledzić przesuwające się pasy.Poruszanie się wokół obiektu. Zachowanie to było szeroko wykorzystywane. Ocena funkcji wzrokowych larw danio pręgowanego.Jednak metoda wykorzystująca standardowy protokół do unieruchomienia larw ryb nie jest łatwo możliwa do zastosowania w przypadku osobników dorosłych. Dlatego w tym filmie zaprezentujemy nowy protokół, który umożliwia rejestrację OKR u osobników dorosłych. Ponadto, w ramach porównania, zademonstrujemy test OKR dla larw ryb oraz test OMR dla dorosłych ryb.Przez OMRB rozumiem odpowiedź motoryczną. Teraz pokażę Państwu wygląd naszej dostosowanej aplikacji OKR. Wygląda ładnie, prawda?W tej konfiguracji znajduje się podstawa siatki napędzana silnikiem. Tubus siatki spoczywa na tej podstawie i obraca się wraz z nią. Nad podstawą siatki umieszczona jest płyta komory, która nie obraca się, a do oświetlenia siatki służy okrągła lampa.I to wszystko. Wystarczy umieścić komorę z rybą na płytce komory i jesteśmy gotowi do działania. Cześć, jestem Sui.Cześć, jestem W. Pracujemy w dziale rozwoju neuronów i ELL w USPC. Dzisiaj zaprezentujemy Państwu test wysokoprzepustowy u danio-ostrobramka. Zaczynajmy.W pierwszej kolejności przedstawimy sposób przeprowadzenia testu OKR u dorosłych rybek danio pręgowanych. Włóż gąbkę do komory dla ryb i wlej do niej wodę. Lekko ściśnij gąbkę, aby pozbyć się pęcherzyków powietrza.Teraz pokażemy krok po kroku, jak unieruchomić rybę za pomocą szpilek. Teraz lekko poruszajmy rybą, aby upewnić się, że płetwa grzbietowa jest skierowana ku górze, i wyprostujmy ogon, aby ciało było proste. Użyj zacisku tętniczego do unieruchomienia płetwy ogonowej, a następnie przymocuj zacisk do komory za pomocą plasteliny modelarskiej.Po unieruchomieniu wlej do komory więcej wody i skieruj strumień wody w stronę ryby, aby ją wybudzić. Teraz przygotowania są już zakończone i jesteśmy gotowi na właściwą procedurę. Jest to test OKR.Należy zauważyć, że dwa obiekty w górnej części ekranu są jedynie odbiciem siatki na główce szpilki. Teraz sprawdźmy, w jaki sposób przeprowadziliśmy test OKR larw. Umieściliśmy samca i samicę ryby w zbiorniku do rozrodu i pozwoliliśmy im złożyć ikrę.Następnie zbieramy jaja i przenosimy je do szklanego naczynia. Do utrwalenia larw ryb używamy roztworu meth cellose. Roztwór po podgrzaniu musi zostać szybko schłodzony.Następnie umieszczamy to w wodzie z lodem i delikatnie wstrząsamy do momentu, aż roztwór stanie się przezroczysty. Teraz przelej 20 mililitrów metylocelulozy do naczynia. Upewnij się, że w roztworze nie ma pęcherzyków powietrza.Umieść larwy w rzędzie w roztworze. Wprowadź małą pęcherzyk powietrza o objętości 1 µL w pole widzenia, aby można było zobaczyć odbicie graduacji. Jest to demonstracja zachowania OKR u larw dzikiego typu zebrafish.Na koniec pokażemy, jak przeprowadzić test OMR u dorosłych rybek danio pręgowanych. Po pierwsze, złap rybę i umieść ją w komorze dla ryb. Następnie ustaw komorę dla ryb w odpowiednim miejscu.Następnie zamontuj biały cylinder w centrum komory, aby ryby nie mogły przejść przez środek przed rozpoczęciem testu. Zaleca się, aby ryby adaptowały się do tych warunków oświetleniowych przez jedną minutę. To była demonstracja testu OMR dla dorosłych rybek danio pręgowanych.Przedstawiliśmy sposób przeprowadzenia testu OKR u dorosłych rybek zebra. W tym teście podjęliśmy próbę unieruchomienia rybek zebra za pomocą szpilek zamiast metylocelulozy. Stosując tę metodę, udało nam się zarejestrować silną odpowiedź, która trwała ponad cztery godziny.Zapewni to eksperymentatorom wystarczającą ilość czasu.

using-the-optokinetic-response-to-study-visual-function-of-zebrafish

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Zastosowanie odpowiedzi optokinetycznej do badania funkcji wzrokowej u danio pręgowanego

Opracowaliśmy metodę odpowiedzi wizualno-motorycznej (Visual-Motor Response), aby ilościowo określić reakcję motoryczną larw zebrafish w odpowiedzi na przyrosty i spadki natężenia światła. Zbadaliśmy również mutanty wzroku zebrafish, w tym mutanty z brakiem odpowiedzi optokinetycznej (nrc), które uznano za całkowicie niewidome podczas testowania za pomocą innego badania wzroku – odruchu optokinetycznego.

Test behawioralny do pomiaru reaktywności rybek zebrafish na zmiany natężenia światła

VisioTracker to zautomatyzowany system do ilościowej analizy sprawności wzrokowej larw i niewielkich osobników dorosłych ryb, oparty na rejestracji ruchów gałek ocznych. Charakteryzuje się on pełną kontrolą nad właściwościami bodźców wzrokowych oraz analizą w czasie rzeczywistym, co umożliwia prowadzenie wysokoprzepustowych badań w takich dziedzinach jak rozwój i funkcje układu wzrokowego, farmakologia, badania obwodów neuronalnych oraz integracja sensoromotoryczna.

VisioTracker, innowacyjne zautomatyzowane podejście do analizy okulomotorycznej

Ten film opisuje test odpowiedzi optokinetycznej u danio pręgowanego. Film mierzy odruchowe ruchy gałek ocznych w oparciu o bodźce wzrokowe poruszające się i określa ostrość wzroku u danio pręgowanego.

Test odpowiedzi optokinetycznej: metoda pomiaru ostrości wzroku u danio pręgowanego

Ten film opisuje techniki optogenetyczne poprzez aktywację genetycznie zmodyfikowanych neuronów somatosensorycznych i rejestrowanie wywołanych reakcji behawioralnych za pomocą szybkiej kamery wideo.

Optogenetyka danio pręgowanego: aktywacja genetycznie zmodyfikowanego neuronu somatosensorycznego w celu zbadania reakcji behawioralnych larw

Techniki optogenetyczne umożliwiły badanie wpływu określonych neuronów na zachowanie.  Opisujemy metodę u larw danio pręgowanego do aktywacji pojedynczych neuronów somatosensorycznych wyrażających wariant rodopsyny kanałowej (ChEF) za pomocą lasera na ciele stałym pompowanym diodą (DPSS) i rejestrowania wywołanych zachowań za pomocą szybkiej kamery wideo.

Optogenetyczna aktywacja neuronów somatosensorycznych danio pręgowanego za pomocą ChEF-tdTomato

Danio pręgowany były cennym narzędziem w wielu obszarach badawczych. Tutaj demonstrujemy metodę wywoływania reakcji wzrokowej i obliczania funkcjonalnej ostrości wzroku u dorosłego danio pręgowanego.

Odpowiedź optokinetyczna jako ilościowa miara ostrości wzroku u danio pręgowanego

Prezentujemy metodę analizy elektroretinograficznej (ERG) larw danio pręgowanego z wykorzystaniem technik mikromanipulacji i elektroretinografii. Jest to prosta i nieskomplikowana metoda oznaczania funkcji wzrokowych larw danio pręgowanego in vivo.

Elektroretinogram Analiza odpowiedzi wzrokowej u larw danio pręgowanego

Ten protokół opisuje podejście do etykietowania in toto i wielowymiarowego obrazowania wczesnego rozwoju oczu danio pręgowanego. Opisujemy znakowanie, osadzanie i obrazowanie czterowymiarowe (4D) za pomocą laserowej skaningowej mikroskopii konfokalnej oraz rozważania dotyczące optymalizacji pozyskiwania zestawów danych do analizy mechanizmów morfogenezy panewki wzrokowej.

4-wymiarowe obrazowanie morfogenezy kubka wzrokowego danio pręgowanego

Artykuł wyjaśnia, jak chirurgicznie usunąć oczy z żywych larw danio pręgowanego, co jest pierwszym krokiem w kierunku zbadania, jak wejście siatkówki wpływa na wzrost i rozwój tektum nerwu wzrokowego. Ponadto artykuł zawiera informacje na temat znieczulenia, fiksacji i preparacji larw, a następnie immunohistochemii i obrazowania konfokalnego.

Usunięcie oczu u żywych larw danio pręgowanego w celu zbadania zależnego od unerwienia wzrostu i rozwoju układu wzrokowego

Optogenetyczne manipulowanie szlakami sygnałowymi może być potężną strategią do zbadania, w jaki sposób sygnalizacja jest dekodowana w rozwoju, regeneracji, homeostazie i chorobie. Protokół ten zawiera praktyczne wskazówki dotyczące stosowania aktywatorów sygnalizacyjnych białka węzłowego i morfogennego kości (BMP) opartych na dziedzinie wykrywania światła i tlenu we wczesnym zarodku danio pręgowanego.

Aktywacja sygnalizacji optogenetycznej w zarodkach danio pręgowanego

Tutaj prezentujemy szczegółowy protokół badania aktywności neuronalnej w obszarach mózgu transgenicznego danio pręgowanego, które wyrażają wskaźniki wapnia GCaMP za pomocą mikroskopii konfokalnej.

In vivo (in vivo) Konfokalne obrazowanie fluorescencyjne aktywności neuronalnej wywołanej stymulacją sensoryczną u częściowo unieruchomionych larw danio pręgowanego

Poznaj nową metodę pomiaru odpowiedzi optokinetycznej u dorosłych danio pręgowanych. Protokół umożliwia badanie funkcji wzrokowych i analizę ruchów gałek ocznych w modelu zwierzęcym.

Wykorzystanie odpowiedzi optokinetycznej do badania funkcji wzrokowych u rybek danio

Przeglądaj więcej filmów