Oznaczanie reaktywności i miana surowicy za pomocą testu hemaglutynacji

Oznaczanie reaktywności i miana surowicy za pomocą testu hemaglutyniny. Naród glutenu to reakcja zachodząca między rozpuszczalnymi przeciwciałami a antygenami cząstek. Mogą to być komórki lub cząsteczki przenoszące.

Epitopy na powierzchni nośnika umożliwiają przeciwciału wiązanie się i sieciowanie nośnika ze sobą, co prowadzi do powstania złożonej sieci zwanej kompleksem przeciwciał antygenowych. Aglutynacja hemów jest specyficzną formą aglutynacji, w której przeciwciała wiążą się z czerwonymi krwinkami, które działają jak antygen cząsteczkowy. Czerwone krwinki są użytecznymi celami, ponieważ są łatwo dostępne, a wyniki można łatwo zobaczyć gołym okiem.

Próbki surowicy są seryjnie rozcieńczane, a następnie umieszczane na 96-dołkowej płytce ubo. Następnie dodaje się zawiesinę czerwonych krwinek Komórki Riva. Gdy przeciwciała obecne w wysokim stężeniu wiążą się z czerwonymi krwinkami, tworzy się duża siatka.

Ponieważ ta sieć osiada grawitacyjnie, dostosowuje się do kształtu płyty ubo. Patrząc z góry, widać szeroki arkusz czerwonych krwinek. Jest to pozytywna reakcja hemaglutyniny.

Gdy poziom przeciwciał jest niski, nie może powstać żadna siatka, a czerwone krwinki dostosowują się do kształtu płytki UBO i koncentrują się u podstawy, tworząc małą osadkę. Jest to ujemna reakcja aglutynacji hemu. Ten diagram pokazuje pozytywną reakcję.

Komórki tworzą siatkę, gdy osiadają, dostosowują się do kształtu dolnej płyty U. Po lewej i prawej stronie widzimy widok z góry, gdzie widać szeroki arkusz czerwonych krwinek. Jeśli obecna jest pośrednia ilość przeciwciał, obserwuje się tworzenie się liter.

Aglutynacja hemu pozwala również na badanie reaktywności różnych próbek surowicy w stosunku do znanego antygenu. Można również określić miano próbki surowicy. Miano jest ostatnim rozcieńczeniem, w którym zaobserwowano pozytywną reakcję.

Zwykle im wyższe stężenie przeciwciał w próbce surowicy, tym wyższe miano. Ten diagram przedstawia ujemną reakcję aglutynacji hemu. Niewystarczająca ilość przeciwciał do sieciowania czerwonych krwinek.

Gdy komórki osiadają grawitacyjnie, zsuwają się po boku studni, tworząc na dnie ciasny granulek. Diagram po prawej stronie pokazuje czerwone krwinki widziane z góry. Do tego eksperymentu potrzebna będzie 1 96-dołkowa płyta dolna w kształcie litery U.

Istotne jest, aby użyć dolnej płyty w kształcie litery U, ponieważ płaskie płyty dolne nie pozwolą komórkom na osadzanie się w osad, co uniemożliwia interpretację. Zwierzę jest w stanie dostarczyć 50 mikrolitrów testów, surowicę, 1% zawiesinę komórek Riva i jednorazowy roztwór soli fizjologicznej buforu weronu do każdej studzienki rzędu. Jeden do 12, dostarczyć 50 mikrolitrów soli fizjologicznej buforu roal.

Jest używany jako rozcieńczalnik. Teraz umieść 50 mikrolitrów surowicy w studni A. To jest twoje pierwsze rozcieńczenie jedno na dwa.

Używając perpetu, upewnij się, że próbka surowicy jest dokładnie wymieszana. Po wymieszaniu usuń 50 mikrolitrów z dołka A jeden i przenieś do dołka A dwa. Jest to twoje drugie rozcieńczenie jedno na dwa, co daje czterokrotne rozcieńczenie.

Kontynuować tę serię rozcieńczania, używając studzienek od trzeciej do jedenastej. Nie umieszczaj żadnej surowicy w, cóż, 12, ponieważ jest to twoja ujemna kontrola soli fizjologicznej buforu krwi. Teraz weź swoją 1% zawiesinę komórek Riva, która została dokładnie wymieszana i przenieś 50 mikrolitrów do, no cóż, jeden do studni A 12.

Po dodaniu komórek przykryj płytkę i delikatnie postukaj w płytkę, aby upewnić się, że próbki i komórki są wymieszane. Teraz inkubuj w temperaturze 37 stopni przez 60 minut. Odpowiedni jest nawilżany inkubator.

Podczas 60-minutowego okresu inkubacji nastąpią interakcje przeciwciał antygenowych, a komórki zaczną się osadzać. Materiał wideo, który oglądasz, to fotografia poklatkowa z całego 60-minutowego okresu. To jest zbliżenie na studnie od piątej do dziesiątej.

Sprawdziliśmy już, no cóż, 12, który był twoim sterowaniem VBS w tym. Cóż, komórki utworzyły ciasną osadę, co wskazuje, że test działał prawidłowo. Studzienki piąty i szósty są przykładami dodatniej aglutynacji hem

Cóż, siódemka jest przykładem pośredniego wyniku aglutynacji, podczas gdy studzienki ósme, dziewiąte i 10 są ujemne dla aglutynacji hem. Na podstawie tego wyniku miano zostałoby określone na podstawie rozcieńczenia dla studzienki, siedmiu, ponieważ był to ostatni dołek, w którym zaobserwowano pozytywną reakcję.