Name: Pomiar 50% aktywności dopełniacza hemolitycznego (CH50) w surowicy (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-03-29T18:05:00.000+00:00
Duration: 8 min 26 s
Description: Poznaj metodę CH50 do pomiaru aktywności dopełniacza w surowicy przy użyciu erytrocytów owczych. Technika ta umożliwia ocenę funkcji układu odpornościowego w badaniach immunologicznych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autor pragnie podziękować pani Lora Matthews za wykonanie techniki oraz panu Paulowi Shepherdowi za kinematografię. Projekt ten był finansowany przez University of South Australia w ramach programu Laboratory Medicine.

Przygotowanie 5x roztworu buforu Veronal Buffered Saline (VBS)
<ol>
	<li>Aby przygotować bufor solny Veronala (VBS), należy przygotować trzy oddzielne roztwory.</li>
	<li>Przygotować roztwór 1, rozpuszczając 21,25gm NaCl oraz 0,94gm barbitonu sodowego w 350ml wody destylowanej. Końcowe stężenia NaCl i barbitonu sodowego wynoszą odpowiednio 1,02M i 13mM.</li>
	<li>Przygotować roztwór 2, rozpuszczając 1,44gm barbitonu w 125ml gorącej wody destylowanej. Końcowe stężenie barbitonu wynosi 62,5mM.</li>
	<li>Przygotować roztwór 3, rozpuszczając 20,33gm MgCl2 oraz 4,41gm CaCl2 w 100ml wody destylowanej. Końcowe stężenia MgCl2 i CaCl2 wynoszą odpowiednio 2,18M i 440mM.</li>
	<li>Wymieszać roztwory 1 i 2, a następnie schłodzić do temperatury pokojowej.</li>
	<li>Po ochłodzeniu połączonego roztworu dodać 1,25ml roztworu 3 i dostosować pH do poziomu 7,3-7,5 przy użyciu 1M HCl.</li>
	<li>Uzupełnić końcową objętość do 500ml wodą destylowaną, aby przygotować 5-krotny roztwór zapasowy.</li>
	<li>Aby przygotować 1-krotny roztwór roboczy, rozcieńczyć roztwór zapasowy w stosunku 1:5 wodą destylowaną.</li>
</ol>
Sensybilizacja owczych erytrocytów hemolizyną
<ol>
	<li>Przygotować hemolizynę, rozcieńczając ją najpierw w stosunku 1:50 w VBS</li>
	<li>Do 4ml SRBC dodać 6ml VBS i delikatnie wymieszać poprzez odwracanie probówki</li>
	<li>Wirować przy 600g przez 5minutes</li>
	<li>Odpiąć nadosad i przemyć komórki jeszcze 2 razy</li>
	<li>Po ostatnim przemyciu wirować komórki przy 900g przez 5minutes w celu ich osadzenia</li>
	<li>Odpiąć nadosad i resuspender komórki w odpowiedniej ilości VBS, aby przygotować 10% roztwór, tj. 0,5ml osadzonych komórek resuspender w 5 ml buforu</li>
	<li>Kroplowo dodawać równą objętość hemolizyny (przeciwciała królika przeciwko owczym czerwonym krwinkom krwi) do komórek, stale delikatnie mieszając</li>
	<li>Inkubować w kąpieli wodnej w temperaturze 30°C przez 30 minutes</li>
	<li>Delikatnie mieszać komórki co 15minutes</li>
	<li>Uczulone SRBC można przechowywać przez noc w temperaturze 4°C</li>
</ol>
Analiza CH50
<ol>
	<li>Oznacz serię probówek w dwóch powtórzeniach jako 1:8, 1:16, 1:32, 1:64 i 1:128.</li>
	<li>Przygotuj serię dwukrotnych rozcieńczeń seryjnych surowicy kontrolnej i badanej w VBS, każdą w dwóch powtórzeniach.</li>
	<li>Zacznij od rozcieńczenia 1:4 (100ml surowicy + 300ml VBS) i przenieś 200ml próbki do kolejnej oznaczonej probówki.</li>
	<li>Mieszaj dokładnie pomiędzy rozcieńczeniami i przenieś 200ml do kolejnego rozcieńczenia, używając nowej końcówki pipety.</li>
	<li>Powtarzaj czynność, aż przygotowane zostaną wszystkie pięć rozcieńczeń.</li>
	<li>Odrzuć 200ml z ostatniego rozcieńczenia 1:128.</li>
	<li>Dodaj 200ml zawiesiny uczulonych SRBC do wszystkich probówek.</li>
 <li>Oznacz dwie oddzielne probówki jako BLANK (próba ślepa) i dodaj 200ml uczulonych SRBC + 200ml VBS. Probówki te posłużą do pomiaru spontanicznej lizy SRBC w VBS.</li>
 <li>Oznacz kolejne dwie oddzielne probówki jako TOTAL LYSIS (pełna liza) i dodaj 200ml uczulonych SRBC + 200ml wody destylowanej.</li>
	<li>Delikatnie wymieszaj zawartość wszystkich probówek.</li>
	<li>Inkubuj w kąpieli wodnej w temperaturze 37°C przez 30 minut, mieszając po 15 minutach.</li>
	<li>Odwiruj próbki przy 1,500g przez 5 minut, aby sedymentować RBC.</li>
	<li>Przenieś 100ml supernatantu z każdej probówki do dołka w 96-dołkowej płytce z płaskim dnem.</li>
	<li>Dodaj 100ml wody destylowanej do każdego dołka.</li>
	<li>Odczytaj absorbancję próbek przy 540nm za pomocą spektrofotometru do płytek.</li>
</ol>
Obliczenia
<ol>
	<li>Oblicz średnią absorbancję dla każdej próbki</li>
	<li>Odejmij absorbancję PRÓBY ŚLEPEJ (lizy spontanicznej) od wszystkich próbek</li>
	<li>Oblicz % lizy dla każdego rozcieńczenia, korzystając z poniższego wzoru: <img src="/files/ftp_upload/1923/1923eq1.jpg" alt="Wzór na obliczenie % lizy, wartości OD, metoda analizy spektrofotometrycznej, schemat równania." data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="Równanie"></li>
	<li>Nanieś procent lizy (oś pionowa) w funkcji rozcieńczenia surowicy na osi poziomej.</li>
	<li>Oblicz rozcieńczenie wymagane do uzyskania 50% hemolizy dla surowicy kontrolnej i badanej (Rys. 2).</li>
</ol>
Reprezentatywne wyniki:
Film zawiera przykład reprezentatywnych wyników. W praktyce, równolegle z serum testowym przeprowadza się analizę serum kontrolnego, poddając je takiej samej procedurze. Poniżej (Tabela 1) przedstawiono przykładowe dane z przebadanej próbki serum. Dane są przetwarzane zgodnie z równaniem przedstawionym w punkcie 5.3.
<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Próbka</td>
 <td>OD540</td>
 <td>Średnia</td>
 <td> </td>
 <td> </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Puste pole</td>
 <td>0.042, 0.044</td>
 <td>0.043</td>
 <td> </td>
 <td> </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Lizą całkowita</td>
 <td>0.183, 0.183</td>
 <td>0.183</td>
 <td> </td>
 <td> </td> 
 </tr>
 <tr>
 	<td colspan="5"> </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Rozcieńczanie</td>
 <td>OD540</td>
 <td>Średnia</td>
 <td>Średnia wartość tła</td>
 <td>% lizy</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>1:8</td>
 <td>0.200, 0.219</td>
 <td>0.210</td>
 <td>0.168</td>
 <td>116</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>1:16</td>
 <td>0.179, 0.173</td>
 <td>0.176</td>
 <td>0.134</td>
 <td>93</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>1:32</td>
 <td>0.134, 0.110</td>
 <td>0.122</td>
 <td>0.08</td>
 <td>55</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>1:64</td>
 <td>0.053, 0.066</td>
 <td>0.059</td>
 <td>0.017</td>
 <td>12</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>1:128</td>
 <td>0.044, 0.045</td>
 <td>0.045</td>
 <td>0.003</td>
 <td>2</td>
 </tr>
 </tbody>
</table>
<img src="/files/ftp_upload/1923/1923fig1.jpg" alt="Schemat drogi klasycznej; reakcja antygen-przeciwciało; aktywacja kompleksu C1; kaskada dopełniacza." data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="Rysunek 1"> Rysunek 1. Aktywacja klasycznej drogi dopełniacza. Droga klasyczna jest aktywowana poprzez wiązanie immunoglobuliny M (IgM) lub immunoglobuliny G (IgG) na powierzchni komórki docelowej. Fragment Fc przeciwciała wiąże się z C1q, co aktywuje C1r, a ten z kolei aktywuje kolejną cząsteczkę C1r, które wspólnie aktywują dwie cząsteczki C1s. C1s rozszczepia następnie C4, co odsłania miejsce wiązania dla C2, który również zostaje rozszczepiony. Wiązanie C4b i C2a prowadzi do powstania kompleksu nazywanego konwertazą C3. Kompleks ten rozszczepia teraz C3, tworząc C3a i C3b, z których część łączy się z konwertazą C3, tworząc konwertazę C5. Kompleks ten oddziałuje teraz na C5, a powstałe C5b wiąże się z C6, inicjując tworzenie kompleksu atakującego błonę (MAC). C5b6 oddziałuje na C7, który z kolei oddziałuje na C8, a ostatecznie na C9, co prowadzi do powstania końcowego kompleksu MAC. (Goldsby et al, 2003).
<img src="/files/ftp_upload/1923/1923fig2.jpg" alt="Wyniki testu lizy; wykres porównujący stopień rozcieńczenia względem % lizy w próbkach kontrolnych i pacjenta." data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="Rysunek 2"> Rysunek 2. Wykreślanie danych z próbek i obliczanie CH50 dla próbki surowicy kontrolnej i badawczej. (A) Wykreślono obliczony procent (%) lizy dla obu próbek surowicy: kontrolnej (•) i badawczej () w funkcji czynnika rozcieńczenia. (B) Aby obliczyć 50% lizy, z wartości 50% prowadzi się linię aż do przecięcia z liniami wykresu, a następnie prowadzi się linię pionową w dół do wartości rozcieńczenia. W tym przykładzie do osiągnięcia 50% lizy wymagane jest 35-krotne rozcieńczenie surowicy kontrolnej i 21,6-krotne rozcieńczenie surowicy badawczej. Dane te wskazują na mniejszą ilość dopełniacza w surowicy badawczej w porównaniu z kontrolną, ponieważ wymagane było mniejsze rozcieńczenie przed osiągnięciem 50% lizy. Próbka kontrolna wykazuje również &gt; 100% lizy przy rozcieńczeniu 1:8. Jest to najprawdopodobniej spowodowane niepełną lizą SRBC przez wodę destylowaną i bardziej efektywną lizą wywołaną przez składniki dopełniacza.

<ol><li>Goldsby, R. A., Kindt, T. J., Osborne, B. A., Kuby, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGoldsby%2C+RA+%22Immunology%22">Immunology</a>. , W.H. Freeman. (2003).</li>
</ol>

Analiza CH50 jest podatna na wiele zakłóceń. Niektóre SRBC są bardziej kruche od innych, co prowadzi do spontanicznej hemolizy niezwiązanej z aktywnością dopełniacza. Powinowactwo przeciwciał króliczych różni się w zależności od serii i producenta, co wpływa na ilość przeciwciał wiążących się z SRBC. Ponadto proces uczulania SRBC przeciwciałami skutkuje powstaniem komórek z różną ilością przeciwciał pokrywających SRBC. Pobieranie i przechowywanie próbek stanowią istotne potencjalne źródło błędów. Składniki dop...

<table><tbody><tr><td>Owcze erytrocyty</td><td>CSL</td><td>2490201</td><td>Stosować w stężeniu końcowym 1%</td></tr><tr><td>Surowica</td><td></td><td></td><td>Surowica ludzka</td></tr><tr><td>Królicze serum anty-owcze hemolityczne (RBC), niekonjugowane</td><td>AbD Serotec</td><td>C12HSB</td><td></td></tr><tr><td>Płytka 96-dołkowa z płaskim dnem</td><td>Sarstedt Ltd</td><td>83.1839</td><td></td></tr><tr><td>Saloina buforowana weronalem</td><td></td><td></td><td>Stosować w stężeniu końcowym 1x</td></tr><tr><td>Kąpiel wodna</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Czytnik płytek</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pomieszczenie/inkubator o temperaturze 37&amp;#x00B0;C</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

pomiar 50% aktywności hemolitycznej dopełniacza (ch50) w surowicy

Measuring the 50% Haemolytic Complement (CH50) Activity of Serum

Układ dopełniacza to grupa białek, których aktywacja prowadzi do lizy komórki docelowej i wspomaga fagocytozę poprzez opsonizację. Można ilościowo określić poszczególne składniki dopełniacza, jednak nie dostarcza to żadnych informacji na temat aktywności tej ścieżki. CH50jest testem przesiewowym służącym do oceny aktywacji klasycznej drogi dopełniacza (Rys. 1) i jest on czuły na redukcję, brak i/lub nieaktywność każdego z elementów tej drogi. CH50badanie sprawdza zdolność funkcjonalną komponentów układu dopełniacza surowiczego drogi klasycznej do lizy owczych erytrocytów (SRBC) uprzednio opasowanych przeciwciałami królika przeciwko owczym erytrocytom (hemolizyną). Gdy opasane przeciwciałami SRBC są inkubowane z badaną surowicą, dochodzi do aktywacji klasycznej drogi dopełniacza i w konsekwencji do hemolizy. Jeśli brak jest komponentu dopełniacza, CH50poziom będzie wynosić zero; jeśli jeden lub więcej komponentów drogi klasycznej jest zmniejszonych, poziom CH50zostanie zmniejszone. Stała objętość optymalnie uczulonych SRBC jest dodawana do każdego rozcieńczenia surowicy. Po inkubacji mieszaninę wiruje się, a stopień hemolizy określa się poprzez pomiar absorbancji hemoglobiny uwolnionej do nadosadu przy 540nm. Ilość aktywności dopełniacza wyznacza się, badając zdolność różnych rozcieńczeń badanego surowiczy do lizy SRBC pokrytych przeciwciałami. Niniejszy film przedstawia etapy eksperymentalne analizy poziomu aktywności klasycznej drogi aktywacji dopełniacza.

Droga klasyczna jest aktywowana przez przeciwciała i kończy się lizą komórki docelowej. Test CH50 pozwala na pomiar aktywności dopełniacza w próbce surowicy. Niniejsze wideo przedstawia etapy wyznaczania wartości CH50 w próbce surowicy, sposób obliczeń oraz interpretację wyników.

Pomiar 50% aktywności hemolitycznej dopełniacza (CH50) w surowicy

Układ dopełniacza to grupa białek, których aktywacja prowadzi do lizy komórki docelowej i wspomaga fagocytozę poprzez opsonizację. Poszczególne ...

Pomiar 50% aktywności hemolitycznej dopełniacza CH 50 w surowicy. Będą potrzebne pipety umożliwiające pobranie 200 µL oraz 1000 µL surowicy testowej, która była przechowywana w lodzie, uwrażliwione erytrocyty owcze, bufor solny Varone oraz woda destylowana, probówki do testu surowicy, a także probówki do lizy bazowej i całkowitej, mieszadło wortex oraz 96-dołkowa płytka z płaskim dnem. Należy indywidualnie oznakować probówki jako kontrolne oraz rozcieńczenie końcowe. W tym przypadku rozpoczynamy od rozcieńczenia 1:8.Kontynuuj dwukrotne rozcieńczanie, aby uzyskać rozcieńczenia 1:16, 1:32, 1:64 oraz 1:128, a pozostałe probówki opisz jako próbę ślepą i lizę całkowitą. Po opisaniu wszystkich probówek można przystąpić do rozcieńczania surowicy badawczej. Rozpocznij od przeniesienia 300 µL soli buforowej R do nowej probówki.Następnie przenieś 100 µL surowicy do 300 µL soli buforowej R. Pozwoli to uzyskać rozcieńczenie początkowe w stosunku 1:4. Upewnij się, że próbka surowicy została dokładnie wymieszana.Następnie przenieś 200 µL roztworu soli fizjologicznej (PBS) do wcześniej oznakowanych probówek. Dodaj również 200 µL roztworu soli fizjologicznej do dwóch pustych probówek w zestawie probówek do lizy całkowitej. Do probówek kontrolnych dodaj 200 µL wody destylowanej zamiast roztworu soli fizjologicznej.Następnie przenieś 200 µL serum w rozcieńczeniu 1:4 do probówki oznaczonej jako 1:8. Wcześniej do serii probówek od 1:8 do 1:128 przeniesiono 200 µL soli fizjologicznej z albuminą. Pozwoli to teraz na uzyskanie rozcieńczenia 1:8.Dokładnie wymieszać próbkę, a następnie przenieść 200 µL do probówki oznaczonej jako jedna w punkcie 16. Powtarzać czynność do momentu rozcieńczenia całej serii probówek. Odrzucić 200 µL z probówki o rozcieńczeniu 1:28, aby objętość końcowa wynosiła 200 µL.Uczulone owcze erytrocyty mogły z czasem osiąść. Należy je resuspender, delikatnie odwracając probówkę kilka razy. Po dokładnej resuspensji przenieść 200 µL uczulonych owczych erytrocytów do każdej z przygotowanych probówek.Należy upewnić się, że surowica jest dokładnie wymieszana z erytrocytami. Dodanie uwrażliwionych owczych erytrocytów do probówki z próbą ślepą pozwoli na oznaczenie lizy spontanicznej, natomiast dodanie krwi do probówki z lizą całkowitą umożliwi wyznaczenie wartości 100%. Używając wirówki typu vortex ustawionej na niskie obroty, należy delikatnie wymieszać każdą z probówek. Następnie probówki należy umieścić w kąpieli wodnej o temperaturze 37 °C i inkubować przez 30 minut.Po 15 minutach inkubacji delikatnie wymieszaj zawartość probówek wirówką wortex ponownie i inkubuj przez kolejne 15 minut. Po inkubacji przenieś probówki do wirówki ustawionej na temperaturę 4 °C i wiruj przy 1500 G przez pięć minut. Po wirowaniu ostrożnie wyjmij probówki i umieść je w odpowiednim stojaku. W tym momencie widoczny będzie osad erytrocytów, natomiast SNA będzie miało czerwony kolor.W celu oznaczania hemoglobiny, do odpowiedniej liczby dołków płaskodنnej płytki 96-dołkowej należy nalać 100 µL wody destylowanej. Uważając, aby nie przenieść osadu, należy przenieść 100 µL supernatantu do odpowiedniego dołka płytki 96-dołkowej. Po naniesieniu wszystkich próbek na płytkę, należy zmierzyć absorbancję za pomocą spektrofotometru do płytek ustawionego na 540 nm.Oto surowe dane absorbancji dla dwóch powtórzeń: A1 i B1. Należy odnieść się do rozcieńczenia 1:8.Następnie dysponujemy danymi dla rozcieńczeń 1:16, 1:32, 1:64 oraz 1:128. Próbki A6 i B6 stanowią próbę ślepą, natomiast A7 i B7 to całkowita liza.Po zebraniu danych należy obliczyć średnią absorbancję dla każdej z powtórzonych próbek. Następnie od wszystkich próbek należy odjąć absorbancję tła, która odpowiada lizie spontanicznej. Po zgromadzeniu wszystkich danych można obliczyć procentową lizę dla każdego rozcieńczenia, korzystając z poniższego wzoru.Po obliczeniu wszystkich danych, należy nanieść procentową lizę na oś pionową, a rozcieńczenie surowicy na oś poziomą. Powstały wykres można następnie wykorzystać do obliczenia rozcieńczenia surowicy wymaganego do lizy 50% uczulonych krwinek czerwonych. Wykres ten przedstawia procentową lizę w funkcji stopnia rozcieńczenia surowicy.Następnie można poprowadzić linię od poziomu 50% lizy aż do punktu przecięcia z krzywą. W punkcie przecięcia z krzywą prowadzi się linię pionową w dół do osi poziomej. Wartość ta reprezentuje stopień rozcieńczenia, do którego należy rozcieńczyć surowicę, aby zapewnić 50% lizy; przy porównywaniu dwóch próbek surowicy w celu ustalenia, czy istnieje różnica w CH 50, rozcieńczenie zapewniające 50% lizy może służyć jako miara.

measuring-the-50-haemolytic-complement-ch50-activity-of-serum

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia i infekcje

Określenie 50% aktywności dopełniacza hemolitycznego (CH50) surowicy

Aby skutecznie badać funkcje populacji komórek odpornościowych, często konieczna jest ich puryfikacja. Usuwanie dopełniacza jest szybką i niedrogą techniką izolacji populacji komórek odpornościowych o wysokiej czystości.

Deplecja specyficznych populacji komórek poprzez deplecję dopełniacza

Hemaglutynacja jest rodzajem aglutynacji, w której przeciwciała wiążą się z erytrocytami. Erytrocyty są łatwo dostępne, a wyniki można łatwo zaobserwować gołym okiem. Ten film prezentuje etapy przeprowadzania testu hemaglutynacji, interpretację wyników oraz wyznaczanie miana.

Oznaczanie reaktywności i miana surowicy za pomocą testu hemaglutynacji

Niniejsze badanie opisuje nowatorski test na mikropłytce, który mierzy aktywność krzepnięcia FV podczas tworzenia skrzepu fibrynowego w ludzkiej plazmie, co nie było wcześniej raportowane. Metoda ta wykorzystuje kinetyczny czytnik mikropłytek do ciągłego pomiaru zmiany absorbancji przy 405nm podczas tworzenia skrzepu fibrynowego w ludzkiej plazmie.

Pomiar aktywności czynnika V w ludzkiej plazmie przy użyciu mikropłytkowego testu krzepliwości

Ten film demonstruje technikę oceny działania bakteriobójczego przeciwciał obecnych w surowicy, w którym pośredniczy dopełniacz. Podejście to łączy wyizolowaną surowicę z bakteriami chorobotwórczymi i egzogennymi białkami dopełniacza. Podczas inkubacji bakterie są hodowane na płytce agarowej, a wytworzone kolonie są oznaczane ilościowo w celu zmierzenia miana bakteriobójczego surowicy.

Test bakteriobójczy surowicy na działanie bakteriobójcze przeciwciał za pośrednictwem dopełniacza

Film demonstruje test hamowania hemaglutynacji do wykrywania przeciwciał surowicy przeciwko określonym antygenom. Potwierdzenie zahamowania hemaglutynacji w studzience testowej i hemaglutynacji w studzience kontrolnej uzyskuje się za pomocą wyraźnych wzorców wizualnych. Test ten odgrywa kluczową rolę w ocenie odpowiedzi immunologicznej, skuteczności szczepionki i badaniu infekcji wirusowych w wirusologii i immunologii.

Test zahamowania hemaglutynacji w celu wykrycia przeciwciał w surowicy przeciwko antygenowi docelowemu

Ten film demonstruje testy mikroneutralizacji do pomiaru przeciwciał neutralizujących za pomocą komórek nerki Madin-Darby Canine nadekspresji kwasu sjalowego związanego z α2,6 w surowicy ludzkiej. Ten test jest często stosowany w badaniach serologicznych grypy u...

Test mikroneutralizacji do pomiaru miana przeciwciał neutralizujących w surowicy ludzkiej

Tutaj opisujemy dwa testy do pomiaru aktywacji dopełniacza indukowanej przez przeciwciała przeciwko czerwonym krwinkom. Główną przewagą nad obecnymi testami jest ich ilościowy i łatwy w interpretacji charakter.

Metody ilościowego wykrywania indukowanej przez przeciwciała aktywacji dopełniacza na krwinkach czerwonych

Kontakt krwi z polimerowymi kanałami krwionośnymi inicjuje reakcję ciała obcego, która jest związana z klinicznymi powikłaniami. Tutaj opisano Aparat Pętli Chandlera, eksperymentalne narzędzie naśladujące perfuzję krwi przez te przewody. Wyrostek rekombinowanego CD47 powoduje zmniejszenie dowodów reakcji ciała obcego na tych przewodach.

Zastosowanie aparatury pętlowej Chandlera ex vivo do oceny biokompatybilności zmodyfikowanych polimerowych przewodów krwiopochodnych

Przedstawiona tutaj jest prosta metoda pomiaru aktywności chitynazy w płynach biologicznych, takich jak płukanie oskrzelowo-pęcherzykowe lub surowica.

Pomiar aktywności chitynazy w próbkach biologicznych

Ten protokół opisuje kompleksową ocenę hemokompatybilności urządzeń mających kontakt z krwią za pomocą laserowo wycinanych implantów nerwowo-naczyniowych. Model pętli przepływu ze świeżą, heparynizowaną krwią ludzką jest stosowany w celu naśladowania przepływu krwi. Po perfuzji różne markery hematologiczne są analizowane i porównywane z wartościami uzyskanymi bezpośrednio po pobraniu krwi w celu oceny hemokompatybilności badanych urządzeń.

Badanie hemokompatybilności implantów mających kontakt z krwią w modelu pętli przepływu naśladującym przepływ krwi u ludzi

Celem tej metody jest określenie gęstości CR1 w erytrocytach dowolnego podmiotu poprzez porównanie z trzema osobami, których gęstość CR1 erytrocytów jest znana. Metoda wykorzystuje cytometrię przepływową po immunobarwieniu erytrocytów badanych przez przeciwciało monoklonalne anty-CR1 sprzężone z amplifikowanym układem za pomocą fikoerytryny (PE).

Pomiar receptora dopełniacza erytrocytów 1 za pomocą cytometrii przepływowej

Poznaj metodę CH50 do pomiaru aktywności dopełniacza w surowicy przy użyciu erytrocytów owczych. Technika ta umożliwia ocenę funkcji układu odpornościowego w badaniach immunologicznych.

Pomiar 50% aktywności hemolitycznej dopełniacza (CH₅₀) w surowicy

Przeglądaj więcej filmów