Name: Mysie modele leukomalacji okołokomorowej (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-05-18T17:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 24 s
Description: Poznaj metodę tworzenia mysich modeli leukomalacji okołokomorowej poprzez jednostronną ligaturę tętnicy szyjnej i hipoksię. Model ten umożliwia badanie patogenezy uszkodzeń mózgu u wcześniaków oraz testowanie terapii.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Niniejsza praca została częściowo sfinansowana z grantów National Institutes of Health (RO1 NS059043 oraz RO1 ES015988), National Multiple Sclerosis Society, Roche Foundation for Anemia Research, Feldstein Medical Foundation oraz Shriners Hospitals for Children.
Pragniemy podziękować dr. Davidowi Pleasure'owi za jego sugestie. Praca ta została częściowo sfinansowana z grantów przyznanych W.D. przez National Institutes of Health (RO1 NS059043 oraz RO1 ES015988), National Multiple Sclerosis Society oraz Shriners Hospitals for Children. Oświadczamy, że nie istnieją żadne konflikty interesów związane z niniejszym artykułem.

Szczegółowe procedury wywoływania noworodkowego uszkodzenia mózgu u myszy P6:
<ol>
<li>Myszy w 6. dniu po urodzeniu (P6) są znieczulane poprzez pośrednie chłodzenie na lodzie do momentu utraty reakcji na bodźce bólowe (znieczulenie głębokie).</li>
 <li>Po oczyszczeniu skóry alkoholem wykonuje się nacięcie w linii środkowej brzusznej w przedniej części szyi.</li>
 <li>Pod mikroskopem stereoskopowym uzyskuje się dostęp do rozwidlenia prawej tętnicy szyjnej wspólnej poprzez delikatne odsuniecie mięśnia gnykowego i mięśnia mostkowo-obojczykowo-sutkowego.</li>
 <li>Powięź wokół pochewki tętnicy szyjnej zostaje usunięta, a proksymalna gałąź wewnętrzna zostaje odizolowana od pobliskiego nerwu błędnego i zwojów współczulnych za pomocą haczyka. Następnie tętnica szyjna wewnętrzna jest koagulowana przy użyciu końcówki do kauteryzacji.</li>
 <li>Po kauteryzacji nacięcie skóry zostaje zaszyte, a zwierzę jest utrzymywane w cieple do pełnego wybudzenia, a następnie przekazywane matce.</li>
 <li>Godzinę po podwiązaniu tętnicy zwierzę jest umieszczane w szczelnej komorze nasycanej azotem do momentu osiągnięcia poziomu 6,0% O2. Następnie zwierzę jest poddawane hipoksji przez 35 min.</li>
 <li>Po ekspozycji na hipoksję mysz regeneruje się na podgrzewaczce (33°C) przez 30 min, a następnie wraca do matki. W celu wywołania uszkodzenia mózgu z połączeniem hipoksji/niedokrwienia oraz infekcji/stanu zapalnego, zwierzęciu wstrzykuje się dootrzewnowo 0,015 ml lipopolisacharydu (LPS, 1 mg/kg). </li>
 <li>Cztery dni po hipoksji/niedokrwieniu myszy są znieczulane poprzez pośrednie chłodzenie na lodzie do momentu utraty reakcji na bodźce bólowe, a następnie poddawane perfuzji solą fizjologiczną, a później 4% paraformaldehydem. Mózgi są usuwane i poddawane krioprotekcji.</li>
</ol>
<img src="/files/ftp_upload/1951/1951fig1.jpg" alt="Analiza histologiczna, przekroje tkanki mózgowej A-D, regiony barwione, porównanie struktury komórkowej." data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="Rycina 1"> Rycina 1. Charakterystyka uszkodzenia mózgu w mysim modelu hipoksyczno-izchemicznym z użyciem barwienia H &amp; E. Widoczna jest martwica ogniskowa (strzałki) w białej substancji mózgu po stronie ipsilateralnej (A) w stosunku do podwiązania tętnicy szyjnej, w porównaniu z białą substancją mózgu po stronie kontralateralnej (B). Martwicę ipsilateralną oraz ogniskowe mikrozawały obserwuje się w hipokampie (C) i wzgórzu (D) w mózgach z uszkodzeniem ipsilateralnej białej substancji mózgu. 
Reprezentatywne wyniki i rysunki:
Modele mysie PVL z niedotlenieniem/niedokrwieniem i/lub infekcją/stanem zapalnym uzyskuje się poprzez jednostronne podwiązanie tętnicy szyjnej, a następnie poddanie zwierząt działaniu hipoksji i wstrzyknięcie LPS. Definiujemy te nowe modele mysie jako odpowiednie modele PVL. Badanie neuropatologiczne przekrojów czołowych barwionych hematoksyliną i eozyną (H &amp; E) w obrębie całego przodomózgowia wykazuje ogniskową martwicę w centralnej istocie białej półkuli mózgu po stronie podwiązania tętnicy szyjnej (Ryc. 1A), przy względnym oszczędzeniu neuronów w nadległej korze mózgowej w porównaniu z przeciwległą istotą białą mózgu (Ryc. 1B). W ogniskowo zmartwiczej istocie białej stwierdza się wyraźny wzrost komórkowości, składającej się z makrofagów i astrocytów reaktywnych, co jest charakterystyczne dla ogniskowego PVL u ludzi. W przeciwległej centralnej istocie białej jądra oligodendroglialne są ułożone w pęczki przypominające pęczki włókien; architektura ta jest całkowicie zniszczona przez martwicę ogniskową po stronie ipsilateralnej. Warto zauważyć, że w mózgach z jednostronnym uszkodzeniem istoty białej stwierdzamy również ipsilateralną martwicę w hipokampie (Ryc. 1C) i wzgórzu (ogniskowe mikrozawały) (Ryc. 1D). Ludzkie PVL również nie występuje w całkowitej izolacji od towarzyszących zmian w istocie szarej. Znakiem rozpoznawczym PVL jest względne, choć nie całkowite, oszczędzenie kory mózgowej nad uszkodzoną istotą białą – cecha ta, naszym zdaniem, występuje w opracowanych przez nas modelach mysich.
<img src="/files/ftp_upload/1951/1951fig2.jpg" alt="Schemat oceny uszkodzeń istoty białej z wykorzystaniem barwienia MBP i O1; przedstawia ocenę uszkodzeń w skali od 0 do 5." data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="Rycina 2"> Rycina 2. Skala ocen od 0 do 5 służąca do oceny uszkodzeń istoty białej przy użyciu MBP lub O1 w mysich modelach leukomalacji okołodomowej.
Nasze modele mysie wykazują cechy PVL zarówno na poziomie fenotypowym, jak i molekularnym. Do oceny uszkodzeń wykorzystaliśmy detekcję immunocytochemiczną podstawowego białka mieliny (MBP) lub antygenu O1, opracowaliśmy standardową skalę od 0 do 5 do oceny stopnia uszkodzenia istoty białej (Rys. 2) oraz scharakteryzowaliśmy patologię istoty białej (Rys. 3). Niedawno w celu zastąpienia wstępnej metody półilościowej wdrożono nieobciążoną analizę stereologiczną. Ponadto, aby zbadać korelacyjne efekty uszkodzenia istoty białej w odniesieniu do wyników funkcjonalnych, przeprowadziliśmy testy behawioralne funkcji motorycznych. Wykazaliśmy, że myszy wykazują wyraźne deficyty motoryczne w dniach P10-21 po zastosowaniu hipoksji/niedokrwienia oraz LPS w dniu P6. Ustaliliśmy kryteria oceny w skali 0-4 w celu zdefiniowania dysfunkcji kończyn przeciwległych u uszkodzonych myszy w dniach P10-21. Typowo zdrowe myszy potrafią szybko przebiec pod kątem 30° (ocena 4) i wspiąć się na nachylenie 45° bez ześlizgiwania się (ocena 3). Myszy z uszkodzeniami otrzymują niższe oceny, co koreluje ze stopniem uszkodzenia istoty białej.
<img src="/files/ftp_upload/1951/1951fig3.jpg" alt="Multimodalne obrazowanie mózgu; mikroskopia fluorescencyjna i elektronowa wykazująca MBP, przeciwciało O1." data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="Rycina 3"> Rycina 3. Charakterystyka uszkodzenia istoty białej za pomocą barwienia na MBP lub O1 oraz struktury mieliny za pomocą mikroskopu elektronowego (EM). Barwienia na MBP i O1 wykazują utratę mieliny w istocie białej mózgu po stronie ipsilateralnej względem ligacji w porównaniu do istoty białej po stronie kontralateralnej. Badanie EM wykazuje zmielinizowane aksony w istocie białej mózgu po stronie kontralateralnej względem ligacji oraz zdegenerowaną tkankę w istocie białej po stronie ipsilateralnej. 
Przewidujemy, że opracowanie nowych modeli mysich PVL pozwoli nam na badanie specyficznych mechanizmów uszkodzeń mózgu niedojrzałego o charakterze PVL. Będziemy analizować patogenezę z wykorzystaniem transgenicznych szczepów myszy, aby zbadać rolę poszczególnych cząsteczek oraz ocenić cele neuroprotekcji.

<ol><li>Volpe, J. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aVolpe%2C+JJ+%22Neurology+of+newborn%22">Neurology of newborn</a>. , Saunders. Philadelphia. 217-276 (2001).</li>
<li>Deng, W., Pleasure, J., Pleasure, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+in+periventricular+leukomalacia%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Progress in periventricular leukomalacia.</a> Arch. Neurol. 65, 1291-1295 (2008).</li>
<li>Follett, P. L., Deng, W., Dai, W., Talos, D. M., Massillon, L. J., Rosenberg, P. A., Volpe, J. J., Jensen, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamate+receptor-mediated+oligodendrocyte+toxicity+in+periventricular+leukomalacia%3A+a+protective+role+for+topiramate%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Glutamate receptor-mediated oligodendrocyte toxicity in periventricular leukomalacia: a protective role for topiramate.</a> J. Neurosci. 24, 4412-4420 (2004).</li>
</ol>

Nie zadeklarowano konfliktów interesów.

Uraz rozwijającego się mózgu prowadzi do niszczycielskich konsekwencji neurologicznych. Co uderzające, obraz okołoporodnego uszkodzenia mózgu jest silnie zależny od wieku. U noworodków donoszonych dotyczy ono głównie kory mózgowej z charakterystyczną utratą neuronów. Natomiast u noworodków przedwcześnie urodzonych selektywnie dotyka ono białej materii mózgu z wyraźnym uszkodzeniem rozwijających się oligodendrocytów; zaburzenie to określa się mianem okołokomorowego rozmięknienia białej materii (PVL). Skala problemu uszkodzeń mózgu u noworodków przedwcześnie urodzonych jest ogromna. Przedwczesne porody i usprawnienie neonatologicznej opieki intensywnej doprowadziły do przeżycia niemal 90% z 13 milionów noworodków przedwcześnie urodzonych na całym świecie (około 56 000 w Stanach Zjednoczonych), które rodzą się każdego roku z masą ciała poniżej 1500 g, tzn. są to noworodki o bardzo niskiej masie urodzeniowej. Około 10% osób, które przeżyły, wykazuje w późniejszym czasie mózgowe porażenie dziecięce, a około 50% ma deficyty poznawcze i behawioralne. PVL jest najważniejszą patologią mózgu leżącą u podstaw mózgowego porażenia dziecięcego u noworodków przedwcześnie urodzonych. Obecnie nie istnieje specyficzna terapia PVL, częściowo dlatego, że jego patogeneza nie jest jeszcze dobrze poznana1,2.

Chociaż etiologia PVL jest wieloczynnikowa, uważa się, że główną przyczyną PVL jest okołoporodowe niedotlenienie/niedokrwienie połączone z wewnątrzmaciczną infekcją matki. Wcześniej opracowano model niedotlenienia/niedokrwienia PVL u szczura w dniu P73. Model ten jest wyjątkowy, ponieważ przypomina PVL u wcześniaków. Charakterystyczną cechą tego modelu jest selektywna patologia istoty białej, w przeciwieństwie do większości modeli udarów, które charakteryzują się zawałem istoty szarej. Należy jednak nie pomijać ograniczeń modelu niedotlenienia-niedokrwienia u szczura. Po pierwsze, etiologia PVL jest często wieloczynnikowa. Oprócz niedotlenienia/niedokrwienia, z PVL silnie wiąże się infekcja/stan zapalny układu matka-płód. Zatem połączenie niedotlenienia/niedokrwienia oraz infekcji/stanu zapalnego prawdopodobnie pozwoliłoby stworzyć modele bardziej przypominające PVL. Wiek gryzoni, który najlepiej koreluje z ludzkim okresem rozwojowym największego ryzyka wystąpienia zmian PVL (24–32 tydzień gestacji), przypada na okres ponatalny, ponieważ różnicowanie oligodendroglialne u gryzoni jest głównie zdarzeniem ponatalnym. Ponieważ w wieku ponatalnym nie jest możliwe wywołanie infekcji/stanu zapalnego układu matka-płód, uzasadnione byłoby symulowanie infekcji na odpowiednim ponatalnym etapie rozwoju w celu stworzenia modelu PVL u gryzoni. Podjęliśmy próbę połączenia iniekcji LPS z modelem niedotlenienia/niedokrwienia u myszy w dniu P6, aby wywołać zmiany PVL o większym znaczeniu klinicznym. Po drugie, optymalne eksperymentalne podejście typu proof-of-concept w celu wykazania sprawczej roli danej cząsteczki wymaga zastosowania myszy transgenicznych; manipulacje genetyczne są znacznie trudniejsze u szczurów niż u myszy. W związku z tym postanowiliśmy przenieść nasz model eksperymentalny PVL ze szczura na mysz.

Modele mysie PVL znacznie ułatwią 1) badanie biologii i patogenezy choroby z wykorzystaniem dostępnych transgenicznych szczepów myszy; 2) prowadzenie badań nad lekami w celu odkrycia potencjalnych substancji o działaniu terapeutycznym; 3) testowanie użyteczności komórek macierzystych przy użyciu immunodeficyjnych szczepów myszy.

<table><tbody><tr><td>LPS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L4130</td><td></td></tr><tr><td>Komora hipoksyczna</td><td>BioSpherix</td><td>A-30274</td><td></td></tr><tr><td>Hak chirurgiczny</td><td>F.S.T.</td><td>10064-14</td><td></td></tr></tbody></table>

modele mysie leukomalacji okołodomowej

Mouse Models of Periventricular Leukomalacia

Opisujemy protokół tworzenia mysich modeli leukomalacji okołodomkowej (PVL). PVL jest dominującą postacią uszkodzenia mózgu u wcześniaków i najczęstszą przyczyną porażenia mózgowego. PVL charakteryzuje się uszkodzeniem istoty białej w obszarach okołodomkowych z wyraźnym uszkodzeniem oligodendroglialnym. Głównymi przyczynami PVL są niedotlenienie/niedokrwienie z towarzyszącą lub bez towarzyszącej infekcją/stanem zapalnym układowym. Wykorzystujemy myszy w 6. dobie po urodzeniu (P6) do tworzenia modeli noworodkowego uszkodzenia mózgu poprzez indukcję niedotlenienia/niedokrwienia z towarzyszącym lub bez towarzyszącej infekcją/stanem zapalnym układowym za pomocą jednostronnego podwiązania tętnicy szyjnej, a następnie poddania niedotlenieniu z wstrzyknięciem lub bez wstrzykiwania endotoksyny lipopolisacharydu (LPS). Immunohistochemia białka zasadowego mieliny (MBP) lub O1 oraz badanie w mikroskopie elektronowym wykazują znaczną utratę mieliny w istocie białej mózgu wraz z dodatkowymi uszkodzeniami hipokampa i wzgórza. Stworzenie mysich modeli PVL znacznie ułatwi badanie patogenezy choroby z wykorzystaniem dostępnych transgenicznych szczepów myszy, prowadzenie badań nad lekami w sposób relatywnie wysokoprzepustowy w celu zidentyfikowania potencjalnych środków terapeutycznych oraz testowanie transplantacji komórek macierzystych z wykorzystaniem immunodeficyjnych szczepów myszy.

Opracowaliśmy mysie modele leukomalacji okołokomorowej (PVL), która jest dominującym uszkodzeniem mózgu u wcześniaków, charakteryzującym się zmianami w istocie białej wokół komór. Głównymi przyczynami PVL są niedotlenienie i niedokrwienie, z towarzyszącą lub bez towarzyszącej infekcji systemowej. Jednostronne podwiązanie tętnicy szyjnej oraz ekspozycja na hipoksję, z wstrzyknięciem lipopolisacharydu lub bez, wywołują zmiany przypominające PVL u myszy w 6. dniu po urodzeniu (P6).

Modele mysie leukomalacji okołodomowej

Opisujemy protokół tworzenia mysich modeli leukomalacji okołodomowej (PVL). PVL jest dominującą postacią uszkodzenia mózgu u wcześniaków...

Aby rozpocząć tę procedurę, sześć myszy w wieku P6 poddaje się znieczuleniu poprzez pośrednie chłodzenie na lodzie aż do momentu braku reakcji na bodźce bólowe. Pod mikroskopem stereoskopowym uzyskuje się dostęp do prawej tętnicy szyjnej wspólnej. Za pomocą haka chirurgicznego tętnica szyjna wspólna zostaje odizolowana od pobliskiego nerwu błędnego i zwojów współczulnych.Następnie dokonuje się kauteryzacji tętnicy szyjnej wspólnej. Witam, jestem hin z lewej strony bin z Katedry Biologii Komórki i Anatomii Człowieka na Uniwersytecie Kalifornijskim w Davis. Cześć, jestem Jennifer Plain.Jestem również z Laboratorium jednego Ang. Dzisiaj przedstawimy procedurę tworzenia mysiego modelu specyficznego lulac PVL. Przeważająca postać uszkodzenia mózgu u wcześniaków charakteryzuje się zmianami okołokomorowymi.Tworzymy zmiany nowotworowe. Wykorzystujemy sześć myszy P6, aby wywołać uszkodzenie przypominające PVL poprzez jednostronne podwiązanie tętnicy szyjnej oraz hipoksję wraz z jednoczesnym wstrzyknięciem LPS. Procedurę tę stosujemy w naszym laboratorium do badania patologii PVL.Utworzenie modeli mysich PVL znacznie ułatwi badanie patogenezy choroby z wykorzystaniem dostępnych transgenicznych szczepów myszy. Modele te umożliwią prowadzenie prób lekowych w sposób relatywnie wysokoprzepustowy w celu odkrycia potencjalnych środków terapeutycznych, a także testowanie transplantacji komórek macierzystych oraz wykorzystanie szczepów myszy z niedoborem odporności. Zacznijmy zatem.Przed zabiegiem chirurgicznym w celu wywołania noworodkowego uszkodzenia mózgu, wykonaj ucisk łapy, aby potwierdzić, że zwierzę jest całkowicie znieczulone. Oczyść alkoholem skórę wokół szyi znieczulonej myszy P6. Następnie wykonaj cięcie wzdłuż linii środkowej brzusznej w przedniej części szyi.Pod mikroskopem stereoskopowym delikatnie odsunąć mięśnie gnykowe i mięśnie mostkowo-obojczykowo-sutkowe, aby uzyskać dostęp do prawej tętnicy szyjnej wspólnej. Usunąć powięź otaczającą pochewkę szyjną. Następnie za pomocą haczyka odizolować tętnicę szyjną wspólną od pobliskiego nerwu błędnego i zwojów współczulnych.Następnie, po przeprowadzeniu kauteryzacji, wypal wspólny tętnicę szyjną. Zamknij nacięcie skóry za pomocą kleju tkankowego. Użyj podkładki grzewczej, aby utrzymać ciepłotę zwierzęcia do czasu jego pełnego wybudzenia, a następnie zwróć je matce.Godzinę po podwiązaniu tętnicy szyjnej umieść mysz w szczelnej komorze nasyconej azotem, aż poziom tlenu spadnie do 6%oxygen. Poddaj zwierzę 35-minutowej hipoksji; po ekspozycji na hipoksję pozwól myszy dojść do siebie na podgrzewaczce przez 30 minut, a następnie zwróć ją do samicy w celu wywołania uszkodzenia mózgu poprzez połączoną hipoksję, niedokrwienie i infekcję. Zapalenie. Zwierzęciu wstrzykuje się początkowo 0,015 mililitrów lipopolisacharydu, a następnie wraca ono do samicy.Oto reprezentatywne wyniki uzyskane w modelach mysich leukomalacji okołokomorowej (PVL). Po pierwsze, badanie neuropatologiczne przekrojów czołowych barwionych hematoksyliną, eozyną i kwasemt szkarłatnym w obrębie całego przodomózgowia wykazuje martwicę ogniskową w centralnej istocie białej półkuli mózgu po stronie ipsilateralnej względem podwiązania tętnicy szyjnej w obszarze ogniskowej martwicy istoty białej. Obserwuje się wyraźny wzrost liczby komórek, składających się z makrofagów i astrocytów reaktywnych, co jest charakterystyczne dla ogniskowej postaci PVL u ludzi, w centralnej istocie białej po stronie kontralateralnej.Jądra oligodendrocytów są ułożone w pęczki o charakterze pęczkowym. Architektura ta zostaje całkowicie zaburzona przez martwicę ogniskową po stronie ipsilateralnej. W mózgach z ipsilateralnym uszkodzeniem białej materii mózgowej obserwuje się również ipsilateralną martwicę w hipokampie oraz ogniskowe mikrozawały w wzgórzu.Następnie, do oceny uszkodzeń wykorzystuje się immunocytochemiczną detekcję białka zasadowego mieliny MBP lub antygenu O1. Przedstawiono tutaj standardową skalę oceny uszkodzeń istoty białej w zakresie od zera do pięciu. Patologia istoty białej jest również charakteryzowana poprzez barwienie na MBP lub O1, a struktura mieliny za pomocą mikroskopii elektronowej. Barwienie na MBP i O1 wykazuje utratę mieliny w istocie białej mózgowia po stronie ipsilateralnej względem ligacji w porównaniu z istotą białą po stronie kontralateralnej.Badanie EM wykazuje obecność zmielinizowanych aksonów w istocie białej mózgowia po stronie przeciwległej do ligacji oraz zdegenerowaną tkankę w istocie białej po stronie ipsilateralnej. Na koniec, aby zbadać korelacyjne efekty uszkodzenia istoty białej w odniesieniu do wyników funkcjonalnych, przeprowadzono testy behawioralne funkcji motorycznych, przedstawione na tym wykresie. Ocena zachowania oparta na teście wspinania wykazuje, że myszy poddane hipoksji-ischemii bez podania LPS uzyskują istotnie niższe wyniki w porównaniu do prawidłowych myszy kontrolnych w dniu P 14.Dodatkowo, myszy poddane niedotlenieniu i niedokrwieniu z LPS wykazują znacznie niższe wyniki w porównaniu do myszy z grupy Hi P 14. Przedstawiliśmy właśnie sposób stworzenia mysiego modelu PVL poprzez niedotlenienie i niedokrwienie wraz z doglebowym wstrzyknięciem LPS.Podczas wykonywania tej procedury ważne jest, aby przed kauteryzacją odseparować wspólną tętnicę szyjną od innych tkanek. W przeciwnym razie uraz może być zbyt rozległy lub nie wystąpi wcale. To wszystko.Dziękujemy za oglądanie i życzymy powodzenia w prowadzeniu eksperymentów.

mouse-models-of-periventricular-leukomalacia

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neuronauka

Modele myszy zmian przetrwałych dookoła komór w mózgu

W niniejszej pracy przedstawiono model intraluminalnego zamknięcia tętnicy środkowej mózgu u myszy. Zakres zawału mózgu oceniano za pomocą skali neurologicznej oraz barwienia fioletem krezylowym, który stanowi alternatywę dla barwienia TTC, oferując znaczącą zaletę w postaci możliwości równoległego badania wielu interesujących markerów.

Model mysi wewnątrzluminalnego MCAO: ocena zawału mózgu za pomocą barwienia fioletem krezylu

Film demonstruje procedurę tworzenia modelu myszy do badania niedotlenionego i niedokrwiennego uszkodzenia mózgu u noworodków. Przedstawia kroki chirurgicznego wywoływania niedokrwienia i poddawania zwierzęcia hipoksji w celu pogłębienia uszkodzenia mózgu. Na koniec pokazano, w jaki sposób można ocenić powstałe uszkodzenia mózgu, upewniając się, że model mysi jest przygotowany do dalszych badań naukowych.

Ustalenie mysiego modelu niedotlenionego i niedokrwiennego uszkodzenia mózgu u noworodków

Korzystając z rezonansu magnetycznego (człowieka), oprogramowania do obrazowania 3D i analizy immunohistologicznej, dokumentujemy zmiany w bocznych komorach mózgu. Podłużne mapowanie 3D zmian objętości komór bocznych i charakterystyka okołokomorowych zmian komórkowych, które zachodzą w ludzkim mózgu z powodu starzenia się lub choroby, są następnie modelowane u myszy.

Modelowanie 3D komór bocznych i charakterystyka histologiczna tkanki okołokomorowej u ludzi i myszy

Prezentowany jest zwięzły zestaw testów motorycznych noworodków na myszach. Za pomocą tych testów można wykazać deficyty motoryczne noworodków w różnych zaburzeniach motorycznych noworodków. Dysponując ustandaryzowanym zestawem testów, można porównywać wyniki różnych badań, co pozwala na lepsze i dokładniejsze raportowanie między grupami.

Zestaw testów motorycznych w mysim modelu mózgowego porażenia dziecięcego u noworodków

Opisujemy mysi model eksperymentalnej malarii mózgowej i pokazujemy, jak można śledzić stan zapalny i patologię mikrokrążenia in vivo za pomocą rezonansu magnetycznego.

In vivo (in vivo) Śledzenie rozwoju obrzęku i patologii mikrokrążenia w modelu eksperymentalnej malarii mózgowej z wykorzystaniem rezonansu magnetycznego

Ten protokół demonstruje indukcję choroby malformacji jamistych mózgu w modelu mysim i wykorzystuje mikrotomografię komputerową wzmocnioną kontrastem do pomiaru obciążenia zmianami. Metoda ta zwiększa wartość uznanych modeli mysich w celu zbadania podstaw molekularnych i potencjalnych terapii malformacji jamistych mózgu i innych chorób naczyń mózgowych.

Indukcja i obrazowanie mikro-tomografią malformacji jamistych mózgu w modelu mysim

Tutaj opisany jest model udaru fotozakrzepowego, w którym udar jest wytwarzany przez nienaruszoną czaszkę poprzez wywołanie trwałej okluzji mikronaczyniowej za pomocą oświetlenia laserowego po podaniu barwnika światłoczułego.

Modelowanie udaru u myszy: ogniskowe zmiany korowe spowodowane fotozakrzepicą

Eksperymentalne autoimmunologiczne zapalenie mózgu i rdzenia jest jednym z najczęściej stosowanych mysich modeli stwardnienia rozsianego. W obecnym protokole myszy C57BL/6J obu płci są immunizowane peptydem glikoproteinowym oligodendrocytów mielinowych, co skutkuje głównie wznoszącym się niedowładem ogona i kończyn. W tym miejscu omówiono protokół indukcji i oceny EAE.

Modelowanie stwardnienia rozsianego u obu płci: eksperymentalne autoimmunologiczne zapalenie mózgu i rdzenia wywołane MOG35-55

Ten protokół przedstawia zmodyfikowany mysi model powtarzalnego łagodnego urazowego uszkodzenia mózgu (rmTBI) wywołanego metodą zamkniętego urazu głowy (CHI). Podejście to obejmuje cieńsze okienko czaszki i płynną stymulację w celu zmniejszenia stanu zapalnego często spowodowanego ekspozycją opon mózgowych, a także lepszą odtwarzalność i dokładność w modelowaniu rmTBI u gryzoni.

Zmodyfikowany mysi model powtarzającego się łagodnego urazowego uszkodzenia mózgu z przerzedzonym okienkiem czaszki i płynną stymulacją

Pokrwawiąca wodogłowie przedwczesnego (PHHP) można modelować u noworodków szczurów poprzez połączenie zapalenia chorioamnionitisu i krwotoku wewnątrzkomorowego. Połączenie tych wydarzeń prenatalnych i poporodowych wiernie oddaje kliniczne cechy PHHP, w tym makrocefalię, brzuszną omegę oraz podwyższone ciśnienie wewnątrzczaszkowe, przez całe życie.

Modelowanie pokrwaconego wodogłowia przedwczesnego u szczurów

Poznaj metodę tworzenia mysich modeli leukomalacji okołokomorowej poprzez jednostronną ligaturę tętnicy szyjnej i hipoksię. Model ten umożliwia badanie patogenezy uszkodzeń mózgu u wcześniaków oraz testowanie terapii.

Modele mysie leukomalacji okołodomowej

Przeglądaj więcej filmów