Name: Ortotopowy przeszczep aorty: model szczura do badania rozwoju przewlekłej waskulopatii (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-04T17:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 32 s
Description: Poznaj ortotopowy przeszczep aorty u szczurów jako model badania przewlekłej waskulopatii przeszczepowej. Metoda umożliwia obserwację neointimy i analizę histopatologiczną.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Autorzy dziękują Christiane Pahrmann za wykonanie badań histologicznych.
Finansowanie
Sonja Schrepfer otrzymała grant badawczy z Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) (SCHR992/3 1 oraz SCHR992/4-1).

Szczury o masie około 250-300g są nabywane z firmy Charles River (Sandhofer Weg 7, D-97633 Sulzfeld). 
 Przeszczepy są wykonywane z wykorzystaniem szczurów PVG jako dawców oraz szczurów ACI jako biorców.
Szczury utrzymywane są w warunkach konwencjonalnych, z dostępem do standardowej karmy dla szczurów i wody ad libitum.
Wszystkie narzędzia chirurgiczne są sterylizowane przed użyciem.
Przygotowanie dawcy:
Zanurz szczura w narkozie z użyciem izofluranu (2,5-3%) w komorze indukcyjnej.
<ol>
 <li>Wygolić sierść z brzucha i klatki piersiowej, położyć szczura na plecach i założyć maskę na nos i pysk, aby utrzymać znieczulenie.</li>
 <li>Szeroko zdezynfekować obszar brzucha i klatki piersiowej za pomocą Provo-Iodine, a następnie zastosować 80% etanol; powtórzyć ten krok trzy razy.</li>
 <li>Sprawdzić odruchy, uciśnięte tylne łapy, aby upewnić się, że szczur jest odpowiednio znieczulony.</li>
 <li>Upuścić krew szczurowi poprzez otwarcie jamy brzusznej i wykonanie nacięcia w aorcie brzusznej.</li>
 <li>Ostrożnie otworzyć klatkę piersiową, aby odsłonić zstępującą aortę piersiową.</li>
 <li>Wypreparować aortę piersiową z otaczających tkanek, takich jak tłuszcz, nerwy i przełyk.</li>
 <li>Wyciąć fragment aorty o długości 1.5cm za pomocą skalpela, unikając uszkodzenia tkanek aorty.</li>
 <li>Dokładnie przepłukać przeszczep aorty zimną sterylną solą fizjologiczną i przechowywać go w temperaturze 4°C.</li>
</ol>
Odbiorca:
Zanurz szczura w narkozie z użyciem izofluranu (2,5-3%) w komorze indukcyjnej. Podczas procedury chirurgicznej należy utrzymywać stałą temperaturę ciała.
<ol>
 <li> Ogolić obszar brzucha i nałożyć maść do oczu, aby zapobiec wysychaniu oczu podczas znieczulenia. </li>
 <li> Położyć szczura na plecach i założyć maskę na nos i pysk, aby utrzymać znieczulenie.</li>
 <li> Zdezynfekować obszar brzucha za pomocą Provo-Iodine, następnie zastosować 80% etanol; powtórzyć ten krok trzykrotnie.</li>
 <li> Sprawdzić odruchy, uciskając tylne łapy, aby upewnić się, że szczur jest wystarczająco znieczulony.</li>
 <li> Wykonać cięcie w linii pośrodkowej brzucha, oddzielając skórę i mięśnie w dwóch etapach, aby otworzyć jamę brzuszną.</li>
 <li> Umieścić jelita w ogrzanej soli fizjologicznej wewnątrz rękawiczki bezpudrowej. Złożyć rękawiczkę wokół jelit, aby zapobiec utracie wilgoci.</li>
 <li> Usunąć tkankę tłuszczową pokrywającą aortę brzuszną.</li>
 <li> Wypreparować aortę od obszaru podnerkowego do rozwidlenia, uważając, aby nie uszkodzić odgałęzień naczyń.</li>
 <li> W razie potrzeby podwiązać odgałęzienia aorty.</li>
 <li> Najpierw zastosować zacisk mikrosurgicalny na części podnerkowej wypreparowanej aorty, aby zatrzymać przepływ krwi.</li>
 <li> Następnie założyć drugi zacisk blisko rozwidlenia aorty.</li>
 <li> Po zatrzymaniu przepływu krwi wyciąć krótki segment aorty.</li>
 <li> Pobrać graft aorty donora, który był przechowywany w 0,9% sterylnej soli fizjologicznej w lodzie, skrócić go do odpowiedniej długości i umieścić w luce.</li>
 <li> Połączyć aortę donora z aortą biorcy, wykonując szwy ciągłe przy użyciu nici prolene 8-0 (Ethicon, Norderstedt, Niemcy). Rozpocząć od kranialnego anastomozy koniec-do-końca.</li>
 <li> Po zakończeniu dystalnej anastomozy koniec-do-końca ostrożnie otworzyć zacisk dystalny. </li>
 <li> Jeśli po otwarciu zacisku dystalnego nie występuje krwawienie, ostrożnie otworzyć zacisk kranialny. W przypadku krwawienia w miejscu szwów ponownie zamknąć zacisk, zlokalizować źródło krwawienia i zatamować je za pomocą pojedynczego szwu.</li>
 <li> Na dystalnym końcu aorty powinno być widoczne tętno. </li>
 <li> Następnie przenieść jelita z powrotem do jamy brzusznej.</li>
 <li> Przepłukać jamę brzuszną uprzednio ogrzaną sterylną solą fizjologiczną.</li>
 <li> Zamknąć warstwę mięśniową ściany brzucha, stosując szwy ciągłe prolene 6-0 (Ethicon, Norderstedt, Niemcy).</li>
 <li> Użyć szwów ciągłych prolene 5-0 (Ethicon, Norderstedt, Niemcy) do zamknięcia skóry.</li>
 <li> Gdy szczur wciąż znajduje się pod wpływem znieczulenia, wstrzyknąć podskórnie 4-5mg/kg Karprofenu.</li>
 <li> Aby zapewnić wystarczającą analgezję dla tego typu zabiegu, do wody pitnej dodaje się metamizol (50mg metamizolu na 100ml) w celu uśmierzenia bólu przez 3 dni po transplantacji. </li>
</ol>

<ol><li>Deuse, T., Hoyt, G., Koyanagi, T., Robbins, R. C., Schrepfer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+and+Inhibition+But+Not+Reversion+of+Chronic+Allograft+Vasculopathy+by+FK778%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Prevention and Inhibition But Not Reversion of Chronic Allograft Vasculopathy by FK778.</a> Transplantation. 85, 870-877 (2008).</li>
<li>Mennander, A., Tiisala, S., Halttunen, J., Yilmaz, S., Paavonen, T., Hayry, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+rejection+in+rat+allografts.+An+experimental+model+for+transplant+arteriosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Chronic rejection in rat allografts. An experimental model for transplant arteriosclerosis.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 11, 671-680 (1991).</li>
<li>Ono, K., Lindsey, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+technique+of+heart+transplantation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thorac+Cardiovasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Improved technique of heart transplantation in rats.</a> J Thorac Cardiovasc Surg. 57, 225-225 (1969).</li>
<li>Poston, R. S., Billingham, M., Hoyt, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapamycin+reverses+chronic+graft+vascular+disease+in+a+novel+cardiac+allograft+model%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Rapamycin reverses chronic graft vascular disease in a novel cardiac allograft model.</a> Circulation. 100, 67-100 (1999).</li>
<li>Schrepfer, S., Deuse, T., Koch-Nolte, F., Krieger, T., Haddad, M., Schäfer, H., Pelletier, M. P., Robbins, R. C., Reichenspurner, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FK778+in+Experimental+Xenotransplantation%3A+A+Detailed+Analysis+of+Drug+Efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Heart+Lung+Transplant%22%5BJournal%5D)">FK778 in Experimental Xenotransplantation: A Detailed Analysis of Drug Efficacy.</a> J Heart Lung Transplant. 26, 70-77 (2007).</li>
</ol>

Nie zgłoszono żadnych konfliktów interesów.

Z kilku powodów uznaliśmy, że ortotopowy model transplantacji aorty jest dokładniejszym sposobem badania rozwoju TVP w porównaniu z heterotopowym modelem transplantacji serca: 
Jeśli chodzi o technikę chirurgiczną, model transplantacji aorty stanowi łatwo wykonalną metodę, wymagającą jedynie wykonania anastomozy koniec-koniec, podczas gdy heterotopowy model transplantacji serca można uznać za bardziej złożone i podatne na błędy wyzwanie dla umiejętności chirurga, wymagające anastomozy koniec-bok na dwóch głównych na...

<table><tbody><tr><td>Mikroskop chirurgiczny (powiększenie 25x)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Izofluran</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>shaver</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Provo-Iodine</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>lodowata 0.9% sól fizjologiczna</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>podgrzana 0.9% sterylna sól fizjologiczna</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>maść do oczu</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>rękawiczka</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>nożyczki mikrosurgicalne</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>pinceta</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>zaciski</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>szew 8-0 (prolene)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>szew 6-0 (prolene)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>szew 5-0 (prolene)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Karprofen</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Metamizol</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>patyczki higieniczne</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

ortotopowy przeszczep aorty: model szczurzy do badania rozwoju przewlekłej waskulopatii

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

Modele badawcze przewlekłego odrzucania są niezbędne do badania procesów patobiologicznych i patofizjologicznych podczas rozwoju waskulopatii przeszczepu (TVP).
Powszechnie stosowanym modelem zwierzęcym w badaniach nad przewlekłym odrzucaniem przeszczepu w układzie sercowo-naczyniowym jest model heterotopowego przeszczepu serca przeprowadzany u gryzoni laboratoryjnych. Model ten jest szeroko wykorzystywany w eksperymentach od czasu publikacji techniki opracowanej przez Ono i Lindseya (3). Aby przeanalizować wyniki w naczyniach krwionośnych, serce musi zostać poddane sekcjowaniu, a wszystkie naczynia muszą zostać zmierzone.
Kolejną metodą badania przewlekłego odrzucania w problematyce sercowo-naczyniowej jest model przeszczepu aorty (1, 2). W ortotopowym modelu przeszczepu aorty aorta może być łatwo poddana ocenie histologicznej (2). Model PVG-do-ACI jest szczególnie użyteczny w badaniach nad CAV, ponieważ ostre odrzucanie naczyniowe nie stanowi głównego czynnika zakłócającego, a leczenie cyklosporyną A (CsA) nie zapobiega rozwojowi CAV, co odpowiada obserwacjom w warunkach klinicznych (4). W tym modelu wymagany jest 7-dniowy okres podawania CsA w celu zapobieżenia ostremu odrzuceniu oraz osiągnięcia długoterminowego przeżycia z rozwojem TVP.
Model ten może być również wykorzystany do badania ostrego odrzucenia komórkowego oraz martwicy pośrodkowej w modelach ksenogenicznych (5).

W niniejszym filmie zaprezentowano model ortotopowego przeszczepu aorty jako prosty model do badania rozwoju waskulopatii przeszczepu (TVP) u szczurów.

Ortotopowy przeszczep aorty: model szczurzy do badania rozwoju przewlekłej waskulopatii

Modele badawcze przewlekłego odrzucania są niezbędne do badania procesów patobiologicznych i patofizjologicznych zachodzących podczas rozwoju odrzucania przeszczepu...

Ogólnym celem niniejszej procedury jest opracowanie dokładnego modelu i łatwo wykonalnej metody badania rozwoju waskulopatii przeszczepu. Osiąga się to poprzez zastosowanie kombinacji szczepów PVG oraz CI. Drugim krokiem procedury jest pobranie aorty od dawcy.Trzecim krokiem procedury jest przygotowanie biorcy. Ostatnim etapem procedury jest anastomoza aorty dawcy z aortą biorcy. Ostatecznie, za pomocą badań histopatologicznych można uzyskać wyniki wykazujące tworzenie się neointimy.Witam, jestem Sonya Schwefel, profesor immunologii transplantacyjnej w Thet Eye Lab w Uniwersyteckim Centrum Serca w Hamburgu w Niemczech. A ja jestem Manish Duboff, również z TS Eye Lab.Moje laboratorium zajmuje się immunologią transplantacji. W tym filmie przedstawimy model ortotopowego przeszczepu aorty – prosty i wiarygodny model służący do badania rozwoju waskulopatii przeszczepu u szczurów. Stosujemy tę procedurę w naszym laboratorium w celu badania przewlekłego odrzucania przeszczepów w układzie sercowo-naczyniowym.W modelu ortotopowego przeszczepu aorty możliwe jest łatwe przeprowadzenie oceny histologicznej aorty. Ponadto, model przeszczepu żyły dużego palca (PVG) do tętnicy szyjnej wewnętrznej

orthotopic-aortic-transplantation-rat-model-to-study-development

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Przeszczepienie aortalne ortotopowe: model na szczurze do badania rozwoju przewlekłej choroby naczyń

Opisujemy technikę, w której fragment aorty brzusznej myszy jest przeszczepiany ortotopowo tuż poniżej tętnic nerkowych u biorcy allogenicznego lub syngenicznego. Technika ta może być przydatna w badaniach, w których za korzystne uznaje się przeszczepienie dużych tętnic o jednolitym rozmiarze.

Ortotopowy przeszczep aorty u myszy do badań nad chorobami naczyniowymi

Opisujemy protokół szczepienia interpozycji aorty u myszy. Celem protokołu jest dostarczenie modelu, za pomocą którego można badać procesy patologiczne i strategie terapeutyczne związane z reakcjami alloimmunologicznymi w tętnicach i wynikającymi z nich zmianami tętniczymi, które przyczyniają się do niewydolności przeszczepu narządu.

Mysi model odrzucenia naczyniowego indukowanego alloimmunologicznie i miażdżycy tętnic po przeszczepie

Wprowadzenie cewnika poliuretanowego do światła aorty i podwiązanie szwem aorty powoduje przewlekłe niedotlenienie z powodu hipoperfuzji naczynia krwionośnego przybyszowego. W artykule opisano nowy zwierzęcy model tętniaka aorty brzusznej (AAA) o charakterystyce podobnej do AAA u ludzi.

Stworzenie modelu tętniaka aorty brzusznej u gryzoni poprzez zablokowanie przybyszowej perfuzji naczynia krwionośnego

Tutaj prezentujemy protokół heterotopowego przeszczepu aorty u myszy przy użyciu techniki mankietu bez szwów w mysim modelu szyjki macicy. Model ten może być wykorzystany do badania patologii leżącej u podstaw przewlekłej waskulopatii przeszczepu allogenicznego (CAV) i może pomóc w ocenie nowych środków terapeutycznych w celu zapobiegania jej powstawaniu.

Mysi model przeszczepu aorty szyjnej przy użyciu zmodyfikowanej techniki mankietu bez szwów

Opisujemy model heterotopowego przeszczepu serca w jamie brzusznej u szczurów, sugerując modyfikacje obecnych strategii, które prowadzą do uproszczonego podejścia chirurgicznego. Dodatkowo opisujemy nowatorski model odrzucania przeszczepu poprzez wstrzyknięcie do ucha ważnych komórek mięśnia sercowego, co pozwala na dalsze analizy immunologiczne przeszczepu u szczurów.

Model immunologiczny do heterotopowego przeszczepu komórek serca i mięśnia sercowego u szczurów

Ten artykuł przedstawia częściowy protokół heterotopowego przeszczepu płata kostno-skórnego u szczurów i jego potencjalne wyniki w obserwacji średnioterminowej.

Częściowy heterotopowy model przeszczepu kończyn tylnych u szczurów

Ten protokół opisuje prostą i efektywną metodę przeszczepiania płatków zastawki aortalnej pod torebkę nerkową, aby umożliwić badanie alloreaktywności zastawek serca.

Uproszczony model heterotopowego przeszczepu zastawki serca u gryzoni

Pokazujemy, jak ustanowić mysi model implantacji korzenia płucnego do aorty zstępującej, aby symulować procedurę Rossa. Model ten umożliwia średnio- i długoterminową ocenę przebudowy autoprzeszczepu płucnego w pozycji systemowej, stanowiąc podstawę do opracowania strategii terapeutycznych wspierających jego adaptację.

Model operacji Rossa u gryzoni: implantacja syngenicznego przeszczepu tętnicy płucnej w pozycji ogólnoustrojowej

Model ortotopowego przeszczepu nerki u szczurów przyczynia się do zbadania mechanizmu odrzucania alloprzeszczepu nerki. Obecny model zwiększa przeżywalność biorców bez zakłóceń w ukrwieniu i refluksu żylnego dolnej części ciała za pomocą zespolenia end-to-end implantacji nerki oraz metody "tunelowej" zespolenia moczowód-pęcherz moczowy.

Ortotopowy model przeszczepu nerki u szczura do odrzucania alloprzeszczepu nerki

To badanie demonstruje powtarzalną technikę heterotopowego przeszczepu serca w jamie brzusznej u szczurów, którą początkujący mogą nauczyć się i wykonywać. Dodatkowo, nowy model niedomykalności zastawki aortalnej u szczurów jest generowany poprzez wykonanie heterotopowego przeszczepu serca w jamie brzusznej i uszkodzenie zastawki aortalnej dawcy za pomocą prowadnika po pobraniu.

Zmodyfikowany heterotopowy przeszczep serca w jamie brzusznej i nowy model niedomykalności zastawki aortalnej u szczurów

Ta praca przedstawia zwierzęcy model zwłóknienia wywołanego przejściem śródbłonka do mezenchymalnego, obserwowanego w wrodzonych wadach serca, takich jak krytyczne zwężenie zastawki aortalnej lub zespół niedorozwoju lewego serca, co pozwala na szczegółową ocenę tkanki histologicznej, identyfikację regulacyjnych szlaków sygnałowych i testowanie opcji leczenia.

Noworodkowy heterotopowy model przeszczepu serca szczura do badania przejścia ze śródbłonka do mezenchymów

Poznaj ortotopowy przeszczep aorty u szczurów jako model badania przewlekłej waskulopatii przeszczepowej. Metoda umożliwia obserwację neointimy i analizę histopatologiczną.

Ortotopowy przeszczep aorty: model szczurzy do badania rozwoju przewlekłej waskulopatii

Przeglądaj więcej filmów