Ortotopowy przeszczep aorty: model szczura do badania rozwoju przewlekłej waskulopatii
December 4th, 2010
Ten film pokazuje model ortotopowego przeszczepu aorty jako prosty model do badania rozwoju waskulopatii transplantacyjnej (TVP) u szczurów.
Ogólnym celem tej procedury jest ustanowienie dokładnego modelu i łatwo wykonalnej metody badania rozwoju waskulopatii po przeszczepie. Osiąga się to poprzez zastosowanie kombinacji PVG do CI szczepu. Drugim etapem zabiegu jest pobranie aorty dawcy.
Trzecim krokiem procedury jest przygotowanie odbiorcy. Ostatnim etapem zabiegu jest zespolenie aorty dawcy z aortą biorcy. Ostatecznie można uzyskać wyniki, które pokazują powstawanie neointima za pomocą patohistologii.
Cześć, nazywam się Sonya Schwefel i jestem profesorem immunologii transplantacyjnej w Thet Eye Lab w Uniwersyteckim Centrum Kardiologicznym w Hamburgu w Niemczech. A ja nazywam się Manish Duboff. Również z TS Eye Lab.
Moje laboratorium interesuje się immunologią transplantacyjną. W tym filmie przedstawimy Ci ortotopowy model przeszczepu aorty, łatwy i prawidłowy model do badania rozwoju waskulopatii transplantacyjnej u Wesa. Stosujemy tę procedurę w naszym laboratorium do badania przewlekłego odrzucenia w pytaniach sercowo-naczyniowych.
W ortotopowym modelu przeszczepu aorty aortę można łatwo ocenić histologicznie. Ponadto model PVG do CI jest szczególnie przydatny w badaniach waskulopatii transplantacyjnej. Ponieważ ostre odrzucenie naczyń krwionośnych nie jest głównym czynnikiem zakłócającym, a rozwój waskulopatii jest podobny do wyników badań klinicznych.
Więc zacznijmy. Dawcą używanym w tym ortotopowym przeszczepie aorty jest szczur PVG o wadze około 250 do 300 gramów. Po znieczuleniu zwierzęcia należy ogolić włosy na brzuchu i klatce piersiowej.
Połóż szczura na plecach i załóż maskę na nos i usta. Aby utrzymać znieczulenie, należy szeroko zdezynfekować okolice brzucha i klatki piersiowej za pomocą jodu Provo, a następnie 80% etanolu. Następnie sprawdź odruchy zwierzęcia, szczypiąc jego tylne łapy.
Aby potwierdzić, że jest wystarczająco znieczulony. Wykrwawić szczura, otwierając jamę brzuszną i wycinając otwór w aorcie brzucha. Ostrożnie otwórz klatkę piersiową, aby znaleźć zstępującą aortę piersiową.
Wypreparuj aortę piersiową z otaczających tkanek, takich jak nerwy tłuszczowe i przełyk. Wycofaj 1,5-centymetrowy fragment aorty za pomocą acuta bez uszkodzenia tkanek aorty. Dokładnie przeprowadź fuzję przeszczepu aorty zimną solą fizjologiczną i przechowuj przeszczep w temperaturze czterech stopni Celsjusza.
Biorcą tego ortotopowego przeszczepu aorty jest szczur A CI o wadze około 250 do 300 gramów. Aby rozpocząć tę procedurę, ogol okolice brzucha znieczulonego szczura i nałóż maść do oczu, aby zapobiec wysuszeniu oczu podczas znieczulenia. Połóż szczura na plecach i umieść maskę na nos i usta, aby utrzymać znieczulenie.
Następnie zdezynfekuj okolice brzucha za pomocą jodu provo, a następnie 80% etanolu. Po uszczypnięciu tylnych łap, aby upewnić się, że szczur jest wystarczająco znieczulony, otwórz brzuch, wykonując nacięcie brzucha w linii środkowej i oddzielając skórę i mięśnie. Dwa kroki.
Gdy brzuch jest otwarty, umieść jelita w rękawicy z solą fizjologiczną. Zawiń rękawicę wokół jelit, aby zapobiec utracie wilgoci. Usuń tkankę tłuszczową pokrywającą aortę brzuszną.
Rozetnij aortę od okolicy podnerkowej do rozwidlenia, uważając, aby nie uszkodzić gałęzi naczyń. W razie potrzeby podwiązaj gałęzie aorty po wypreparowaniu aorty. Najpierw użyj zacisku mikrochirurgicznego na podnerkowej części aorty, aby zatrzymać przepływ krwi.
Następnie umieść drugi zacisk w pobliżu rozwidlenia aorty. Teraz, gdy przepływ krwi został zatrzymany, usuń krótki odcinek aorty. Następnie weź przeszczep aorty dawcy, który był przechowywany w 0,9% soli fizjologicznej na lodzie.
Skróć go do odpowiedniej długości i umieść w szczelinie w aorcie. Połącz aortę dawczą z aortą biorcy, wykonując osiem szwów bezprolenowych, zaczynając od zespolenia czaszkowego od końca do końca. Po zakończeniu dystalnego zespolenia od końca do końca ostrożnie otwórz dystalny zacisk.
Następnie ostrożnie otwórz zacisk czaszkowy. Na dystalnym końcu aorty powinien być widoczny puls. Teraz przenieś jelita z powrotem do jamy brzusznej i przepłucz jamę brzuszną wstępnie rozgrzaną sterylną solą fizjologiczną.
Zamknij warstwę mięśniową ściany brzucha, uruchamiając sześć zerowych szwów prolinowych. Następnie użyj pięciu zerowych szwów prolinowych, aby zamknąć skórę, gdy szczur jest jeszcze pod narkozą. Wstrzyknąć podskórnie od czterech do pięciu miligramów na kilogram karprofenu.
Umieść zwierzę z powrotem w klatce. Dodaj methimazol do wody pitnej na leki przeciwbólowe przez trzy dni. Po przeszczepie.
Wyniki badań histopatologicznych po 120 dniach zostaną pokazane pod mikroskopem histologicznym. Zdjęcia wyraźnie pokażą rozwój waskulopatii po przeszczepie. Wypracowane zwężenie luminalne zostanie podkreślone za pomocą animacji komputerowej.
Właśnie pokazaliśmy, jak przeprowadzić autotematyczny przeszczep aorty u szczurów. Wykazaliśmy również pomyślny rozwój waskulopatii transplantacyjnej po 120 dniach za pomocą histopatologii. Metoda ta umożliwia badanie początkowego wpływu leków na przewlekłą waskulopatię przeszczepu allogenicznego.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Przegląd
To wideo demonstruje ortotopowy model przeszczepu aortalnego jako prosty model do badania rozwoju przeszczepowej wadliwości naczyń (PVW) u szczurów. Procedura ustanawia dokładny model do badania PVW przy użyciu specyficznej kombinacji szczepów.
Kluczowe komponenty badania
Dziedzina nauki
- Biologia przeszczepów
- Biologia naczyniowa
- Patologia
Tło
- Przeszczepowa wadliwość naczyń jest istotnym powikłaniem w przeszczepach narządów.
- Rozumienie mechanizmów PVW może poprawić wyniki przeszczepów.
- Kombinacja szczepów PVG do CI jest używana dla tego modelu.
- Analiza histologiczna jest krytyczna dla oceny tworzenia się neoincimy.
Cel badania
- Ustanowienie wykonalnej metody badania przeszczepowej wadliwości naczyń.
- Badanie tworzenia się neoincimy w kontrolowanym środowisku.
- Dostarczenie wglądu w patologię odrzucania przeszczepu.
Stosowane metody
- Pobieranie aortalnej tętnicy dawcy z szczepu PVG.
- Przygotowanie szczura odbiorcy do przeszczepu.
- Wykonanie anastomozy aortalnej dawcy z aortalą odbiorcy.
- Przeprowadzenie analizy patohistologicznej do oceny wyników.
Główne wyniki
- Udane ustanowienie ortotopowego modelu przeszczepu aortalnego.
- Obserwacja tworzenia się neoincimy poprzez badanie histologiczne.
- Walidacja modelu do badania przeszczepowej wadliwości naczyń.
- Potencjalne implikacje dla poprawy wyników przeszczepów.
Wnioski
- Ortotopowy model przeszczepu aortalnego jest skuteczny w badaniu PVW.
- Ten model może pomóc w wyjaśnieniu mechanizmów leżących u podstaw odrzucania przeszczepu.
- Dalsze badania mogą prowadzić do ulepszenia strategii terapeutycznych.
Często zadawane pytania
Executive Industry Relevance
The orthotopic aortic transplantation rat model provides a robust platform for studying chronic transplant vasculopathy, a key barrier in long-term graft survival. By enabling direct histological evaluation of vascular changes, this model supports mechanistic de-risking and predictive confidence in preclinical cardiovascular research. Its clinical relevance and reproducibility make it valuable for portfolio decisions in transplant and vascular therapeutic development.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables interrogation of chronic rejection mechanisms in a controlled, disease-relevant system.
- Supports functional validation of targets implicated in transplant vasculopathy.
- Facilitates mechanistic de-risking by isolating chronic vascular injury from acute rejection confounders.
- Provides predictive confidence for downstream therapeutic hypothesis testing.
Screening & Assay Development
- Delivers a validated in vivo platform for evaluating candidate interventions targeting chronic vascular changes.
- Enables standardized histological and quantitative assessment of neointima formation.
- Supports reproducible measurement of luminal narrowing and vascular pathology.
- Prepares biological systems for reliable compound evaluation in chronic rejection settings.
Translational & Preclinical Research
- Aligns with clinical features of chronic allograft vasculopathy, enhancing translational relevance.
- Enables continuity from mechanistic discovery to preclinical validation of anti-vasculopathy strategies.
- Supports risk-adjusted advancement of candidates by modeling clinically observed resistance to immunosuppression.
- Facilitates biomarker development through quantifiable histopathological endpoints.
Pipeline & Workflow Integration
This model bridges early discovery and preclinical validation for chronic vascular rejection, supporting lead identification and translational research in cardiovascular transplantation.
- Discovery Biology: Provides a platform for hypothesis testing and pathway clarification in chronic rejection.
- Screening: Offers reproducible, quantitative readouts of neointima and luminal narrowing for candidate evaluation.
- Analytics: Enables histopathological and morphometric analysis to compare intervention effects.
- Translational Research: Models clinical resistance to immunosuppression, supporting biomarker and therapeutic alignment.
- Enterprise Reuse: Serves as a reusable preclinical model for diverse chronic vasculopathy studies.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence and reduces mechanistic ambiguity in chronic rejection research.
- Operational Value: Standardizes in vivo assessment of vascular pathology and supports reproducibility.
- Strategic Value: Informs go/no-go decisions and reduces late-stage biological risk in transplant portfolios.
- Portfolio Impact: Enables risk-adjusted prioritization of candidates targeting chronic vasculopathy.
Implementation Considerations
- Requires expertise in microsurgical techniques and rodent vascular models.
- Demands access to histopathology and morphometric analysis infrastructure.
- Necessitates cross-team standardization of surgical and analytical protocols.
- Adaptation may be needed for different strain combinations or xenogeneic studies.
- Model is limited to vascular endpoints and may not capture systemic rejection phenomena.
