Drosophila Test kopania i tunelowania: metoda oceny niedotlenienia tkanek u larw much

- Aby ustawić klatkę do pobierania zarodków, użyj płytek agarowych z sokiem winogronowym uzupełnionych świeżą pastą drożdżową i umieść płytki na klatkach zawierających samce i samice much Drosophila o odpowiednim genotypie. Zapach drożdży i soku winogronowego jest atrakcyjny i sprzyja składaniu jaj przez samice. Pozwól na składanie jaj przez określony czas. Następnie usuń dorosłe osobniki i inkubuj płytki zarodkowe przez 24 godziny, aby uzyskać pierwsze larwy w stadium rozwojowym. Następnie delikatnie przenieś kilka pojedynczych larw z talerza z sokiem winogronowym na płytkę testową zawierającą tylko agar, na której wycięto otwór w agarze na środku płytki i wypełniono go pastą drożdżową.

Młode larwy muszą się żywić, aby przybrać na wadze, aby się rozwinąć, więc zakopują się w źródle pożywienia, paście drożdżowej. W miarę rozwoju larwy wchodzą w fazę wędrówki i drążą tunele z dala od pokarmu, aby znaleźć miejsce do przepoczwarzenia. Aby ocenić niedotlenienie, należy zbadać wzorce tunelowania, jakie larwy tworzą w podłożu. Brak lub niewystarczające tunelowanie jest oznaką niedoboru tlenu. W przykładowym protokole zobaczymy, jak skonfigurować test kopania i tunelowania.

- Skonfiguruj