Drosophila In Vivo (Drosophila) in vivo (Drosophila) Obrazowanie wapnia: metoda funkcjonalnego obrazowania aktywności neuronalnej

- Aby wykonać obrazowanie wapnia in vivo w układzie nerwowym Drosophila, należy skupić się na ekspresji genetycznie kodowanego wskaźnika wapnia, takiego jak GCaMP, w interesujących neuronach. Kiedy neurony wystrzeliwują potencjał czynnościowy, szybka depolaryzacja błony powoduje otwarcie kanałów wapniowych bramkowanych napięciem, co prowadzi do napływu zewnątrzkomórkowego wapnia do komórki.

GCaMP jest białkiem fuzyjnym, w którym wzmocnione białko zielonej fluorescencji lub EGFP jest modyfikowane i łączone z fragmentem M13 łańcucha lekkiego miozyny na końcu N oraz z białkiem wiążącym wapń, kalmoduliną, na końcu C. Wapń wiąże się z kalmoduliną, wyzwala zmiany konformacyjne w GCaMP, powodując wzrost fluorescencji białka.

Aby zobrazować zmiany we fluorescencji GCaMP jako wskaźnik aktywności neuronalnej in vivo, należy naświetlić obszar układu nerwowego o przewidywanej aktywności. Następnie użyj mikroskopu fluorescencyjnego, który może uchwycić dynamikę GCaMP i jest wyposażony w konfigurację dostarczania bodźców. Dostarcz bodziec, na przykład zapach, jednocześnie rejestrując fluorescencję GCaMP w reagujących neuronach.

W przykładowym protokole zobaczymy, jak obrazowanie funkcjonalne GCa