Test reakcji ucieczki: metoda badania reakcji larw danio pręgowanego na bodźce dotykowe

- Na początek delikatnie przenieś kilka zarodków na szalkę Petriego zawierającą pożywkę dla zarodków. Teraz przytrzymaj kosmówkę kleszczami i zrób w niej rozdarcie innymi kleszczami.

Następnie delikatnie przepchnij zarodek przez rozdarcie. Usunięcie kosmówki z zarodka przyspiesza jego wzrost i ruch. Aby pozbyć się resztek, przenieś zarodki na inną szalkę Petriego zawierającą pożywkę zarodkową za pomocą pipety Pasteura.

Umieść szalkę Petriego w inkubatorze i pozwól zarodkom rosnąć w temperaturze 28 stopni Celsjusza. Przed eksperymentem ustaw oświetlony stolik mikroskopu wypełnionego wodą na 28 stopni Celsjusza, aby uniknąć jakichkolwiek odchyleń związanych z temperaturą w zachowaniu larw.

Umieść szalkę Petriego na scenie i zamontuj w kamerze nad szalką. Następnie wyśrodkuj zarodek w polu widzenia kamery. Teraz delikatnie dotknij zarodka igłą i nagraj reakcję larwy w oprogramowaniu do nagrywania kamery wideo.

Po otrzymaniu bodźca zarodek wykazuje silną reakcję ucieczki - gwałtowne pływanie wraz z ostrymi zakrętami. Zmierz czas między dotykiem a szczytowym przyspieszeniem larwy podczas ucieczki.

W przykładowym protokole będziemy obserwować reakcję larw danio pręgowanego na bodźce zewnętrzne.

- Aby wykonać test, umieść szalkę Petriego wypełnioną około 25 mililitrami pożywki dla zarodków na oświetlonym stoliku o kontrolowanej temperaturze ustawionej na około 28 stopni Celsjusza. Zamontuj szybką kamerę nad anteną. Uruchom oprogramowanie do nagrywania wideo i ustaw prędkość przechwytywania na 1,000 klatek na sekundę, aby zapewnić uchwycenie dużych prędkości pływania.

Umieść zarodek na środku szalki Petriego, wyraźnie widoczny w polu widzenia. Naciśnij przycisk nagrywania, a następnie dostarcz bodziec mechanosensoryczny, delikatnie dotykając zarodka igłą w czubek głowy.

Zatrzymaj nagrywanie, gdy zarodek wypłynie poza pole widzenia lub powróci do spoczynku.

- Wielokrotne testowanie tych samych larw może prowadzić do przyzwyczajenia lub sprzyjać osłabieniu mięśni w niektórych modelach chorobowych, co skutkuje zmniejszoną reakcją na bodziec dotykowy. Dlatego każdy zarodek powinien być badany tylko raz.