JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Biologia
0 wyświetleń • 2:52 min. • April 30th, 2023
- Na początek hoduj zarodki na 3 szalkach Petriego. Pierwsza z nich to płytka kontrolna, która zawiera roztwór Hanka - zrównoważony roztwór soli. Na drugiej i trzeciej płytce znajduje się roztwór Hanka z potencjalnie neurotoksycznym związkiem w różnych stężeniach.
Związek neurotoksyczny zawarty w roztworze ekspozycyjnym przenika przez zewnętrzną błonę zarodków poprzez bierną dyfuzję i zmienia procesy układu nerwowego, takie jak uwaga, koordynacja i aktywność mięśni. Gdy zarodki rozwiną się w larwy w odpowiednim wieku, przenieś każdą larwę do indywidualnego dołka na 48-dołkowej płytce. Śledź warunki leczenia dla każdego zwierzęcia.
Przenieś płytkę studzienki na platformę nagrywającą i pociągnij pokrywę w dół. Pozwól larwom zaaklimatyzować się przez 10 minut. Ustaw naprzemienne cykle jasnych i ciemnych okresów za pomocą oprogramowania.
Larwy danio pręgowanego zwykle wykazują większy ruch w ciemności i mniejszy ruch w świetle. Zapisać całkowitą odległość przebytą przez larwy grupy kontrolnej i grupy narażenia w każdym okresie. Jeśli związek jest neurotoksyczny, larwy wykazują jeszcze większy ruch w ciemności i świetle niż zwierzęta kontrolne.
W poniższym protokole przeprowadzimy testy behawioralne na larwach danio pręgowanego narażonych na działanie związków neurotoksycznych.
- Co najmniej 2 godziny przed wykonaniem eksperymentu ustaw temperaturę pokojową na 28 stopni Celsjusza i dodaj 800 mikrolitrów roztworu ekspozycyjnego do każdej studzienki 48-dołkowej mikropłytki. Następnie użyj pipety o pojemności 1 mililitra ze zmodyfikowaną końcówką, aby przenieść jedną larwę w 200 mikrolitrach roztworu ekspozycyjnego do każdej studzienki mikropłytki, przygotowując się do eksperymentu z lokomocją, kątem toru.
Po ustawieniu wszystkich parametrów należy ściszyć oświetlenie w pomieszczeniu testowym i pozwolić larwom zaaklimatyzować się w systemie przez 10 minut. Pod koniec okresu aklimatyzacji kliknij przycisk Eksperymentuj i Wykonaj, a następnie utwórz folder, w którym mają zostać zapisane pliki eksperymentalne. Następnie wprowadź nazwę wyniku i kliknij Tło i Start.
Po zakończeniu eksperymentu kliknij Eksperymentuj i zatrzymaj. Następnie należy zwrócić 48-dołkową mikropłytkę z powrotem do inkubatora światła w celu przeprowadzenia kolejnych eksperymentów.