Celowana ablacja wątroby: indukowanie śmierci hepatocytów za pomocą metronidazolu u transgenicznych larw danio pręgowanego

- Rozpuść metronidazol w wodzie jajecznej zawierającej rozpuszczalnik DMSO i dodaj fenylotiomocznik, który zapobiega tworzeniu się pigmentu w zarodkach. Przenieść kilka larw w odpowiednim wieku na płytki zabiegowe i kontrolne. Następnie dodać pożądane stężenie roztworu metronidazolu do płytki testowej i wodę jajeczną zawierającą DMSO do płytki kontrolnej.

Niech larwy na obu płytkach rosną w temperaturze 28 stopni Celsjusza. Transgeniczne larwy wytwarzają nitroreduktazę tylko w hepatocytach, która przekształca metronidazol w lek cytotoksyczny, powodując śmierć tylko docelowych hepatocytów. Po leczeniu należy usunąć roztwór metronidazolu z płytki zabiegowej i umyć zarodki wodą z jaj.

Dodaj trikainę, aby znieczulić larwy i zbadaj je pod mikroskopem epifluorescencyjnym pod kątem ciężkiej ablacji hepatocytów - zniszczenia komórek wątroby. U osób leczonych zaobserwuje się znacznie mniejszą wątrobę niż u osób z grupy kontrolnej. W przykładowym protokole użyjemy metronidazolu do ablacji hepatocytów u transgenicznych larw danio pręgowanego w celu zbadania regeneracji wątroby.

- Przenieś do 100 zarodków na 100-milimetrową szalkę Petriego zawierającą 25 mililitrów wody jajecznej i umieść szal