JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Biologia
0 wyświetleń • 2:57 min. • April 30th, 2023
- Rozpocznij zabieg od umieszczenia znieczulonej dorosłej ryby na stosie chłonnego papieru. Teraz użyj sterylnej żyletki, aby przeciąć płetwę ogonową i szybko przenieś rybę do zbiornika zawierającego świeżą wodę w celu odzyskania zdrowia. Przenieś zacisk ogonowy do czystej rurki zawierającej bufor do lizy. Bufor do lizy zawiera niejonowe detergenty, które rozpuszczają błonę plazmatyczną i błonę jądrową komórki. Bufor zawiera również enzym zwany proteinazą K, który rozkłada białka i umożliwia uwalnianie DNA do lizatu. Rozkłada również nukleazy, chroniąc DNA przed trawieniem nukleazy.
Teraz pozostaw probówki z zaciskami ogonowymi w inkubatorze na noc, aby całkowicie rozbić tkankę w temperaturze 55 stopni Celsjusza z ciągłym obracaniem. Następnie podgrzej probówkę w temperaturze 95 stopni Celsjusza przez 15 minut, aby dezaktywować proteinazę K. Odwiruj probówkę do granulowania niestrawionego materiału i przenieś supernatant zawierający DNA do innej probówki. Dodaj alkohol, aby wytrącić DNA i ponownie odwirować, aby zebrać DNA w postaci osadu. W poniższym protokole wyizolujemy DNA z klipsa ogonowego dorosłego danio pręgowanego i z całego zarodka.
- W dniu przygotowania DNA dodać świeżą
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych