JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Biologia
0 wyświetleń • 4:28 min. • April 30th, 2023
- Najpierw przygotuj agarozę, dodając pożywkę E3, która dostarcza wapń do zdekorionowanych zarodków do stopionej agarozy. Następnie dodaj MS222, aby znieczulić zarodki. Schłodzić mieszankę agarozy do 38 stopni Celsjusza, blisko zastygnięcia. Wybierz kilka zarodków z odkoryzowaną ekspresją białek fluorescencyjnych i przenieś je do mieszanki agarozy.
Następnie całkowicie włóż tłok do szklanej naczynia włosowatej i wyciągnij jeden zarodek, upewniając się, że wchodzi do przodu. Gdy agaroza zastygnie, użyj taśmy, aby utrzymać kapilatę w pozycji pionowej w zlewce zawierającej pożywkę E3. Otwarte dno kapilarne sprzyja wymianie gazowej dla próbki zarodka.
Umieścić kapilar w uchwycie na próbkę mikroskopu fluorescencyjnego z arkuszem światła. Laser tworzy cienki arkusz świetlny, dzięki czemu obiektyw detekcyjny - ustawiony prostopadle do próbki - może uchwycić obraz przekroju poprzecznego. W przykładowym protokole zamontujemy zarodki danio pręgowanego, aby zobrazować rozwijające się oko.
Zacznij od przygotowania agarozy. Rozpuść przygotowaną 1 mililitrową porcję 1% agarozy o niskiej temperaturze topnienia w podłożu E3 w temperaturze 70 stopni Celsjusza. Po około 15 minutach przenieś 600 mikr
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych