JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Biologia
0 wyświetleń • 3:27 min. • April 30th, 2023
- Zacznij od szalki Petriego zawierającej zarodki w pożywce E3. Dodaj trikainę w celu znieczulenia zarodków i fenylotioryn, roztwór PTU, aby zahamować tworzenie się pigmentu. Za pomocą mikroskopu preparacyjnego usuń zarodki.
Za pomocą szklanej pipety przenieś jeden z odkorówkowych zarodków na małą szalkę Petriego z płytkim szklanym dnem pośrodku i usuń nadmiar pożywki. Następnie umieść roztwór agarozy o optymalnym stężeniu, aby zminimalizować zniekształcenia i ruchliwość zarodków, w probówce do mikrofuzy i podgrzej go. Obniż temperaturę do 30 stopni Celsjusza, aby uniknąć uszkodzenia zarodka z powodu ciepła.
Wlej pierwszą warstwę agarozy na zarodek, całkowicie wypełniając płytką studnię. Umieść kolejną szklankę nakrywkową nad studzienką i dodaj do niej 1% agarozy. Druga warstwa utrzymuje szkło nakrywkowe na miejscu.
Gdy agaroza zastygnie, napełnij szalkę Petriego pożywką E3 zawierającą trikainę. Jest to trzecia warstwa, która utrzymuje nawodnienie agarozy i zarodka. W poniższym protokole wykonamy warstwowe mocowanie zarodków danio pręgowanego w celu wydłużenia czasu obrazowania poklatkowego.
- Tuż przed montażem podgrzej roztwór agarozy do 65 stopni Celsjusza, a następnie pozwól mu
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych