JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Biologia
0 wyświetleń • 3:24 min. • April 30th, 2023
- Umieść interesujące nas zarodki w fenylotiomoczniku, PTU, roztworze Ringera, aby zahamować tworzenie pigmentu, które rozpoczyna się po 24 godzinach od zapłodnienia. Dzięki temu rozwijająca się anatomia jest bardziej widoczna, co jest niezbędne do tego zabiegu. Przenieść znieczulony zarodek trikainą do komory obrazowania. Umieść szklane szkiełko na górze i view to pod mikroskopem. Skoncentruj się na aksonie, który ma zostać uszkodzony, który jest widoczny pod laserem o długości 488 nanometrów, ponieważ transgenetycznie wyraża GFP.
Zrób zdjęcie witryny przed zdjęciem. Następnie obejrzyj akson za pomocą lasera o długości 910 nanometrów, który powoduje fluoryzację GFP na czerwono. Zwiększ intensywność tego lasera, aby uszkodzić obszar docelowy bez wpływu na otaczającą tkankę. Ten proces nazywa się aksotomią. Zrób nowe zdjęcie za pomocą pierwszego lasera, aby potwierdzić aksotomię, która wygląda jak rozrzucone szczątki. W poniższym protokole wykonamy aksotomię obwodowych aksonów czuciowych w zarodkach danio pręgowanego za pomocą lasera dwufotonowego.
- Jeśli specjalnie skonstruowany teleskop dwufotonowy nie jest dostępny w Twoim laboratorium, konfokalny mikroskop dwufotonowy Zeiss 510
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych