JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Biologia
0 wyświetleń • 0:04 min. • April 30th, 2023
- U larw danio pręgowanego bodziec wzrokowy może aktywować neurony somatosensoryczne i wywołać reakcję ucieczki. W larwie znajdują się dwa rodzaje takich neuronów, neurony trójdzielne i neurony Rohona-Bearda. Możemy manipulować aktywnością tych neuronów, modyfikując je tak, aby wyrażały transgeniczne kanały jonowe wrażliwe na światło. Takie podejście nazywa się optogenetyką.
Aby wykonać tę technikę, zamontuj transgeniczną larwę stroną grzbietową skierowaną do góry w żelu agarozowym i umieść ją pod mikroskopem preparacyjnym. Za pomocą żyletki odczep część agarozy w kształcie klina od okolic żółtka i ogona. Napełnij ten obszar wodą jajeczną. Odciągnij agarozę od pnia i ogona larwy.
Umieść końcówkę optycznego w pobliżu tułowia, w którym znajduje się ciało komórkowe neuronu Rohon-Beard. Dostarcz impuls niebieskiego światła laserowego. Po wystawieniu na działanie niebieskiego światła transgeniczne wrażliwe na światło kanały jonowe w błonie neuronu otwierają się, umożliwiając wejście jonów, wyzwalając potencjał czynnościowy, który wywołuje reakcję ucieczki. Nagraj zachowanie larwy za pomocą szybkiej kamery.
W przykładowym protokole zamontujemy larwy, aby aktywować neuron Rohon-Beard, wyr
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych