JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Biologia
0 wyświetleń • 3:11 min. • April 30th, 2023
- Neurony rozchodzą impulsy elektryczne za pośrednictwem potencjałów czynnościowych. Gdy neuron jest w stanie spoczynku, następuje wolniejszy odpływ jonów potasu niż napływ jonów sodu, co prowadzi do zmiany potencjału błonowego. Powoduje to otwarcie kanałów jonowych sodu i umożliwienie dopływu jonów sodu, generując impuls elektryczny.
Metoda badania takich czynności w komórce nazywa się elektrofizjologią. Rozpocznij procedurę od włożenia końcówki elektrody wtórnej do nozdrza dorosłego danio pręgowanego. Następnie umieść elektrody pierwotne powierzchownie, w odsłoniętej tektum optycznej, aby zmierzyć zewnątrzkomórkową aktywność neuronalną.
Elektroda pierwotna mierzy potencjał błony zewnątrzkomórkowej wszystkich otaczających ją komórek. Sygnał reprezentuje połączony potencjał błonowy wszystkich tych komórek. Elektroda wykrywa sygnał i przesyła go do wzmacniacza - oscyloskopu - który przedstawia wizualny obraz potencjału membrany, oraz do komputera.
Obserwuj odczyty i analizuj różnicę elektryczną między elektrodą pierwotną i wtórną. Pomiar elektrofizjologiczny jest porównaniem. W przykładowym protokole zmierzymy wpływ związków farmakologicznych na aktywność neuronalną u dorosłego danio pręgowanego.
- W celu rejestracji elektrofizjologii należy zamknąć zawór odcinający intubację i szybko odłączyć zamek Leur łączący podstawę intubacyjną z kroplówką trykainową. Przenieś nienaruszony zestaw do intubacji do mikroskopu elektrofizjologicznego i podłącz go do systemu perfuzyjnego. Włącz wodę w siedlisku i perfuzjuj z szybkością 1 mililitra na minutę przez około godzinę, aby wypłukać tricainę.
Za pomocą mikromanipulatora ustaw elektrodę wtórną tak, aby końcówka elektrody mogła zostać włożona do nozdrza zwierzęcia lub do zagłębienia pod górną szczęką. Następnie należy wprowadzić igłę elektrody pierwotnej do otworu kraniotomii. Następnie wbij igłę w tkankę, tak aby końcówka była umieszczona dość powierzchownie w osłonie optycznej.
Głębsze pozycje elektrody mogą skutkować słabym sygnałem elektrycznym. Do zbierania danych używany jest tryb bezprzerwowy z częstotliwością próbkowania 5 000 Hz, wraz z filtrem dolnoprzepustowym 0,1 kiloherca i filtrem górnoprzepustowym 1 herca. Rejestrację aktywności elektrofizjologicznej należy rozpocząć, gdy woda w siedlisku ulegnie przenikaniu przez co najmniej 45 minut. Zapisuj wartość wyjściową natywnej aktywności przez co najmniej 15 minut przed dodaniem eksperymentalnych leków.