Wstrzyknięcie domięśniowe (IM): Podanie związku do mięśnia grzbietowego dorosłego danio pręgowanego

- Przenieś znieczuloną rybę trykainą na mokrą gąbkę stroną grzbietową skierowaną do góry. Umieść gąbkę z rybą pod mikroskopem. Umieścić igłę do mikroiniekcji pod kątem 45 stopni od osi ciała w pobliżu mięśnia grzbietowego.

Następnie zlokalizuj miejsce przed płetwą grzbietową, które nie jest pokryte łuskami, w które możesz włożyć igłę bez użycia dużej siły. Następnie delikatnie włóż igłę i powoli wstrzyknij interesujący nas związek wraz z markerem, takim jak czerwień fenolowa, do mięśnia.

Jeśli interesujący nas związek zawiera materiał genetyczny, należy elektroporować komórki, umieszczając elektrody po obu stronach miejsca wstrzyknięcia i podając prąd. Prąd sprawia, że komórki mięśniowe są przepuszczalne i zdolne do sprawnego pobierania materiału genetycznego. Po zabiegu natychmiast przenieś rybę do zbiornika regeneracyjnego. W poniższym protokole wykonamy wstrzyknięcie domięśniowe dorosłemu danio pręgowanemu, aby dostarczyć szczepionkę DNA przeciwko mykobakteriozie.

Aby utrzymać rybę w ustalonej pozycji podczas wstrzykiwania, należy użyć kawałka gąbki z rowkiem wyciętym pośrodku jako wyściółka. Dokładnie namocz gąbkę w wodzie systemowej i umieść ją na szalce Petriego. Za pomocą pl