JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Biologia
0 wyświetleń • 3:58 min. • April 30th, 2023
- Umieść dwie samice i dwa samce ryb w podzielonym zbiorniku hodowlanym na noc przed wstrzyknięciem. Następnego ranka zdejmij przegrodę i pozwól rybom rozmnażać się, aż zauważysz jaja na dnie zbiornika. Zbierz jaja i umyj je pożywką E3 zawierającą błękit metylenowy, środek grzybobójczy. Obserwuj jaja pod mikroskopem i usuń niezapłodnione jaja. Jaja niezapłodnione mają przezroczystą błonę żółtka, podczas gdy jaja zapłodnione mają ciemną błonę żółtka.
Przechowywać 10 zarodków na oddzielnej szalce Petriego jako niewstrzykiwane grupy kontrolne. Za pomocą pipety transferowej wyrównaj zarodki w korycie płytki do mikroiniekcji w temperaturze pokojowej i umieść je pod mikroskopem. Delikatnie wepchnąć igłę do mikroiniekcji przez kosmówkę do żółtka i powoli wstrzyknąć interesujący związek zawierający marker, taki jak czerwień fenolowa. Przepływ cytoplazmatyczny umożliwia dyfuzję związku do komórek embrionalnych.
Po wstrzyknięciu hodować zarodki w pożywce E3 z błękitem metylenowym w temperaturze 28 stopni Celsjusza. Sprawdzaj stan zdrowia zarodków. Usuń wszelkie martwe lub nieprawidłowo rozwijające się zarodki i codziennie zmieniaj podłoże. W poniższym protokole użyjemy mikroiniekcji, aby dos
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych