JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Biologia
0 wyświetleń • 3:54 min. • April 30th, 2023
- Umieść uśpioną rybę na łóżku sekcyjnym i użyj ostrza chirurgicznego, aby odciąć głowę ryby na poziomie skrzeli. Przytrzymaj głowę brzuszną stroną skierowaną do góry i usuń tkanki miękkie, aż zobaczysz skrzyżowanie wzrokowe, strukturę zbudowaną z nerwów wzrokowych, która łączy mózg z oczami.
Przetnij nerwy wzrokowe i usuń oczy. Teraz ustaw rybę stroną grzbietową skierowaną do góry i usuń części czaszki, aby odizolować mózg. Przenieś mózg na szalkę Petriego zawierającą pożywkę do preparacji, aby utrzymać stałe pH tkanki. Obserwuj części mózgu.
Opuszki węchowe to para struktur na przednim końcu połączonych z narządami węchowymi, które wykrywają sygnały zapachowe. Kresomózgowie obejmuje obszary związane z pamięcią. Habenula przekazuje informacje z kresomózgowia do innych części mózgu.
Tectum optyczne jest centrum przetwarzania informacji sensorycznej. Móżdżek odgrywa rolę w somatycznych funkcjach motorycznych i równowadze. A rdzeń przekazuje informacje z rdzenia kręgowego do mózgu. W poniższym protokole odizolujemy mózg od dorosłego danio pręgowanego, aby zebrać nerwowe komórki macierzyste z różnych regionów.
Na początek przygotuj łoże preparacyjne, wypełniając szalkę Petriego okładami żelowymi. Następnie przykryj naczynie odpowiednią pokrywką i inkubuj w temperaturze minus 20 stopni Celsjusza. Po zamrożeniu żelu wyjmij naczynie z zamrażarki i umieść czysty kwadrat bibuły filtracyjnej na jego pokrywie. Przystąp do owijania zarówno papieru, jak i naczynia folią z tworzywa sztucznego.
Następnie potraktuj wszystkie narzędzia do mikropreparacji 70% etanolem. Umieść te wysterylizowane narzędzia obok mikroskopu preparacyjnego i umieść gotowe łoże preparacyjne pod mikroskopem z oświetleniem światłowodowym. Natychmiast umieść wcześniej przygotowany preparat głowy na łóżku preparacyjnym i ustaw go tak, aby jego grzbietowa strona była skierowana w dół.
Następnie użyj nożyczek, aby wykonać podłużne cięcie przez tkankę miękką od tyłu głowy do ust. Następnie odsłoń podstawę czaszki kleszczami i usuń całą sąsiednią tkankę. Następnie przetnij jedną z bocznych ścian czaszki, zaczynając od tyłu głowy i przesuwając się w kierunku obszaru tectum mózgu. Powtórz ten proces dla strony przeciwnej. Przystąp do przecięcia nerwu wzrokowego. A następnie usuń dwie boczne najbardziej boczne strony czaszki na poziomie tectum
Na koniec odwróć głowę brzuszną stroną do góry. A za pomocą kleszczy oderwij najbardziej wierzchołkową część czaszki, aby odsłonić mózg. Następnie przenieś mózg i wszelkie pozostałe części czaszki do naczynia zawierającego pożywkę separacyjną, która składa się z DMM F12 uzupełnionego penicyliną streptomycyną. Za pomocą plastikowej rękojeści mikronoża pod mikroskopem oczyść tkankę mózgową, uważając, aby nie uszkodzić żadnych struktur nerwowych. Użyj maksymalnie dwóch mózgów danio pręgowanego, aby wygenerować neurosfery pochodzące z całego mózgu.