Wytwarzanie mammosfer pierwotnych: technika określania siły działania komórek
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 5:07 min. • April 30th, 2023
Pojedyncza komórka macierzysta raka piersi daje początek skupisku komórek zwanemu pierwotną mammosferą. Aby je uzyskać, należy najpierw wyhodować linię komórkową raka piersi do momentu, aż 70% do 80% zlewa się, aby upewnić się, że komórki są w fazie wzrostu. Dodaj Tripsin-EDTA, aby odłączyć komórki od kolby i dodaj pożywkę z surowicą, aby zatrzymać działanie Tripsin.
Teraz weź komórki do probówki i odwiruj, aby uzyskać osad komórkowy. Zawiesić osad w pożywce mammosfery bez surowicy i przepuścić zawiesinę przez filtr nasadkowy z filtrem siatkowym, aby uzyskać zawiesinę jednokomórkową. Zawiesina ta składa się z komórek macierzystych, komórek progenitorowych i komórek zróżnicowanych wykazujących różne ekspresje białek.
CD44 i CD24 są białkami powierzchniowymi komórek charakterystycznymi dla komórek macierzystych raka piersi. Są dodatnie dla ekspresji CD44 i ujemne dla CD24. Odizolować komórki od zawiesiny komórkowej za pomocą sortowania komórek fluorescencyjnego lub aktywowanego magnetycznie. Następnie weź podwielokrotność i dodaj niebieskie zabarwienie trypana do komórek i oblicz liczbę żywotnych komórek na mililitr za pomocą szkiełka hemocytometru, aby znaleźć gęstość wysiewu.
Na ko
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych