Transdukcja w celu znakowania komórek nowotworowych PDX: wprowadzenie markera fluorescencyjnego eksprymującego lentiwirusa do komórki nowotworowej in vitro
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 3:19 min. • April 30th, 2023
Lentiwirus jest retrowirusem, który zawiera materiał genetyczny RNA. Wirus ten zapewnia skuteczną i stabilną metodę wprowadzania transgenów do linii komórek nowotworowych. Zacznij od dodania neuraminidazy do probówki zawierającej lentiwirusa, który wyraża zielone białko fluorescencyjne lub GFP. Trzymaj probówkę w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez godzinę, aby zwiększyć skuteczność wiązania wirusa.
Następnie odwirować probówkę zawierającą zawiesinę komórek nowotworowych, aby utworzyć osad. Dodaj pożywkę mammosfery zawierającą polibren, aby ponownie zawiesić komórki. Polybrene to polimer kationowy, który zwiększa skuteczność infekcji lentiwirusowych. Teraz umieść optymalną liczbę komórek nowotworowych na studzience na sześciodołkowej płytce do hodowli tkankowej. Dodaj wymaganą ilość lentiwirusa do każdej studzienki płytki hodowlanej.
Zakręć płytką, aby wymieszać zawartość i utrzymuj w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez 96 godzin przy ciągłym dopływie dwutlenku węgla. Lentiwirus wnika do komórki i uwalnia RNA. Odwrotna transkryptaza wirusa przekształca RNA w dwuniciowy DNA, który integruje się z genomem gospodarza. Umieść płytkę pod mikroskopem fluorescencyjnym i monitoruj ko
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych